文摘gydF4y2Ba
每日一次的小说gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂支气管扩张剂药物olodaterol最近被证明是有效的过敏性哮喘患者> 24小时。胆碱能增加语气共同对这些病人可能减少的效果gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂。这可能会提供一个理由联合治疗与olodaterol长效抗胆碱能tiotropium瞄准每日一治疗方案。在豚鼠中,我们评估olodaterol的保护作用,孤独和结合tiotropium,气道反应组胺,这部分由胆碱能反射机制。此外,使用一个急性过敏性哮喘豚鼠模型,我们对合作的影响这些支气管扩张剂allergen-induced早期(EAR)和后期(政治)哮喘反应、气道hyper-responsiveness (AHR)组胺,和气道炎症。这是证明olodaterol的保护作用与histamine-induced支气管收缩表现为协同作用增强,长期在tiotropium面前。此外,tiotropium协同增强的逆转和预防耳后的气道高反应性allergen-induced olodaterol。Olodaterol和tiotropium高效抑制allergen-induced耳朵的大小和守护神,和反应都完全被这些药物的组合。值得一提的是,这些影响并不显著相关影响气道炎性细胞浸润。总之,结果表明,联合治疗与olodaterol tiotropium可能是非常有效的治疗allergen-induced哮喘气道高反应性和反应。gydF4y2Ba
介绍gydF4y2Ba
过敏性哮喘是一种气道的慢性炎性疾病。过敏性哮喘的特征allergen-induced早期(EAR)和后期(政治)哮喘反应,瞬态气道hyper-responsiveness (AHR)这些反应后,和气道炎症。此外,在气道壁结构改变可能发展,与肺功能进行性下降和慢性(气道高反应性gydF4y2BaBousquet et al ., 2000gydF4y2Ba;gydF4y2BaCockcroft和戴维斯,2006年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba穆尔et al ., 2008gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
吸入gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba肾上腺素能受体受体激动剂目前主体支气管扩张剂治疗哮喘(gydF4y2Bawww.ginasthma.orggydF4y2Ba)。短效gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂,如舒喘宁和特布他林,释放被用作治疗的呼吸困难,而长效gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂,如formoterol氟替卡松加沙美特罗,被用作控制器结合治疗持续性哮喘吸入型皮质类固醇激素。根据目前的指导方针,短效抗胆碱能类,如ipratropium氧托,可能被用作替代支气管扩张药缓解症状;然而,这些药物通常是不那么有效gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂(gydF4y2Ba总值2006gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
的bronchodilating有效性gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂由bronchoconstricting代理依赖功能对立。因此,研究在人类(gydF4y2BaRaffestin et al ., 1985gydF4y2Ba;gydF4y2Ba范阿姆斯特丹et al ., 1990gydF4y2Ba)和动物(gydF4y2BaTorphy et al ., 1985gydF4y2Ba;gydF4y2BaVan阿姆斯特丹et al ., 1989 bgydF4y2Ba)气管平滑肌的准备工作已经证明的效力和有效性gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂浓度增加逐渐减少的收缩刺激,包括毒蕈碱的受体受体激动剂和组胺。减少gydF4y2BaβgydF4y2Ba肾上腺素的反应之间重要的是可能归因于相声GgydF4y2Ba问gydF4y2Ba耦合的毒蕈碱的米gydF4y2Ba3gydF4y2Ba或组胺HgydF4y2Ba1gydF4y2Ba受体和GgydF4y2Ba年代gydF4y2Ba耦合gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba-adrenoceptors (gydF4y2BaVan阿姆斯特丹et al ., 1989 bgydF4y2Ba,gydF4y2Ba1990年gydF4y2Ba;gydF4y2BaGrandordy et al ., 1994gydF4y2Ba;gydF4y2Ba穆尔et al ., 2001gydF4y2Ba),可能是通过蛋白激酶C-induced磷酸化gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba肾上腺素能受体和/或GgydF4y2Ba年代gydF4y2Ba(gydF4y2BaSibley和莱夫科维茨,1985年gydF4y2Ba;gydF4y2BaPyne et al ., 1992 agydF4y2Ba,gydF4y2BabgydF4y2Ba;gydF4y2BaBoterman et al ., 2005gydF4y2Ba)。