文摘gydF4y2Ba
过度沉积的蛋白聚糖(后卫)中描述的牙龈层哮喘气道壁。然而,沉积所知甚少的气管平滑肌(ASM)层和沉积模式是否改变取决于疾病的严重程度。gydF4y2Ba
支气管活检是在严重或中度哮喘患者(使用美国胸科学会标准定义)和对照组。活检是应用的动力实验、lumican versican decorin。PG牙龈和ASM层沉积测量,前者通过计算阳性染色的面积,而后者通过确定面积百分比彩色使用点计数。gydF4y2Ba
免疫染色的后卫是著名的活检中度和严重的哮喘病患者,与对照组相比。虽然没有差别的PG在两个哮喘组之间的牙龈层,面积百分比实验和ASM lumican染色层明显更温和gydF4y2Ba与gydF4y2Ba严重的哮喘患者。gydF4y2Ba
沉积的差异蛋白聚糖的气管平滑肌层内温和gydF4y2Ba与gydF4y2Ba严重的哮喘病患者可能对气管平滑肌的功能行为的影响在这两个组的患者。gydF4y2Ba
气道壁的改造是哮喘病人中描述gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。研究显示网状基底膜的增厚和增加矩阵进行航空的牙龈层中的沉积gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。胶原蛋白和糖蛋白,如纤连蛋白,占其中的一些变化;蛋白聚糖(后卫)也有助于改造gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。精确的改造和哮喘严重程度之间的关系尚未建立。贝纳永gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba指出增加支气管黏膜下层的III型胶原沉积严重,患者持续哮喘。一个积极的关系已经证明了气道壁增厚和哮喘严重程度之间的关系gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。相反,楚gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba无法文档差异III型胶原免疫染色的航空公司严厉程度不同的哮喘患者。此外,酒井敦gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba表明,气道壁厚,以电脑断层扫描评估,和气道反应性呈负相关。其他细胞外基质(ECM)分子的可能性,如动力,是重要的在还没有调查导致哮喘严重程度;也没有问题的矩阵是否沉积在温和的平滑肌层中的改变gydF4y2Ba与gydF4y2Ba严重的哮喘病患者被解决。gydF4y2Ba
后卫是核心组成的大分子蛋白质和糖胺聚糖(GAG)侧链。描述了不同子类的动力分配,包括hyalectins,如versican,与许多咽侧链大分子;和小富亮氨酸后卫,gydF4y2BaegydF4y2Ba。gydF4y2BaggydF4y2Ba。decorin biglycan lumican。后卫完成一些重要的生物功能gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。Versican,由于高离子电荷的多个咽侧链,扮演了一个关键的角色在决定细胞外基质的含水量,和影响组织粘弹性行为。Decorin biglycan绑定到胶原蛋白和胶原蛋白影响fibrillogenesis矩阵组装。这些分子也绑定不同的生长因子,如转化生长因子(TGF) -β和纤维母细胞生长因子,和调节能力影响细胞增殖和基质沉积gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
罗伯茨gydF4y2Ba11gydF4y2Baobservated,病人死于哮喘、气道壁显示突出的染色实验,decorin versican。目前作者表明,在从轻度哮喘患者支气管活检标本,versican的沉积,实验和牙龈lumican增加气道壁层,与活检获得正常的志愿者gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。顿gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba12gydF4y2Ba显示co-localisation decorin TGF-βgydF4y2Ba1gydF4y2Ba牙龈的气道壁层;然而,在整个沉积模式没有区别活检标本哮喘和对照组之间。最近的一份报告在轻度哮喘受试者显示减少decorin水平与正常对照组相比,固有层;相反,实验水平增加gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。PG沉积在哮喘气道壁的性质因此远未明朗。gydF4y2Ba
