抽象
鼻病毒感染经常发生在整个生活中,在已报告约无症状病例的三分之一。连续的鼻病毒感染的临床意义仍不清楚。
为了确定从2485名成人急性咳嗽连续的鼻病毒检测,鼻咽样本的发病率和临床相关性/下呼吸道疾病进行了分析。患者在连续三年(2007- 2010年)由来自12个欧盟国家的全科医生前瞻性纳入。鼻咽样品在最初的全科医生会诊收集和后28天,病人在此期间症状得分的记录。
鼻病毒RNA在444(18%)中检测到了2485访问一个样品和在110(4.4%)2485进行访问2个的呼吸样本。的444例患者的21(5%)有两个样品的正面为鼻病毒。这两个病毒检测基因分型成功为17(81%),从这些患者的21。在六(35%)在11(65%)发生脱落延长鼻病毒的21和再感染具有不同鼻病毒选自21.鼻病毒再感染与慢性阻塞性肺疾病(P = 0.04)和哮喘患者显著相关联(p值= 0.02)和似乎比延长的感染更严重。
我们的发现表明,在具有免疫能力的成年人中,鼻病毒再感染比长期感染更常见,而慢性呼吸道共病可能更容易发生鼻病毒再感染。
抽象
慢性气道合并症可能诱发更频繁的鼻病毒再感染,在免疫成人http://ow.ly/vdB3g
介绍
鼻病毒(RV)是儿童和成人急性呼吸系统疾病的主要病因。鼻病毒感染的临床谱可以从无症状到更严重的下呼吸道疾病的范围如闭塞性细支气管炎和肺炎[1]。鼻病毒是公认的哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)恶化[的主要触发2]。它也分别在24%和混合病毒和细菌感染,30%识别的通常检测到的同病原体[3,4]。鼻病毒感染可能会导致严重的并发症,如肺闭塞性细支气管炎和急性排斥反应和干细胞移植[五-7]。
鼻病毒是属的成员肠道病毒,家庭小核糖核酸病毒。目前,超过160个sero-/基因型已被描述和分类在三个主要物种:RV-A、RV-B和RV-C中[8]。在免疫功能正常的人,鼻病毒感染通常用温和的自限性上呼吸道疾病有关的自发在1-2周内做出决议[9]。病毒脱落平均持续在免疫功能正常的受试者10-14天;然而,这种脱落并非总是与呼吸道症状[相关10,11]。使用敏感的分子技术,鼻病毒RNA已在表面上健康的受试者,因此的RT-PCR阳性结果的临床相关性的10〜35%检测到的仍存在争议[10,12-14]。有症状的感染后5-6周延长鼻病毒检测已经报道了年幼的孩子,这表明该病毒能坚持的时间显著的时期。然而,由于没有进行基因分型,另一种鼻病毒新感染不能排除[15-17]。只要4-12个月的慢性鼻病毒马车已被记录在免疫缺陷患者脐带血或器官移植[后18,19]。
多种鼻病毒类型的协同循环在社区和再感染发生在整个一生,这表明血清型之间的交叉保护性免疫不全[11,20.]。成年人平均两到三个感染和年幼的孩子经历了每年12个感染[21]。只有少数的研究评估鼻病毒再感染的临床严重性和性质,大多数是在年幼的孩子[进行11,22]。前鼻病毒感染如何调节连续鼻病毒感染的临床疗效和某些类型的鼻病毒能否引起更严重的和长期的疾病目前还不清楚。
这项研究的目的是:1)调查的成年GP急性咳嗽中延长鼻病毒脱落和再感染的发病率/下呼吸道疾病;2)建立有关延长鼻病毒脱落和再感染的临床严重性。
方法
研究设计,研究对象和标本
