文摘
特发性肺纤维化(IPF)是一种间质性肺疾病与慢性炎症和组织改造导致纤维化,减少肺功能、呼吸衰竭和死亡。博来霉素(Blm)全身的肺纤维化小鼠复制几个人类IPF的临床特征,包括著名的淋巴聚集的主要是b细胞积聚在肺部纤维化邻近地区的活跃。我们展示了以前要求b细胞在老鼠Blm-induced肺纤维化的发展。确定治疗肺纤维化的潜在抑制b细胞功能,我们检查了anti-CD20 b细胞消融治疗的效果有选择地删除成熟b细胞的免疫系统,抑制Blm-induced肺纤维化。Anti-CD20 b细胞消融不减少纤维化在这个模型;然而,免疫表型出现外周血细胞和肺居民透露,anti-CD20-treated老鼠保留CD19的高频+CD138+浆细胞。有趣的是,高水平的CD138+细胞也发现在IPF患者的肺组织,与小鼠模型一致。治疗小鼠bortezomib,使得浆细胞,减少Blm-induced肺纤维化的程度,暗示浆细胞重要的效应细胞的发展和肺纤维化的进展。
文摘
Bortezomib-mediated损耗的浆细胞而不是anti-CD20-mediated b细胞耗竭抑制bleomycin-induced肺纤维化,表明浆细胞是纤维化的治疗目标IPF等肺部疾病。https://bit.ly/3Nv4w5P
介绍
特发性肺纤维化(IPF)是一种激进的间质性肺病(ILD)的特点是细胞外基质过度沉积和一种慢性、进行性肺功能下降导致死亡(1]。从全基因组关联研究的最新进展已高亮显示上皮功能障碍的重要作用在IPF发病机理;然而,仍然存在有限的治疗方案以最小的IPF患者对生存时间的影响(2]。而与上皮功能相关联的几个位点,包括MUC5B,叔和,TERC,被认为是支撑IPF的发展3),变量之间的疾病进展的患者相同的基因变异说明IPF发病机制的复杂性。
越来越多的证据表明了免疫细胞所扮演的重要角色在IPF发病机理(4,5]。IPF患者的肺组织经常显示突出淋巴聚集由t细胞、b细胞、巨噬细胞和树突细胞(6,7]。IPF患者存在血清自身抗体的一个子集,提出免疫耐受是系统性的崩溃(如。DNA或RNA)或lung-specific自身抗原可能来自受损或死亡肺上皮细胞(8- - - - - -11]。纤维化是IPF不是独一无二的,因为它是在一系列其他结缔组织疾病,包括系统性红斑狼疮(SLE),系统性硬化症(SSc),干燥综合症和风湿性关节炎(12]。这些疾病免疫病理与IPF相似(13- - - - - -15),说明故障在免疫调节中扮演一个重要的角色在肺纤维化的发病机制7,16,17]。
成熟b细胞通常驻留在淋巴滤泡的二级淋巴器官协调抗体合成反应抗原(18]。几种不同的b细胞存在于免疫系统子集包括天真和记忆细胞和效应细胞,可以短暂的antibody-secreting plasmablasts或长lived-plasma细胞(19,20.]。长寿的浆细胞现在认为磨练骨髓中的特定区域,生产低水平的抗体不确定的一段时间,加大生产,如果他们遇到抗原,除了快速记忆b细胞的活化脾和淋巴结,可以在外周血循环(21]。浆细胞来自激活,增殖b细胞(22),通常要求b细胞受体(BCR)刺激和CD4的信号+辅助t细胞依赖细胞的免疫反应,或BCR toll样受体刺激加细胞因子辅助t细胞细胞独立反应(23,24]。
两个额外的b细胞数量B1-cells本土化的腹膜、胸膜腔和边缘区b细胞(MZB)的脾脏。这两个b细胞数量显示innate-like属性产生低亲和力的“自然”IgM抗体微生物抗原(25,26]。B1-cells是重要的调节组织内稳态的识别和清除凋亡细胞可以表达自体抗原(27]。未能清晰的细胞碎片或垂死的细胞可能会驱动炎症和自身免疫28]。B和t细胞也可以招募到周组织感染或慢性免疫刺激,形成三级淋巴结构。这些聚合组织类似于二级淋巴b细胞组成的组织毛囊,生发中心可以开发和t细胞区域港口抗原递呈细胞(29日]。
我们已经证明,在博来霉素(Blm)全身的肺纤维化,B-cell-dominant焦点在28天内的纤维化肺组织发展(5,30.)和小鼠缺乏T - b细胞或成熟b细胞只都免受Blm-induced肺纤维化(30.,31日]。然而,这些研究没有确定的b细胞(s)子集可能参与这个过程。