此外,它已经表明,蛋白激酶C的激活增强gydF4y2BaβgydF4y2Ba-agonist-inducedgydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba肾上腺素能受体脱敏气管平滑肌(gydF4y2BaBoterman et al ., 2006gydF4y2Ba),这可能包括磷酸化和激活G-protein-coupled受体激酶2 (gydF4y2Ba壮族et al ., 1995gydF4y2Ba,gydF4y2Ba1996年gydF4y2Ba)。减少的证据gydF4y2BaβgydF4y2Ba收缩浓度增加肾上腺素的反应的受体激动剂也被观察到体内(gydF4y2BaJenne et al ., 1987gydF4y2Ba),可以很好的解释为什么gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂严重哮喘发作期间变得不那么有效。gydF4y2Ba
因为胆碱能的基调是增加哮喘(gydF4y2BaGosens et al ., 2006gydF4y2Ba),抗胆碱能类可能会减弱支气管狭窄和加强gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba-agonist-induced bronchodilation缓解胆碱能抑制gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba肾上腺素能受体的功能。这提供了一个强有力的理由联合治疗gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂、抗胆碱能类疾病。在支持,它曾被证明与短效抗胆碱能类和治疗gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂能在急性严重哮喘通过改善肺功能,减少发作的风险和住院(gydF4y2Ba车道et al ., 1998gydF4y2Ba;gydF4y2Ba罗德里戈et al ., 1999gydF4y2Ba)。此外,最近的研究表明,每日一次长效抗胆碱能tiotropium改善肺功能和减少严重哮喘患者发作不是由标准维持治疗(gydF4y2BaPeters等人。,2010年gydF4y2Ba;gydF4y2BaKerstjens et al ., 2011gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2012年gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
联合治疗与长效每日一次gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂、抗胆碱能类可能是有利的在改善气流在24小时内,从而尽可能地简化治疗方案。这种联合治疗在哮喘的影响目前未知。在目前的研究中,我们评估的影响小说每天换一次gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂olodaterol (gydF4y2Ba奥伯et al ., 2009gydF4y2Ba;gydF4y2BaBouyssou et al ., 2010 agydF4y2Ba,gydF4y2BabgydF4y2Ba;gydF4y2BaCasarosa et al ., 2011gydF4y2Ba;gydF4y2Ba范Noord et al ., 2011gydF4y2Ba),单独和结合tiotropium allergen-induced耳朵,守护神,,气道高反应性和气道炎症,使用一个急性过敏性哮喘豚鼠模型。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
动物gydF4y2Ba
远,男,指定无菌邓肯哈特利豚鼠(哈伦,希斯菲尔德,英国),重约250克,被用于这项研究。用于过敏性哮喘动物模型积极IgE-sensitized卵白蛋白(OVA)如前所述(gydF4y2Ba范阿姆斯特丹et al ., 1989 agydF4y2Ba)。简而言之,0.5毫升的过敏原的解决方案包含100gydF4y2BaμgydF4y2Bag / ml卵子和100毫克/毫升Al (OH)gydF4y2Ba3gydF4y2Ba在生理盐水腹腔注射,而另一个0.5毫升分歧七皮下注射部位邻近的淋巴结在爪子,腰部和颈部。敏化两周后,这些动物手术提供一个气球导管胸腔,如下面。输入的动物实验协议敏化后4 - 8周。格罗宁根大学的协议描述都是通过动物实验委员会。gydF4y2Ba
测量气道功能gydF4y2Ba
