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可能依赖于快速、准确诊断技术已证明了自己在去年包含关键SARS-CoV-2感染的传播(1]。即使定量rt - pcr (RT-qPCR)鼻咽拭子(NPS)仍被视为标准COVID19诊断,唾液在几项研究已经评估可能的替代NPS和目前广泛利用在韩国,德国,和日本(2,3]。尽管如此,使用唾液仍在争论,和所需的严格的标准化分析协议大大(4- - - - - -6]。点的应用护理(POC)技术对唾液,能够快速执行高度特异、敏感分子测试,可能是宝贵的,允许诊断也在挑战和远程设置通过简化和加快诊断过程(1]。
评估分子检测的敏感性和特异性唾液NPS相比使用两个不同的POC平台(DiaSorin Simplexa™DiaSorin,柏树,CA,美国——以及造父变星爱视宝®-造父变星,桑尼维尔,美国)我们总共129个人研究。我们前瞻性地收集样品从2021年1月到2021年5月,来自21个无症状的医务工作者,参加COVID19筛选活动,从79年门诊病人谁开发了轻微的症状符合COVID19 10天前预防医学访问单位,COVID19轻度症状门诊病人单位或圣拉斐尔医院的急诊室,米兰。此外,我们从圣拉斐尔医院生物样本检索来自29个病人,为2020年3月COVID19住院。为每一个病人我们分析一个镇定的唾液样本和NPS同时收集的医疗工作者。本研究得到圣拉斐尔医院伦理委员会的批准(协议号:cli - pr - 2020)和所有参与者签署了知情同意。
排斥的样品收集在2020年3月,被储存在取样后立即−80°C,所有样品都保存在4°C和24小时内收集分析。DiaSorin Simplexa™COVID-19直接测试(Simplexa™)进行唾液与生理盐水稀释1:1按说明使用,同样条件下标签用于爱视宝®Xpress SARS-CoV-2工具包(爱视宝®)。NPS分析与爱视宝®Xpress SARS-COV-2或罗氏Cobas®SARS-COV-2 (Cobas®)测试,通过制造商的指示。
唾液样本收集的结果预期在2021年的第一个月,证明对于Simplexa™和爱视宝®特异性为100% (95% CI: 93.9% - -100%)和灵敏度为90.2% (95% CI: 76.8% - -97.2%)相比,NPS的结果。两次测试之间的整体协议进行唾液的98%。
两包采用唾液,以及那些用于NPS,评估不同的靶基因(Simplexa™: Orf1ab年代;爱视宝®:N2和E;Cobas®: E和Orf1ab),我们分析,为共同目标,循环阈值之间的相关性(Ct)检测唾液和NPS值。
我们确定了正相关Ct值检测唾液和NPS Orf1ab,发现通过Simplexa™进行唾液和Cobas®上NPS(肯德尔相关= 0.7704,p < 0.0001)和E(肯德尔相关= 0.7961,p < 0.0001)和N2(肯德尔相关= 0.8311,p < 0.0001),这两个目标的爱视宝®试验进行唾液和NPS (图1一个)。
因此,NPS相比,测试新收集唾液似乎有很好的敏感性和特异性以及Ct值的正相关检测的共同目标。
然后存储在−80°C的影响评估唾液样本22日45天导致SARS-CoV-2阳性。我们分析了样品与Simplexa™冷冻前后的Ct值和比较两种不同的目标(S和Orf1ab)。年代Ct值和前Orf1ab Ct值没有显著不同(中位数(四分位范围):年代Ct 23.8 (20.00 - -25.50), Orf1ab Ct 24.95(21.38 - -27.52))或之后(中位数(四分位范围):年代Ct 22.6 (20.55 - -25.4), Orf1ab Ct 24.5(21.52 - -26.70)冻结(Wilcoxon测试0.0705)。