在这项研究中我们提供的证据表明,在小鼠和人类,CD20+b细胞积聚在肺部毗邻地区的突出的焦点组织纤维化。然而,CD20的损耗+b细胞未能保护小鼠免受Blm-induced肺纤维化。重要的是,CD19+CD138+浆细胞内积累了大量的肺纤维化没有显著影响anti-CD20抗体治疗。此外,我们发现的一个子集IPF患者血液和血浆的高比例的plasmablasts细胞在肺组织,是局部离散病灶邻近纤维组织。使用bortezomib耗竭小鼠肺浆细胞的显著降低Blm-induced肺纤维化的程度。我们的发现IPF和肺纤维化小鼠分享相似类型的免疫细胞聚集在肺的子集,而浆细胞消融显著抑制Blm-induced肺纤维化,表明,浆细胞肺纤维化的发病机制中发挥重要作用,消融治疗的目标
材料和方法
Bleomycin-induced肺纤维化
老鼠研究西澳大利亚大学动物伦理委员会批准(RA / 3/100/1339和RA / 3/100/1722),奥斯汀健康动物伦理委员会(伦理批准标识符2015 - 05305和2016 - 05320年)和伦敦大学动物保健委员会依照英国内政部许可下动物(科学程序)法案1986。男性10-12-week野生型(wt) C57Bl / 6 j小鼠被用于这项研究。硫酸博来霉素(Blm) (Hospira、墨尔本、维克、澳大利亚)或生理盐水(0.9%;巴克斯特,老Toongabbie、新南威尔士、澳大利亚)管理口咽(1毫克公斤−1),除非另有说明。Blm-induced减肥发生在所有的动物,≤10%实施安乐死,因为他们到达20%减肥伦理限制。每组至少四个动物用于端点定量分析。
Anti-CD20 b细胞耗竭
Anti-CD20抗体(由Genentech捐赠、南旧金山、钙、美国)或同形像控制IgG2a(5毫克公斤−1;猫# 02 - 6200;热费希尔科学、Scoresby,维克,澳大利亚)是腹腔内接种后7天,7天Blm治疗(预防性治疗)或在天10日和19日post-Blm治疗(治疗)。血液、脾和肺组织样本收集细胞隔离(补充的方法)和流仪分析(补充的方法)执行使用b细胞流式细胞术抗体筛选面板(补充表S1):卵泡成熟b细胞(CD45.2+CD19+CD20+),B1监管b细胞(CD45.2+CD5+CD19+)、浆细胞(CD45.2+CD19+CD38+CD138+)和plasmablasts (CD45.2+CD19+CD20+CD138−CD43+CD38+CD27+)。此外,肺组织样本称重和snap-frozen高性能液相色谱法(HPLC)分析羟脯氨酸(30.]。组织学分析,肺膨胀和固定在4%多聚甲醛(PFA)和加工石蜡包埋。组织部分(3 - 5μm)沾着马森的三色的或使用Tissue-Tek DRS autostainer Martius朱红色蓝色(樱花,日本)和幻灯片扫描NanoZoomer HT幻灯片扫描仪(日本滨松)和图像与NDP.View2出口。
Bortezomib浆细胞耗竭
Bortezomib股票的解决方案准备12.5 mg·毫升−1在二甲亚砜(DMSO)和存储在一次性整除−80°C。Bortezomib准备立即注入和之前在1毫克公斤−1在2% DMSO溶液,30%聚乙二醇(PEG) 300 ip每周两次治疗开始前7天Blm(−7天),直到28天post-Blm治疗。车辆只(2% DMSO溶液,30% PEG300)管理ip控制动物。Blm (2 mg·公斤−1)在0天鼻内接种。老鼠的安乐死28天后和肺膨胀和固定体外微型电脑断层扫描(µCT)量化的纤维化。
体外μCT分析肺纤维化
肺膨胀和固定4% PFA、干和hexamethyldisilazane(阿尔法蛇丘,病房,妈,美国),图中使用SkyScan 1172 (Bruker-MicroCT, Kontich,比利时)12.6μm像素大小,如前所述[32]。重建图像分割与通知图像分析软件(美国优秀,沃尔瑟姆,MA)排除背景和肺段为正常(绿色),纤维(蓝色)和气道的地区。数据表示为纤维化的体积百分比或金额像素强度的测量肺密度。
高效液相色谱法定量肺胶原蛋白