研究受试者登记为GRACE的一部分(在基因组学的打击抵抗抗生素社区获得在欧洲的下呼吸道感染),欧洲网络卓越(www.grace-lrti.org)着眼于提高社区获得性下呼吸道感染的管理。来自12个欧洲国家(比利时,英国,法国,德国,意大利,荷兰,波兰,斯洛伐克,斯洛文尼亚,西班牙,瑞典和威尔士)16个初级卫生保健网络,2007年10月间参与了患者的前瞻性招募冬季内2010年符合条件的患者年龄在18岁或以上,并首次与呼吸系统疾病有急性或恶化咳嗽提出咨询全科医生(GP)(≤28天持续时间)为主要症状,或任何临床表现,暗示下呼吸道感染。排除标准是怀孕,哺乳和严重受损的免疫状态相关的任何病症。患者哮喘,COPD和其它共病,如糖尿病的诊断以前;呼吸,心血管和过敏性疾病中,不排除与列入以及由此急性感染加重。该研究得到了与会各国的医学伦理委员会。下列书面知情同意,痰(如果可用)和鼻咽拭子样本是从每个病人的第一次访问(V1)在GP期间收集。在第二次访问(V2)到GP约28天之后进行,得到后续鼻咽拭子样品。
临床特点和疾病的严重程度
临床资料,包括过去的病史,合并症和他们的管理/治疗,以及病人感到不舒服的天数,在第一次咨询时由全科医生记录在病例报告表上。在初级保健中心的第一次访问之后,患者被要求完成疾病期间的每日症状日记(最多28天)。存在或不存在13种症状:咳嗽、产痰、呼吸短促、喘鸣、鼻炎、发热、胸痛、肌肉疼痛、头痛、睡眠障碍、总体感觉不适、正常活动受到干扰、神志不清/迷失方向。如果存在,每个症状的严重程度按7分制评分,从0到6分。0:“正常/不影响”;1:“非常小的问题”;2:“小问题”;3:“适度坏”;4:“坏”;5:“非常糟糕”; and 6: “as bad as it could be”. Disease severity was assessed from the following clinical outcomes: 1) duration of illness; 2) maximal symptom score; and 3) duration of higher symptom score. The duration of illness was measured as the sum of days unwell before the first GP consultation and days the patient experienced any of the 13 symptoms over the 28-day follow-up period. The maximal symptom score was estimated as the highest mean daily symptom score based on the 13 symptoms evaluated in the patient diary during the 28-day follow-up period. The duration of higher symptom score was measured as the number of days the patient had a mean daily symptom score ≥2 corresponding to severity ranging from “slight problem” to “as bad as it could be”.
鼻病毒的检测和分子分
总核酸从鼻咽标本与所述的NucliSens EasyMag系统(生物梅里埃公司,法国格勒诺布尔)分离并储存在-70℃直到进一步的测试。用逆转录酶PCR测定法扩增先前所述使用引物,探针和条件5'-UTR区域的142-bp片段的内部控制的实时检测鼻病毒阳性样品[23]。阈值循环(Ct)值使用相同的荧光阈值归一化并用作病毒负荷的近似测量。通过扩增和片段的测序在VP3 / VP1,VP4 / VP2或5'-UTR基因组区域进行鼻病毒分子分型。在网上补充材料中提供了关于分子分型检测病毒和鼻病毒基因型分配的更多信息。
呼吸道病毒和细菌共同病原体检测