气道功能评估的在线测量胸腔压力(gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba如先前所描述的那样)在有意识的和无限制的条件下(gydF4y2Ba桑特et al ., 1992gydF4y2Ba;gydF4y2Ba穆尔et al ., 2006gydF4y2Ba)。简而言之,一个小充满液体乳胶气球导管胸腔内置入。套管的自由端被皮下注射到动物的脖子暴露和永久连接。通过外部盐水填充插管,胸膜腔内球囊导管连接到压力传感器(TXX-R;Viggo-Spectramed Bilthoven荷兰),gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba使用在线连续测量计算机系统。利用相结合的流量测量pneumotachograph植入在胸膜腔内球囊导管、气管和压力测量之前显示的变化gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba气道阻力的变化是线性相关,因此可以用作敏感指数过敏原,histamine-induced支气管狭窄(gydF4y2Ba桑特et al ., 1992gydF4y2Ba)。通过这种方式,气道功能可以持续监控和反复的时间太长,而动物没有意识到被测量。gydF4y2Ba
挑衅gydF4y2Ba
组胺和卵子挑衅进行雾化吸入的解决方案。这些挑衅行为进行了在一个特别设计的有机玻璃笼子里的9升豚鼠可以自由移动,如前所述(gydF4y2Ba桑特et al ., 1992gydF4y2Ba;gydF4y2Ba穆尔et al ., 2006gydF4y2Ba)。一个DeVilbiss喷雾器(646型)的气流驱动8 l / min提供一个输出的气溶胶0.33 ml / min。动物实验条件和挑衅就可适应过程至少1周后手术术前体重恢复时,前面描述的(gydF4y2Ba穆尔et al ., 2006gydF4y2Ba)。在实验的日子习惯化过程后,组胺和过敏原挑衅进行如下所述。挑衅行为都是之前至少30分钟的适应期,紧随其后的是一个控制挑衅与生理盐水持续3分钟。一个基线gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba值计算的平均值gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba值的最后20分钟的适应时期。gydF4y2Ba
评估气道反应性组胺,随后的挑衅与浓度增加步骤(3.13,6.25,12.5,25岁,50岁,75年,100年,125年,150年,175年和200年gydF4y2BaμgydF4y2Ba克/毫升,800gydF4y2BaμgydF4y2Ba使用50 g / mlgydF4y2BaμgydF4y2Ba在盐水进行g / ml的步骤)。组胺挑衅最大持续了3分钟,交汇处间隔隔开。动物被挑战,直到gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba增加了> 100%以上基线连续至少3分钟。组胺引起的挑衅浓度增加100%gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba(电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba线性插值)派生的浓度gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba曲线,并对组胺作为气道反应性的一个索引。gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba回到基线后15分钟内最后一组胺挑衅。gydF4y2Ba
吸入过敏原挑衅进行0.05%盐水的卵子。卵巢吸入时停止呼吸窘迫的最初迹象是观察和增加gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba> 100%。当这没有发生在3分钟,0.1%卵子在盐水随后使用的解决方案。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗gydF4y2Ba
动物麻醉与戊巴比妥(Euthasol 20%),腹腔内管理。气管被曝光和空心,肺灌洗轻轻地用5毫升无菌生理盐水在37°C,紧随其后的是三个后续整除的8毫升的盐水。恢复的支气管肺泡灌洗(BAL)样本保存在冰和离心机,享年200岁gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟4°C。颗粒结合,resuspended最后一卷1.0毫升的磷酸盐(PBS)和细胞总数计算使用卡西细胞计数器(模型TT;Innovatis Reutlingen,德国)。细胞学检查,cytospin准备染色May-Grunwald和吉姆沙染色剂。细胞分化是由数至少400细胞复制。gydF4y2Ba
Tiotropium Olodaterol保护的影响,及其对基底的组合气道反应组胺gydF4y2Ba