μCT或snap-freezing后,肺组织在6 M盐酸水解,氨基酸纯化和derivitised 7-chloro-4-nitrobenzo-oxao-1 3-diazole (NBD-Cl;穿越有机物、Geel、比利时)和羟脯氨酸水平衡量反相高效液相色谱法(1100年,LiChrospher列;美国安捷伦科技,圣克拉拉,CA)如前所述33]。对一个已知的量化标准和羟脯氨酸含量pro-collagen样本计算的内容。
组织化学和免疫组织化学分析组织的纤维化和免疫细胞浸润
t细胞的表达和分布标记CD3,鼠标锅b细胞标记B220, b细胞标记CD19,浆细胞、b细胞前体和一些上皮细胞标记CD138 (syndecan-1;表达上皮细胞染色)和B1α-cell疲软和t细胞标记CD5在肺和脾组织是由细胞免疫组织化学后heat-based柠檬酸缓冲抗原检索的方法,如前所述[30.]。最低的三个组织部分不同程度的肺在至少三个动物是每个研究检查了。对于一些免疫组织化学研究中,串行部分准备从肺部检查。
IPF患者样本和年龄组
从IPF患者血清样本(n = 20,男= 14;平均年龄为72.6±7.0岁,平均年龄73岁)和年龄组(n = 17岁男性= 10;平均年龄为66.2±9.4岁,平均年龄66岁)收集按照国家卫生和医学研究委员会指导原则和伦理批准(Belberry申请号hrec2011 - 10 - 497)。分析b细胞激活因子(金属),4月和IPF CXCL13水平和控制血清进行使用ProcartaPlex工具包(Jomar生活研究,Scoresby,维克,澳大利亚)和测量200年Luminex(研发系统,明尼阿波利斯,美国)。白细胞收集从IPF (n = 54岁的男性= 15;平均年龄为73.1±6.7岁,平均年龄73岁)和年龄组(n = 26岁男= 5;平均年龄为69.5±10.3岁,平均年龄68岁)使用流式细胞仪分析了按照伦理批准(Belberry申请号HREC 2011-10-497,纽卡斯尔,新南威尔士州和西澳大利亚大学的RA 2018/00207 / 4/20/5342)。纤维化肺组织获得了从病人接受外科肺活检或移植手术。所有组织得到适当的知情同意和它的使用批准的东米德兰兹-诺丁汉2 nr委员会(引用。12 / EM / 0058)。
统计分析
实验两组样本进行了分析使用一个未配对t检验或Mann-Whitney紫外线测试如果两个独立样本之间的差异不是正态分布。以上两组实验进行分析使用一个单向方差分析事后图基测试多个比较。一个假定值< 0.05被认为是显著的。
结果
b细胞聚合Blm-treated小鼠的肺
为了评估Blm触发b细胞积聚在肺部,我们评估b细胞数量在wt小鼠的肺和循环免疫组化和流式细胞术。组织部分是沾Martius红色蓝色证明纤维化的程度,与胶原蛋白所示蓝色。此外,部分肺组织沾B220 pan-B-cell抗体,结合CD45受体表达在成熟的b细胞。外周血b细胞被染色和流式细胞术分析使用额外的细胞表面标记CD19和CD20,表达的是成熟的b细胞。我们最初提出,b细胞数量会增加血液循环,然后积累在肺组织内。免疫组织化学的分析部分的C57Bl / 6 j小鼠肺组织纤维化的高峰期,治疗后28天Blm,证明了多个B220的积累+B细胞病灶(图1一个第四、箭头和八世)相比saline-treated控件(图1一个二、vi)。流式细胞术在循环CD19没有任何明显的影响+b细胞在小鼠7天(图1 b)或Blm治疗后28天(图1 c)。我们将看到一个增加肺从7天到28 b细胞;然而,没有明显变化(图1 b和c)。
Blm-induced胶原沉积耐火anti-CD20-mediated消融的成熟的b细胞
来确定anti-CD20-mediated损耗的成熟b细胞保护Blm-treated老鼠从纤维化wt小鼠接受预防性治疗包括两剂anti-CD20抗体或同形像控制IgG2a抗体治疗前和治疗后7天Blm 7天(图2 gydF4y2Ba)。流式细胞术了几乎完整的循环CD19损耗+b细胞(CD19 pan-B-cell标志表示在所有b细胞),在7天(第二anti-CD20抗体前剂量)和28天post-Blm治疗(图2一个)。此外,免疫组织化学和流式细胞术显示B220的数量减少+脾细胞部分组织(图2 b)和CD19+细胞分离肺组织(图2 c)anti-CD20抗体治疗的小鼠相比,小鼠治疗IgG2a同形像控制抗体。然而,anti-CD20纤维化治疗没有任何明显的变化取决于µCT和HPLC-assessed胶原沉积的老鼠相比,获得了同形像控制(图2 d- f)。以确定b细胞耗竭影响的时机纤维化反应,anti-CD20抗体在天10到19岁post-Blm治疗。然而,仍然没有改变纤维化与控制(图2 g)。