鼻咽拭子样品通过实时PCR测定法以下病毒进行了测试:人类偏肺病毒(hMPV的),呼吸道合胞病毒(RSV),流感病毒A和B(IFA和IFB),副流感病毒类型1到4(PIV-1至-4),人冠状病毒(冠状病毒229E污渍,OC43,和NL63),腺病毒(ADV),人博卡(HBoV),多瘤病毒WU(WUPyV)和KI(KIPyV)23]。通过使用常规的培养物和/或分子的方法在鼻咽拭子标本检测细菌和真菌共感染Chlamydophila肺炎,嗜肺军团菌,肺炎支原体,链球菌属。嗜血属。,革兰氏阴性肠杆菌科细菌,念珠菌SP。,黑SP。和铜绿假单胞菌[23]。痰标本用于培养肺炎链球菌和嗜血属。
统计分析
共病每使用Pearson卡方或Fisher为2×2表的精确检验患者组进行比较。每名患者每日症状评分均介导的日平均症状评分的13种症状。年龄和每呈现为中位数和四分位范围的患者组的临床特征(IQR)值通过曼 - 惠特尼U检验来比较。双面p值<0.05被认为是统计学显著。所有统计分析在IBM SPSS统计版本20.00软件进行的Windows(发布的2011年,IBM公司,阿蒙克,NY,USA)。
结果
鼻病毒的检测和分子分
期间V1和V2访问初级保健中心从2485名成人急性咳嗽获得的4970个鼻咽拭子样品A总/下呼吸道感染在本研究中进行了研究(图1)。鼻病毒RNA在444(18%)总分2485 V1和110(4.4%)中检测到超出2485个V2呼吸样本。在22(5%)中观察到了444例一V1鼻病毒阳性样品的顺序鼻病毒检测。患者连续鼻病毒检测包括11名男性和11名女性与55岁年龄中位数(范围22-78岁)。为了延长鼻病毒脱落和再感染区分,病毒分型的患者连续鼻病毒阳性样品(进行图1和2)。44顺序鼻病毒阳性样品39(89%)成功,其特征在于,导致:RV-A(N = 22),RV-B(N = 11),RV-C(N = 5)和肠道病毒(EV-C)在一种情况下。后者的检测,是由于交叉反应性提供了鼻病毒的实时RT-PCR测定与某些肠道病毒类型,因此这种情况下(患者22)的被排除进一步的分析。44个样品12(27%)通过使用所述VP4 / VP2测定键入与VP3 / VP1测定中,26(60%),和4(9%)与5'-UTR测定(参见在表2S补充材料)。鼻病毒阳性样品失败放大由所有三个基因分型测定具有对应于38位Ct值显著较低的病毒载与29,用于基因分型鼻病毒(p值= 0.002曼 - 惠特尼U检验)。V1和V2鼻病毒感染可以键入的17(81%)的21例患者,并且对于剩余的4(19%)患者中,只有第一V1样品进行表征(图2)。(成对核苷酸相似99.9-100%)相同的鼻病毒序列在6(35%)被发现了17例感染指示用相同菌株:RV-A(N = 3)和RV-B(N = 3)(表2S,补充材料)。在这些患者中的一个(病人6),在第一V1鼻病毒序列的VP2基因中检测到模糊的核苷酸位置(密码子根据ATY92ATT到RV-A43),并且根据在另一个患者中的非同义置换(密码子位置L549V到RV-A34)在VP3基因(患者5)在第二个V2病毒菌株中观察到。
再感染具有不同的鼻病毒应变发生在11(65%)的17例,其中RV-A / RV-B(N = 4),RV-A / RV-C(N = 3),RV-C/ RV-A(N = 2),和两个病人重新感染了不同RV-A基因型(图2)。
共同病原体检测
在553个鼻病毒阳性的V1和V2样本中,有187个样本(34%)发现了一种或多种病毒、细菌或真菌共病原体,其中63个样本(11%)发现了病毒,119个样本(22%)发现了细菌,38个样本(7%)发现了真菌共感染。在21例连续鼻病毒感染的患者中,有6例(29%)被发现同时感染另一种病毒和/或细菌,其中9例在第一次咨询全科医生时同时感染。所示图2,6名(29%)患者经连续鼻病毒检测发现1至2种细菌,包括流感嗜血杆菌(N = 3),副流感嗜血杆菌(N = 1),卡他莫拉菌(N = 1),革兰氏阴性肠杆菌科(N = 1),念珠菌属。(N = 1),链球菌pseudopneumoniae(N = 1)和肺炎链球菌(N = 1)。在5例序贯鼻病毒的研究结果,观察到病毒共感染和包括RSV(N = 1),WUPyV(N = 1),冠状病毒-NL63(N = 2)和流感病毒(N = 1),和一个病人有真菌共感染以念珠菌属。