PBS和药物对基底建立了组胺反应的影响。三十分钟后评估基础组胺的电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2BaPBS的气溶胶(控制)或10,100年或1000年gydF4y2BaμgydF4y2Ba米或10毫米(喷雾器浓度)olodaterol PBS吸入了3分钟。在这些吸入组胺的电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba价值观重新评估0.5,2、6、12、24小时后建立的剂量和时间影响olodaterol组胺反应。同样,100年的影响gydF4y2BaμgydF4y2BaM tiotropium(3分钟)和1000年的组合gydF4y2BaμgydF4y2Baolodaterol + 100gydF4y2BaμgydF4y2Ba建立了M tiotropium(3分钟)为0.5,6,24小时后吸入药物的调查由tiotropium olodaterol效应的增强作用。一剂100gydF4y2BaμgydF4y2BaM tiotropium(3分钟)被选中,因为之前的研究表明,这个剂量是有效地衰减allergen-induced气道炎症和重塑在慢性过敏性哮喘豚鼠模型(gydF4y2BaGosens et al ., 2005gydF4y2Ba;gydF4y2BaBos et al ., 2007gydF4y2Ba),而1000年gydF4y2BaμgydF4y2BaM olodaterol轻快(3分钟)显示一个高频效应与保护研究gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂(见gydF4y2Ba结果gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
逆转Allergen-Induced的AHR Olodaterol、Tiotropium和他们的组合gydF4y2Ba
组胺的电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba价值评估卵巢挑战(基底)前24小时和5小时后过敏原挑战耳后气道高反应性评估。PBS, 1000gydF4y2BaμgydF4y2BaM olodaterol,和/或100gydF4y2BaμgydF4y2BaM tiotropium(喷雾器的浓度,3分钟)吸入过敏原后5.5小时挑战,和气道反应重新评估在6.5小时测量allergen-induced AHR的可逆性。此外,组胺的电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba值确定过敏原挑战建立治疗后24小时内对政治后气道高反应性的影响。gydF4y2Ba
预防Allergen-Induced AHR,耳朵,守护神,气道炎症由Olodaterol Tiotropium,他们的组合gydF4y2Ba
过敏原的挑战进行两次,间隔1周。第一次,组胺敏感性(PCgydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba)是评估前24小时卵子的挑战。1小时前过敏原的挑战,这些动物吸入治疗PBS(3分钟)。随后,卵子的动物被挑战,直到第一个障碍是可见的和的迹象gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba增加了> 100%建立每个动物过敏原的敏感性。这个协议是重复1星期后,但现在这些动物吸入治疗PBS(3分钟),tiotropium (100gydF4y2BaμgydF4y2Baolodaterol(1000米)gydF4y2BaμgydF4y2Ba米),或者olodaterol(1000的结合gydF4y2BaμgydF4y2Ba和tiotropium(100米)gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)(喷雾器的浓度,3分钟)1小时前过敏原的挑战。接受pbs控制动物,2-fold-higher卵子浓度与平均所需的第一个挑战是获得气道阻塞,因为小过敏原脱敏。基于此控制,2-fold-higher卵子浓度相比第一周也用于tiotropium, olodaterol和tiotropium / olodaterol-treated动物。之所以选择这种方法来减少个人间的变化敏感性的影响过敏原。定量评估后的耳朵和守护神的各种治疗,气道功能是连续测量在整个过程。耳朵的大小和守护神下计算等领域gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba时间响应曲线介于0和5个小时,8至24小时,分别使用梯形集成的百分比gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba随离散变化5分钟的间隔。落下帷幕了25小时后过敏原的挑战。动物的挑战与生理盐水和对待PBS两次担任控制。gydF4y2Ba
化学物质。gydF4y2Ba
组胺盐酸盐、卵巢(三级)和May-Grunwald和染色所得Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州)。氢氧化铝是和光纯化学工业获得kouichi(日本大阪)。Euthasol购买从Produlab制药(Raamsdonksveer、荷兰)。(1gydF4y2BaRgydF4y2Ba,2gydF4y2BaRgydF4y2Ba4gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba,5gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba7gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba)7 -二羟基(di-2-thienyl)乙酰氧基]9日9-dimethyl-3-oxa-9-azoniatricyclo [3.3.1.0gydF4y2Ba2、4gydF4y2Ba]壬烷(tiotropium)和6-hydroxy-8 - [(1gydF4y2BaRgydF4y2Ba)1-hydroxy-2 - [(2 - (4-methoxyphenyl), 1,1 -二甲基乙基)氨基)乙基]2gydF4y2BaHgydF4y2Ba1,4-benzoxazin-3 (4gydF4y2BaHgydF4y2Ba)——monohydrochloride (olodaterol)提供的勃林格殷格翰集团GmbH(殷格翰集团、德国)。gydF4y2Ba