CD138+浆细胞和CD5+的循环和肺细胞增加Blm-treated老鼠
Anti-CD20抗体介入Blm前b细胞消融治疗是不足以减少纤维化。因此,我们研究了不同的b细胞种群wt C57BL / 6小鼠仅在盐水或Blm治疗反应使用流式细胞术和免疫组织化学和比较生理盐水控制。在Blm-only处理老鼠,CD19的频率没有变化+CD38+在血液或CD19 plasmablasts+CD138+等离子体b细胞在肺部或CD5+CD19+b细胞在循环或肺在7天或28与生理盐水相比控制(图3一- d)。然而,免疫染色证明B220聚集的形成+,CD19+,CD138+和CD3+Blm-treated鼠肺细胞(图3 e和f)。
然后,我们研究了wt小鼠的淋巴细胞亚群与生理盐水或Blm只有或那些收到Blm anti-CD20治疗或同形像控制。Anti-CD20耗尽之前Blm B220的数量明显减少+肺内细胞(图4一),并显著降低CD19的数量+淋巴细胞在循环(图4 b)的老鼠28天post-Blm治疗。CD5的比例增加+肺内细胞检测anti-CD20 antibody-treated老鼠(图4一)。随后的流式细胞仪分离肺组织的分析表明,由于CD5显著增加+CD3+t细胞,但不是CD5+CD19+b细胞(不包括CD5扩张的可能性+B1-cells肺(图4 b)。此外,在发现浆细胞数量显著增加anti-CD20 antibody-treated老鼠相比IgG2a控制(图4 c)。这些数据表明,虽然预防性anti-CD20损耗成功目标CD20表达b细胞,有大量浆细胞仍然在Blm治疗后的肺,可能导致肺纤维化。
b细胞积累在IPF
然后我们探索到何种程度鼠标数据和临床数据证实了IPF患者的b细胞在肺部分积累。免疫组织化学进行IPF肺组织显示CD20的积累+,CD5+和CD138+区域内细胞纤维化(图6),与观测一致的肺Blm-treated老鼠。IPF患者的外周血还包含一个在plasmablasts与健康对照组相比显著增加(图6 b)。来确定plasmablast数字保持在IPF患者中,四个幸存的IPF患者re-bled后的18个月内他们最初的血液样本,plasmablast数字评估使用流式细胞仪。所有四个幸存的IPF患者血液中展示了一个更大比例的plasmablasts相比主要出血(图5 c和d)。
讨论
越来越多的证据表明,免疫系统中发挥着重要作用一系列纤维化疾病的病理学包括IPF, SSc和肝纤维化4]。使用鼠标Blm-induced肺纤维化模型,我们先前证明b细胞是一个重要的效应细胞群小鼠肺纤维化的规定(30.]。遗传损耗Rag1在高STAT3背景阻塞形成成熟的B - t细胞,这是足以保护从Blm-induced小鼠的肺纤维化。此外,遗传损耗muMt成熟的b细胞−−/老鼠在高STAT3背景和CD19−−/老鼠,这减少了b细胞活化,也减少胶原合成和纤维化Blm治疗后,特别暗示成熟b细胞在肺纤维发生30.,34]。然而,一个重要的问题仍为b细胞的身份可能导致纤维化疾病的子集。
评估这些基因发现的含义,我们探索了更多的临床相关模型的b细胞耗竭;鼠标anti-CD20抗体治疗,根据人类anti-CD20抗体,利妥昔单抗。在这里,我们表明,CD20抗体介入损耗+b细胞,成功移除∼95%的成熟b细胞的末梢循环和组织(35),并没有阻止Blm-induced肺纤维化。为了解决这个矛盾,我们首先证明抗体介入b细胞耗竭未能删除所有成熟的b细胞的数量。浆细胞表达下调CD20在分化使它们抵抗anti-CD20抗体耗竭,允许他们保留在血液和外围组织。然而,浆细胞与自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、血管炎和干燥综合症的生产反应宿主蛋白质或核酸抗体(19,36]。