此外,观察Ct值差异似乎没有被连接到的天数的样本仍然储存在−80°C,因为我们没有检索统计上显著的相关性的存储时间和Ct值(S:肯德尔相关p = 0.8206;Orf1ab:肯德尔相关(p = 0.7128)图1 b)。
然而,一旦我们包括在性能分析COVID-19住院患者的唾液样本收集的生物在2020年3月(数据没有显示),由此产生的敏感性为87.14%(61/70,95%置信区间CI: 76.99% - -93.95%) Simplexa™和91.4%(64/70,95%置信区间CI: 82.2% - -96.7%)爱视宝®,之间的协议Simplexa™和爱视宝®进行唾液的96.1%。
考虑到时间中位数从疾病的发作的生物标本的收集是4天(IQR: 2 - 9天),而新鲜的样品收集在2021年的2.5天(差:2 - 4天),我们评估是否症状之间的时间的开始和样本收集影响Ct值可能是一个可能的因素。
样本分类的时候进行症状患者在三个不同的类别(0 - 2天从症状开始收集,3 - 7天,唾液样本> 7天),我们观察到不同时间之间没有明显的统计学差异在Ct值的目标分析(E:克鲁斯卡尔-沃利斯检验p = 0.80;Orf1ab:克鲁斯卡尔-沃利斯检验p = 0.39;N2:克鲁斯卡尔-沃利斯检验p = 0.80) (图1 c)。相反,NPS我们观察到显著增加Ct值为E基因(克鲁斯卡尔-沃利斯检验p = 0.007544)和ORF1a / b基因(克鲁斯卡尔-沃利斯检验p = 0.03605)。
都爱视宝®和Simplexa™平台被证明是实用的和易于使用的唾液和结果演示了NPS的总体性能可比,特异性为100%,敏感性高于90%新鲜收集样本和高于87%的样本存储在−80°C,从而证明可能执行这些测试还在冰冻样本只有最小损失的敏感性。有趣的是要注意,样品由所有不同SARS-CoV-2变异的问题目前在意大利(α,β,δ)和两个包的性能没有受到这样的变量。
使用的测试表现出整体优秀水平的协议,即使考虑到差异确认一旦我们包括生物样品的分析。
随着大流行的发展,测试策略的实现基于poc普遍管辖权,可以保证一个提示现场诊断,允许集群的快速识别和控制和疫情,从而保护社区免受疾病传播。此外,如果这个新的诊断计划将涉及使用高度可靠self-collecting样品直接病人的家庭,如唾液、我们会减少卫生保健工作者的负担,和相关的成本使用NPS与特定的传输介质。这种方法也将有助于大幅减少的数量可能感染个体通勤采样中心,谁能代表一个重大公共卫生风险。
这种诊断方法也可以很容易地实现低中等收入国家,POC平台已经广泛用于其他疾病的诊断,如肺结核、艾滋病和病毒性肝炎等。
总之,我们的研究结果支持使用唾液POC技术作为一种有效的解决方案来简化,加快和广泛部署在领土COVID19传染病的诊断过程的控制。
确认
确认:我们感谢DiaSorin意大利和意大利造父变星提供免费试剂进行研究。
脚注
利益冲突:弗朗西斯卡Saluzzo没有披露。
利益冲突:Paola Mantegani没有披露。
利益冲突:瓦Poletti de Chaurand没有披露。
利益冲突:Federica Cugnata没有披露。
利益冲突:Patrizia Rovere-Querini没有披露。
利益冲突:玛尔塔Cilla没有披露。
利益冲突:Patrizia Paola Erba没有披露。
利益冲突:莎拉Racca没有披露。
利益冲突:克里斯蒂娜Tresoldi没有披露。
利益冲突:Caterina Uberti-Foppa没有披露。
利益冲突:Clelia Di Serio没有披露。
利益冲突:丹妮拉玛丽亚Cirillo提供测试报告从造父变星和DiaSorin期间进行的研究
- 收到了2021年7月28日。
- 接受2021年9月22日。
- 版权©2021年作者。生殖权利和权限接触权限在}{ersnet.org