数据分析。gydF4y2Ba
所有数据都表示为意味着±S.E.M.统计评价的差异进行使用(重复测量方差分析)与Newman-Keuls事后考验。tiotropium之间合作和olodaterol计算,通过比较计算的和个人的影响药物联合治疗的测量效果,使用学生的gydF4y2BatgydF4y2Ba测试。时被认为是具有统计学意义的差异gydF4y2BaPgydF4y2Ba< 0.05。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
基底上Olodaterol组胺反应的保护作用是通过Tiotropium增强和延长增效剂。gydF4y2Ba
tiotropium olodaterol的保护作用,及其对基底的结合中演示了组胺反应gydF4y2Ba无花果。1gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。Olodaterol防止histamine-induced气道阻塞的剂量和时间的方式(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)。最大保护获得了0.5小时后治疗和范围从2.7±0.2为10倍gydF4y2BaμgydF4y2BaM 7.0±0.2倍为10毫米olodaterol(吸入喷雾器的浓度,3分钟)。bronchoprotection的时间是10到2小时gydF4y2BaμgydF4y2Ba米(2.0±0.2倍)> 24小时10毫米olodaterol在24小时(2.0±0.3倍)。PBS吸气(3分钟)对组胺的电脑没有影响gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba值在不同的时间点(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
Cotreatment tiotropium (100gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,3分钟),对组胺的影响只有一个小的电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba本身的保护作用和持续时间明显提高动作轻快的高频剂量的olodaterol (1000gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,3分钟)以协同的方式(gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba),这表明内源性乙酰胆碱释放明显变弱gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂支气管扩张剂的活动。gydF4y2Ba
耳后的气道高反应性的逆转Allergen-Induced Olodaterol由Tiotropium表现为协同作用增强。gydF4y2Ba
在gydF4y2Ba无花果。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba气道高反应性,建立的逆转被olodaterol耳朵之后,tiotropium,他们的组合。过敏原挑战组胺诱发气道高反应性平均8.4±1.2倍减少电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba5个小时后(也就是挑战。后,耳朵)。PBS的被吸入影响气道高反应性allergen-induced挑战(5.5小时后gydF4y2Ba3无花果。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。相比之下,治疗olodaterol (1000gydF4y2BaμgydF4y2BaM,过敏原后3分钟)5.5小时挑战强烈反转后的AHR耳朵(11.4±3.1倍gydF4y2Ba增加gydF4y2Ba在个人电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba;gydF4y2Ba无花果3 c。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。Tiotropium (100gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,3分钟),稍微扭转的AHR本身(2.4±0.5倍;gydF4y2Ba无花果3 b。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba),表现为协同作用增强的影响olodaterol 21.0±2.3倍(gydF4y2Ba无花果3 d。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。政治后,接受pbs动物仍极度反应器(2.3±0.7倍减少电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba;gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba)。Tiotropium(鉴于过敏原后5.5小时挑战)并不影响这个(气道高反应性gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba),而olodaterol,没有tiotropium,还是完全保护(gydF4y2Ba图3 C和DgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