多项研究表明,IPF患者相比,增加了plasmablasts控制(4,37,38]。此外,蛋白质组学分析IPF肺组织证明的积累MZB-1-positive特征作为CD20的b细胞−CD138+CD38+CD27+(39),分享一些与传统浆细胞表型属性。G根Kormelinket al。(40还表明,浆细胞和肥大细胞激活积聚在IPF患者的肺组织和过敏性肺炎。有趣的是,一项研究使用单细胞RNA-sequencing数据没有显示显著增加在IPF的浆细胞或plasmablasts,但还不清楚什么标准被用来归类这些细胞(41]。在这项研究中我们证实浆细胞的存在和plasmablasts肺和血液,分别的IPF患者,和显示plasmablasts IPF患者分组人口的增加与控制相比,与其他的研究一致。
Plasmablasts是浆细胞前体的差异化反应中产生的激活记忆b细胞抗原暴露。Plasmablasts短暂antibody-secreting效应细胞在免疫系统和展览期间外周血中的瞬态存在交通从次级淋巴组织(如。淋巴结和脾脏)骨髓,在那里他们能增加长寿的浆细胞。目前很少有知道的起源和持久性IPF患者b细胞的子集。开始解决这个问题,我们re-bled四个幸存的IPF患者18个月后他们最初的血液样本,第二个示例是使用流式细胞术分析。所有四个IPF患者血液中显示更高比例的plasmablasts相比主要出血,建议这些患者必须经历持续的免疫反应,可能是为了应对环境抗原或自体抗原。
使用利妥昔单抗是一种人类anti-CD20抗体临床耗尽b细胞在自身免疫性疾病和不同类型的血液学的癌症42- - - - - -44]。美罗华也被用于临床试验SSc, non-IPF ILDs和IPF加重45- - - - - -47)与不同的结果和改善肺功能有限。美罗华召回响应减少一些抗原在淋巴瘤和风湿性关节炎患者,但总患者免疫球蛋白(Ig)水平保持不变(48]。因此,如果浆细胞有一个角色在IPF的病理学,使用利妥昔单抗免疫疗法可能是有限的。D我lillo等。(43)透露,在wt anti-CD20抗体治疗小鼠耗尽自然和antigen-induced IgM反应和记忆b细胞的数量,但没有影响长寿的骨髓中浆细胞的数量,和血清总搞笑水平或抗原抗体滴定度。治疗成年小鼠自身免疫性皮肤紧张,SSc的遗传模型,anti-CD20,不影响皮肤纤维化或自身抗体水平与现有的疾病;然而,持续交付anti-CD20年轻新生儿紧小鼠疾病发作之前减少皮肤纤维化和自身抗体生产(35]。浆细胞由anti-CD20抗体抵抗消除因为他们缺乏目标抗原的表达。因此,浆细胞靶向治疗需要治疗自身免疫性疾病或癌症如多发性骨髓瘤、浆细胞白血病。单克隆抗体的治疗方法目前用于临床实践目标等浆细胞表面标记信号淋巴细胞活化分子F7 (SlamF7)和CD38 [49,50),而蛋白酶体抑制剂bortezomib的抗癌疗法用于治疗多发性骨髓瘤,但毒性和脱靶效应是常见的51]。
蛋白酶体的功能是浆细胞至关重要,因为他们的高速率的抗体合成。浆细胞的蛋白酶体抑制引起免疫球蛋白缺陷和错误折叠蛋白质的积累,导致血浆细胞死亡(52- - - - - -54]。蛋白酶体抑制剂已被证明在自身免疫性疾病患者改善症状包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、重症肌无力、视neuromyelitis谱系障碍、慢性炎性脱髓鞘多神经病和自身免疫血液学的疾病对传统疗法(55]。Bortezomib已被证明在Blm-treated显著降低肺纤维化小鼠在另外两个研究中,尽管它是建议把增长的影响是通过抑制factor-β信号(56]或被调节成纤维细胞功能独立的蛋白酶体抑制(57]。在这项研究中我们证实bortezomib减少Blm-treated小鼠肺纤维化,但也显示几乎完全耗尽的浆细胞bortezomib-treated肺部组织。血液病中的作用效果尽管我们无法得出结论,仅由于浆细胞耗竭,成熟b细胞的观察到基因损耗−−/和muMT−−/老鼠(30.]在CD19和减少b细胞活化−−/老鼠,所有抑制血浆细胞功能,阻止Blm-induced肺纤维化,然而CD20损耗不抑制血浆细胞功能不抑制纤维化,强烈支持一个角色为浆细胞在肺纤维化的发展。