在鼻病毒感染的合并症患者
年龄分布和病人之间的共患疾病(COPD,哮喘,肺部疾病,心血管疾病,糖尿病,既往住院呼吸系统疾病和过敏性疾病)的发生率与单(V1)和顺序(V1和V2)鼻病毒阳性样本,延长鼻病毒脱落和鼻病毒再感染中所示的表格1. 在21名连续鼻病毒检测的患者中,有16名(76%)至少有一种基础疾病,其中以COPD(29%)、过敏性疾病(29%)和哮喘(24%)最为常见。在鼻病毒再感染患者中,共病性疾病占10/11(91%)(图2b)。顺序检测鼻病毒(P = 0.004),特别是鼻病毒再感染(P = 0.04)与COPD有关。哮喘是用鼻病毒再感染(P = 0.02)相关联的第二最常见的共病病症。患者鼻病毒延长脱落普遍较老(平均年龄72年)高于患者鼻病毒单(中位年龄49岁; P = 0.07)和再感染(中位年龄48岁; P = 0.12)。
长期鼻病毒脱落和再感染的临床评价
患者的鼻病毒顺序检测,28天或之后后第一V1呼吸采样得到第二次后续样品;中位数(IQR)35天(31-40天)。21例患者具有顺序鼻病毒阳性样品12(57%)有在第28天无临床症状后的第一V1鼻病毒检测,七(33%)患者具有“非常小的问题”(症状得分≤1.2),以及两个(9%)患者有“小问题”(症状评分〜2)。鼻病毒的临床特点延长和再感染中提出表2。疾病的中位时间为更长的患者进行了长期感染(25与18天),但中位数最高症状评分和症状的中位时间≥2,鼻病毒含量较高重新感染。与鼻病毒延长脱落和鼻病毒相关的疾病的严重程度再感染也相比于210例与鼻病毒的单感染和123例共感染与其他病毒或细菌病原体(表2)。后者的临床特征仅适用于鼻病毒V1阳性的患者,由于与另一种病原体顺序感染了所有筛选病原体V2后续样品阴性,从而减少在鼻病毒症状严重程度的偏差估计。分析表明延长鼻病毒脱落和鼻病毒再感染的症状严重程度之间没有显著的差异,以及在与鼻病毒单和共同病原体感染相比。
讨论
在本研究中,鼻病毒急性咳嗽或任何其他原因怀疑下呼吸道感染的免疫活性成人18%进行检测。大约28天后得到的随访样品是鼻病毒阳性与初始鼻病毒感染的成人的5%,占全部患者队列的0.9%。鼻病毒基因分型发现,受试者的大部分(65%)被重新感染了不同的鼻病毒(图1)。相较于以前的研究,与呼吸道疾病的孩子已经确定RV-B感染频率较低[20.,24],在当前的研究中,RV-B为RV-A之后的第二最常见的种类和在三个鉴定出的六个患者延长鼻病毒脱落。
以上的患者连续鼻病毒检测有一半的时间(28天)或没有症状(57%)或很轻微的症状(33%)平均7天第二次病毒检测前(图2)。这些数据表明,在成人中,后续的鼻病毒感染可能是轻度或无症状。我们的观察与成年人无症状继发鼻病毒感染的早期研究结果是一致的[10]。在具有免疫能力的个体中,对以往鼻病毒接触的获得性免疫决定了随后鼻病毒感染的临床严重程度和持续时间。血清和呼吸道分泌物中血清型特异性抗体的高滴度与症状严重程度或对同源鼻病毒感染的抵抗力降低有关[25]。另外,针对在VP4的保守肽序列凸起广泛交叉反应性中和抗体,VP3和VP1衣壳蛋白已有报道[26,27]。