耳后的气道高反应性防止Allergen-Induced Olodaterol协同增强Tiotropium。gydF4y2Ba
耳后的气道高反应性防止allergen-induced和守护神预处理过敏原的挑战是在之前与支气管扩张剂gydF4y2Ba无花果。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。确定olodaterol(1000的保护作用gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,3分钟),tiotropium (100gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,3分钟),他们的组合对allergen-induced AHR的发展,药物吸入过敏原前1小时的挑战。在接受pbs动物(控制),过敏原挑战气道高反应性诱导组胺在两耳(4.9±1.2倍减少电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba政治)和(2.8±1.3倍下降;gydF4y2Ba5无花果。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。耳后的AHR缺席在动物对待olodaterol(2.3±0.2倍gydF4y2Ba增加gydF4y2Ba在个人电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba相比之下,基底;gydF4y2Ba无花果。5度gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)或tiotropium(1.3±0.2倍gydF4y2Ba增加gydF4y2Ba;gydF4y2Ba无花果5 b。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。结合时,协同4.8±0.5倍gydF4y2Ba增加gydF4y2Ba在个人电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba观察(gydF4y2Ba无花果5 d。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。政治之后,仍然是完全受olodaterol保护气道高反应性,tiotropium,他们的组合(1.5±0.2、1.3±0.1、1.6±0.2倍gydF4y2Ba增加gydF4y2Ba在个人电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba分别;gydF4y2Ba无花果。5,罪犯gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba);然而,合作不再是观察。没有观察到气道反应性的变化在接受pbs, saline-challenged动物(gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
防止Allergen-Induced耳朵和Olodaterol守护神,Tiotropium,他们的组合。gydF4y2Ba
图7gydF4y2Batiotropium演示olodaterol的影响,他们的组合allergen-induced耳朵和守护神,定义为auc的gydF4y2BaPgydF4y2BaplgydF4y2Ba时间响应曲线介于0和5个小时,8至24小时后过敏原的挑战,分别。作为演示,卵子的挑战接受pbs动物造成显著的耳朵和守护神。耳朵和政治在很大程度上抑制tiotropium和olodaterol。值得注意的是,完全抑制这些反应造成的组合(gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
Olodaterol无显著影响,Tiotropium,他们的组合在气道炎性细胞浸润。gydF4y2Ba
过敏原挑战诱导显著总炎症细胞的浸润落下帷幕后的守护神(gydF4y2Ba图8gydF4y2Ba)。观察尤其是嗜酸性粒细胞和巨噬细胞的数量增加(gydF4y2Ba图8 bgydF4y2Ba),而中性粒细胞的数量(gydF4y2Ba图8 bgydF4y2Ba)以及淋巴细胞和上皮细胞(图中未显示)没有显著改变。和分化细胞总数在球没有显著影响的任何治疗方法(gydF4y2Ba图8,A和BgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