总之,这项研究提供了新的证据支持浆细胞的作用和plasmablasts Blm-induced肺纤维化和重要的是,积累临床诊断的肺部IPF患者。这里给出的结果有重要意义对我们理解b细胞在肺纤维化和子集的考虑未来IPF的疗法。这将是重要的决定是否有特定的浆细胞克隆扩张,识别抗原的特异性抗体产生的浆细胞在IPF患者阐明他们的角色在组织损伤和是否指向自我或外国抗原。解决这些问题可以帮助指导免疫疗法在IPF的开发和使用。
补充材料
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补充图S1。控制策略PBMCs鼠标和鼠标肺细胞流式细胞术分析。鼠标PBMCs和分离肺细胞染色的鸡尾酒荧光标记的单克隆抗体(mab)并通过流式细胞术分析。白细胞的数量由浇注CD45.2决定+细胞。CD45普遍白血球细胞表面标记。白细胞随后被分为特异性免疫细胞的子集。通过选择CD19)电脑被确定+CD3−然后选择CD38细胞+和CD138+细胞。b)通过选择CD5 b监管细胞被确定+然后CD19+。erj - 01469 - 2021. - figure_s1
补充图S2。控制策略对人类白细胞用流式细胞术分析。代表流式细胞术情节白细胞被显示了从一个控制病人清洗和彩色荧光标记的鸡尾酒的马伯区分T细胞和B细胞的子集。淋巴细胞被封闭在FSC, SSC属性和可行的CD3细胞被封闭和分析+T细胞和CD19+B细胞。成熟的B细胞被确认为CD19+CD20+细胞。这些细胞进行CD20的存在+CD27+记忆B细胞(Bmem)和Bmem细胞进一步分析CD20的存在+CD38+plasmablasts (PBs)。erj - 01469 - 2021. - figure_s2
补充图S3。)低放大图像代表肺部分从Blm +车辆对待老鼠沾染了)。图像显示区域的正常组织和密集的纤维化和多个单核细胞聚集区域内存在纤维化。插图是扩大在b)单核细胞聚合(箭头所指)。b)高放大图像的单核细胞总包含CD19+CD138+个人电脑(黄色)。同形像控制没有积极的CD19或CD138染色。规模100μm酒吧。erj - 01469 - 2021. - figure_s3
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确认
作者要感谢基因泰克(美国)的慷慨提供anti-CD20用于这项研究。此外,我们要感谢栓扁Lim(呼吸健康研究所、Nedlands、澳大利亚)和乔Yasa(澳大利亚默多克大学,默多克)技术支持和呼吸道健康研究所的临床试验单位收集血液样本。我们承认科学和技术援助的设施和澳大利亚显微镜和显微分析研究设施中心的显微镜,描述和分析,西澳大利亚大学基金资助的大学,州和联邦政府。
脚注
利益冲突:S.E. Mutsaers, Prele, R.J. McAnulty, G.J.劳伦,g . Hoyne D.A.骑士,R.J.唐格和m·恩斯特收到国家卫生和医学研究理事会的资助(NHMRC),项目资助APP1067511 ID。R.J. McAnulty, S.E. Mutsaers,蔡玫Prele湄皮尔斯收到英国肺脏基金会资助,项目资助PPRG15-10数量。t .英里报告基因泰克提供anti-CD20抗体,并得到了映象研究训练计划奖学金和肺脏基金会澳大利亚比尔·Nierop博士奖学金。所有其他作者没有披露。
支持声明:这项工作是由国家卫生和医学研究委员会(NHMRC)项目# 1067511和英国肺脏基金会授予授予PPRG15-10。Prele, m .恐惧和S.E. Mutsaers NHMRC项目拨款支持# 1127337。t .英里支持西澳大利亚大学研究训练研究生奖和肺脏基金会澳大利亚比尔·Nierop博士奖学金。资金信息,本文已沉积的Crossref资助者注册表。
- 收到了2021年5月30日。
- 接受2022年5月16日。
- 版权©2022年作者。
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