在目前的研究中,大多数患者(77%)具有顺序鼻病毒检测至少有一个共病障碍;慢性阻塞性肺病,过敏性疾病和哮喘占大多数情况下。此外鼻病毒再感染是显著以表明慢性气道疾病可能诱发更频繁的鼻病毒感染,COPD和哮喘的合并症有关。最近对住院严重恶化哮喘患儿进行的一项研究显示,反复鼻病毒检测8周以上8例是由于再感染[24]。在这项研究中,再次感染的17例患者中11证实了基因分型的鼻病毒阳性的后续样品。我们的研究结果提供进一步的证据表明,连续的鼻病毒检测主要是再次感染,而不是持久性。
中号olyneaux等。[28]表明,相比于健康人鼻病毒与慢性阻塞性肺病导致受试者感染可能致病的显著生长流感嗜血杆菌。在该研究中,29%(21例中有6例)的复发鼻病毒患者被确诊为细菌共病原体流感嗜血杆菌是在三名患者鉴定的最频繁观察到的细菌种类。三名病人患有潜在呼吸道条件,其中包括两例慢性阻塞性肺病,1例患者有胸膜结核以前住院治疗。
在免疫能力强的成年人中,鼻病毒的脱落时间通常为1-2周,而据报道,只有严重免疫缺陷患者的鼻病毒感染时间超过28天[11,18,19]。在我们的研究中,六名成人谁棚鼻病毒的超过28天4人超过65岁。虽然样本量为动力不足显着性检验,这些患者一般年龄较大,并与患者的鼻病毒比较有疾病持续时间较长的再感染,单感染病毒和鼻病毒共感染病原体(表格1和2)。延长的感染是由不同的RV-A和RV-B基因型和病毒载量在第一(V1)的时间引起的,第二(V2)鼻病毒检测是可比的和相对高的为广大患者,表明持续性病毒复制(图2a)。在先天和适应性免疫应答表现出对抗原较低亲和力和亲合力与年龄相关的变化,如嗜中性粒细胞减少的抗菌活性,在细胞因子的产量下降,和抗体已经报道了29]. 因此,免疫衰老可能导致老年人病毒清除率低,呼吸系统感染更为频繁和严重。重要的是,两株RV-A菌株中VP2和VP3衣壳基因的同义和非同义变化表明,老年人可能是鼻病毒变异出现和传播的潜在宿主,其抗原特性有所改变。
在我们的研究中,鼻病毒再感染的患者在28天的随访期间没有经历过的疾病症状加重明显(图2b)。不过,整体的临床表现似乎比延长鼻病毒感染更严重,具有较高的症状评分和更严重的症状持续时间较长呈现。在这些患者呼吸道合并症率很高,可能可以解释的更严重的疾病的结果。
目前的研究具有一定的局限性。由于良好质量的痰样品是很难获得的,特别是来自老年患者[30.],主要进行鼻咽拭子标本病原体筛查。另一个限制是,采样并没有一个更频繁的(每周)的基础上进行;因此,第二鼻病毒感染的时间不能被精确地确定。还需要进一步研究,以确定是否连续的鼻病毒感染,尤其是具有不同的鼻病毒种类可能会导致更严重的症状。
据我们所知,这代表的发病率和健康的成年人中反复鼻病毒检测的临床意义的第一广泛的基于人群的研究。数据这里介绍表明,在免疫成人顺序鼻病毒感染,主要是由于再感染有不同的鼻病毒基因型。我们的研究结果表明,患者的气道慢性合并症可能易感性增加至鼻病毒再感染,而延长鼻病毒脱落可能是在老年人中更为常见。先进的年龄和免疫衰老的延长鼻病毒脱落和传输需要进一步的研究中的作用。
致谢
我们感谢所有参与GRACE初级保健网的机会,进行这项研究,杰奎琳Schelfault,伊薇特面包车Aarle,LopjeHÖCKER和利西特Rusman优秀的技术援助和苏珊Hemert-(医学微生物学,LUMC,荷兰的DEP的保护。)Glaubitz(朱利叶斯·健康科学中心和初级保健,UMC,荷兰),用于与GRACE数据库援助,彼得·西蒙兹和Chloe麦金太尔(罗斯林研究所,爱丁堡大学,英国)与鼻病毒类型分类援助。
脚注
这篇文章有提供补充材料www.qdcxjkg.com
支持陈述:这项工作得到了6人的支持th在欧洲联盟委员会的框架计划(参考:利星行-CT-2005-518226)和医学微生物学系,荷兰莱顿大学医学中心,荷兰莱顿。
利益冲突:披露能够随本文的在线版本中找到www.qdcxjkg.com
- 收到2013年10月2日。
- 公认2014年1月31日。
- ©ERS 2014