在这项研究中,我们表明,长效抗胆碱能tiotropium协同增强了小说的保护作用长效每日一次gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂olodaterol基底在豚鼠组胺反应。这一发现表明,内生,histamine-induced,乙酰胆碱释放明显变弱gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂反应,毒蕈碱的受体和之间的串音gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba-adrenoceptors可能参与其中。因此,在急性过敏性哮喘豚鼠模型,tiotropium协同增强的逆转和预防allergen-induced AHR olodaterol组织胺耳后。此外,olodaterol tiotropium,他们的组合非常有效地抑制allergen-induced耳朵和守护神而不影响炎症细胞浸润的航空公司。gydF4y2Ba
一个明确的剂量和时间保护histamine-induced气道收缩olodaterol被发现。单剂量的10毫米(喷雾器浓度,3分钟),观察∼7倍的保护后30分钟,而行动是> 24小时的持续时间。我们的数据与先前的报告相对应的保护存在剂量依赖的相关性对乙酰甲胆碱> 24小时在几内亚猪,狗和人(gydF4y2Ba奥伯et al ., 2009gydF4y2Ba;gydF4y2BaBouyssou et al ., 2010 agydF4y2Ba)。此外,olodaterol引起剂量和时间bronchodilation长达24小时在慢性阻塞性肺疾病患者(gydF4y2Ba范Noord et al ., 2011gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
Olodaterol (1000gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)也被证明是非常有效的扭转allergen-induced AHR耳朵后组胺增加电脑,“碳足迹”(∼11倍gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba6.5小时后过敏原挑战)。在类似的设置中,我们之前证明临床相关的剂量的2.5毫米舒喘灵(喷雾器浓度,3分钟)也逆转allergen-induced AHR在豚鼠组胺,虽然影响较小(∼PC三倍增加gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba)(gydF4y2BaWesterhof et al ., 2005gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
因为胆碱能活性增加在过敏性哮喘(gydF4y2BaGosens et al ., 2006gydF4y2Ba),难怪olodaterol之间更明显的协同作用和逆转tiotropium allergen-induced AHR的组胺被发现比抑制组胺反应的基本条件。因此,tiotropium浓度(100gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)这本身仅略逆转后的AHR olodaterol耳朵协同增强效应(1000gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)电脑21-fold增加近2倍gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba。值得注意的是,olodaterol-with过敏原挑衅和没有tiotropium-administered 5.5小时后气道高反应性逆转后,耳后仍有效地防止AHR守护神挑战后(24小时),确认其长期的行动。gydF4y2Ba
当吸入过敏原挑战前,olodaterol也非常有效,导致相当大的防止allergen-induced耳和守护神,气道高反应性,以及之后的反应。然而,细胞渗透政治落下帷幕后,并没有受到影响。这些发现与先前的发现与对应好舒喘灵地吸入在我们的模型中(gydF4y2BaWesterhof et al ., 2005gydF4y2Ba),尽管如此,正如所预期的那样,长效的影响olodaterol allergen-induced哮喘气道高反应性反应和在本研究更明显。gydF4y2Ba
引人注目,与小气道高反应性逆转allergen-induced tiotropium耳朵后,预处理具有相同剂量的抗胆碱能(100gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,3分钟)完全预防耳后气道高反应性的发展,这表明nonbronchodilatory, tiotropium抗炎作用可能参与其中。这同样适用于后的AHR守护神。虽然炎症细胞浸润在球后(以25小时过敏原挑战)似乎并没有意识到被tiotropium抑制,不能排除,抑制炎症或结构细胞中介发布的航空公司可能涉及(gydF4y2BaKistemaker et al ., 2012gydF4y2Ba)。有趣的是,证据nonbronchodilating tiotropium AHR,效果评估的电场电极刺激诱发的迷走神经刺激,最近还发现了gydF4y2BaBuels et al。(2012)gydF4y2Ba。同样,这不是与炎性细胞数量的变化在落下帷幕。值得注意的是,然而,似乎有一个减少迷走神经nerve-associated气道嗜酸性粒细胞的组织,这可能是参与减少迷走神经hyper-responsiveness tiotropium (gydF4y2BaBuels et al ., 2012gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
也感兴趣的tiotropium显著抑制政治而不影响引起的炎性细胞浸润在落下帷幕。守护神的抑制与最近的观察大鼠(gydF4y2BaRaemdonck et al ., 2012gydF4y2Ba),这表明过敏原挑战诱导激活TRPA1频道在守护神感觉神经,导致增强胆碱能反射支气管收缩。值得注意的是,抑制tiotropium或其他抗胆碱能的守护神哮喘病人到目前为止没有被报道。gydF4y2Ba
与allergen-induced AHR的逆转,我们发现一个高度的协同效应olodaterol和tiotropium保护allergen-induced AHR耳朵后,当过敏原之前管理的挑战。此外,虽然不协同,这是发现,olodaterol tiotropium,他们的组合完全抑制气道高反应性的守护神。缺乏合作的原因防止后的AHR守护神是未知的,但很可能与一个相对较低的守护神后胆碱能的语气比耳朵后(gydF4y2Ba十Berge et al ., 1995gydF4y2Ba),从而不暴露潜在的合作。然而,从临床的角度来看,保护后的AHR守护神olodaterol和tiotropium,以及他们的组合,是重要的。抑制炎症细胞浸润似乎并没有保护作用的联合治疗,尽管如此,正如上面所讨论的,抑制中介或结构细胞释放的航空公司有可能参与其中。值得注意的是,与目前的单一吸入后观察急性哮喘,allergen-induced抑制炎症细胞浸润后被观察到类似的重复吸入剂量的tiotropium在豚鼠和慢性哮喘小鼠模型(gydF4y2BaBos et al ., 2007gydF4y2Ba;gydF4y2Ba太et al ., 2010gydF4y2Ba)。这显然是长期治疗的相关性的组合tiotropium olodaterol,,需要进一步检查。gydF4y2Ba
olodaterol和tiotropium抑制了耳朵和守护神在相当大的程度上。值得注意的是,甚至完全抑制两种反应观察这些药物的组合。没有观察到合作,然而,由于个人的高效药物来抑制这些反应;低剂量的olodaterol和tiotropium需要证明这种效果。gydF4y2Ba
完全符合我们的观察,表明气管内的应用tiotropium强的抑制性影响每日一次gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba受体激动剂carmoterol急性过敏原、乙酰胆碱、麻醉中histamine-induced支气管,活跃的致敏豚鼠(gydF4y2BaRossoni et al ., 2007gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
总之,olodaterol长效(24小时)有明显保护作用对histamine-induced气道阻塞气道高反应性和allergen-induced组胺在急性过敏性哮喘豚鼠模型。这些反应由tiotropium表现为协同作用增强,表明乙酰胆碱减少的有效性gydF4y2BaβgydF4y2Ba2gydF4y2Ba在这些条件下受体激动剂。此外,olodaterol和tiotropium充分抑制两个耳朵守护神的过敏性哮喘模型。这些发现表明联合治疗与olodaterol tiotropium可能是非常有效的治疗过敏性哮喘。gydF4y2Ba
作者的贡献gydF4y2Ba
参与研究设计:gydF4y2BaMaarsingh、Gosens Zaagsma,穆尔。gydF4y2Ba
进行实验:gydF4y2BaSmit, Zuidhof Bos, Maarsingh。gydF4y2Ba
执行数据分析:gydF4y2BaSmit, Zuidhof Bos, Maarsingh Gosens, Zaagsma,穆尔。gydF4y2Ba
或导致写作手稿中写道:gydF4y2BaSmit, Maarsingh Gosens Zaagsma,穆尔。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2013年8月5日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2013年12月2日。gydF4y2Ba
本研究在经济上支持勃林格殷格翰集团制药GmbH & Co。gydF4y2Ba
缩写gydF4y2Ba
- AHRgydF4y2Ba
- 气道hyper-responsivenessgydF4y2Ba
- 落下帷幕gydF4y2Ba
- 支气管肺泡灌洗gydF4y2Ba
- 耳朵gydF4y2Ba
- 早期哮喘反应gydF4y2Ba
- 守护神gydF4y2Ba
- 后期哮喘反应gydF4y2Ba
- 卵子gydF4y2Ba
- 卵清蛋白gydF4y2Ba
- 美国公共电视台gydF4y2Ba
- 磷酸盐gydF4y2Ba
- 个人电脑gydF4y2BaOne hundred.gydF4y2Ba
- 挑衅的浓度导致胸腔压力增加100%gydF4y2Ba
- PgydF4y2Ba plgydF4y2Ba
- 胸腔的压力gydF4y2Ba
- 版权©2014年药理学和实验治疗的美国社会gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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