哮喘气道壁的PG表达增加可能有重要功能的后果。气道壁增厚可能导致增加气道阻力由于腔的直径的减少,并增加气道反应由于气道增厚墙对气管平滑肌的影响(ASM)缩短和随后的气道狭窄gydF4y2Ba14gydF4y2Ba。在轻度过敏性哮喘患者的一项研究中,PG在牙龈层沉积与气道反应性呈正相关gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。理论上,然而,基质沉积增加平滑肌层本身可能导致降低平滑肌收缩gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。填补。刚刚最近的一项评估帕兰德留下gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba15gydF4y2Ba促进了假设改造调制对气道狭窄的影响;气道壁的硬化会导致降低压缩性,同时增加矩阵内的平滑肌层可以增加阻抗ASM缩短。这很大程度上将取决于沉积矩阵的精确的力学特性。因此,增强基质沉积和具体的矩阵本身的力学性能可能会重塑对气道生理的影响的关键因素。gydF4y2Ba
在目前的研究中,为了检查PG分布的变化,和动力分配的贡献在中度和重度哮喘病人气道壁改造,沿支气管活检被用来获得气道壁的标本,和PG气道壁的沉积在不同的层取样被免疫组织化学特征。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
参与者gydF4y2Ba
共有27个哮喘病人(66岁年龄22−)和六个对照组(年龄20 - 63岁)参加本研究(表1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。哮喘病患者的男女(14严重和13温和)是从困难哮喘研究招募,蒙特利尔胸部研究所进行的,麦吉尔大学,大学医院du圣心,蒙特利尔(加拿大蒙特利尔,QC)。标准的肺功能测试进行所有科目。gydF4y2Ba
被诊断为哮喘respirologist和证实了改善的一秒钟用力呼气量(FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba)≥12%,绝对增加≥200毫升的基线,之后政府β-adrenergic受体激动剂;或者通过改善FEV≥20%gydF4y2Ba1gydF4y2Ba类固醇后审判。gydF4y2Ba
严重哮喘的定义根据标准改编自美国胸科学会研讨会难治性哮喘gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。严重哮喘患者每日口服类固醇治疗> 50%之前的12个月,或用大剂量吸入类固醇治疗(> 1000μg fluticasone每天或同等)和至少一个其他药物(长效β-agonist,白三烯受体拮抗剂或茶碱)不断在过去12个月。此外,他们必须至少满足以下两个条件:日常使用短效β-agonist;持续的气流阻塞与pre-bronchodilator FEV记录gydF4y2Ba1gydF4y2Ba< 70%,FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba预测/用力肺活量比值< 80%;至少有一个紧急护理访问之前的12个月;三个或更多的课程在前12个月口服类固醇;提示恶化与< 25%减少剂量的类固醇;在前三年或几近死亡哮喘事件。gydF4y2Ba
中度哮喘患者满足以下所有条件:控制哮喘μg·200 - 1000天gydF4y2Ba1gydF4y2Bafluticasone或同等学历,有或没有使用长效β-agonist;不超过2口服类固醇课程在前12个月但没有在过去3个月的总数天口服类固醇不> 30天前12个月;FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Bapred > 70%和> 90%的个人最好成绩较前2年;和不超过一个临时的紧急护理或办公室访问之前的12个月。gydF4y2Ba
个人被排除在外,如果他们有其他肺部疾病或严重共病的疾病,可能会影响哮喘疾病活动,如艾滋病、转移性癌症或充血性心力衰竭。支气管镜检查是执行之前获得知情同意。伦理委员会批准的这项研究是麦吉尔大学健康中心和医院研究中心的du圣心大学蒙特利尔。gydF4y2Ba
程序gydF4y2Ba
支气管镜检查是按照标准的程序执行。总共4 - 6每个病人活检标本被在节段支气管的船底座使用杯钳。活检标本放在Tris-buffered盐溶液,并立即送往实验室进行处理。实验、lumican和decorin疣状,组织固定在4%多聚甲醛和嵌入在石蜡。组织被切割(5-μm厚度)和放在玻片涂有聚-gydF4y2BalgydF4y2Ba赖氨酸(0.1%)和烤一夜之间在37°C。对于versican疣状,组织在异戊烷snap-frozen,堵住optimum-cutting-temperature嵌入中,分段(5-μm厚度),然后固定在丙酮/甲醇。有些活检标本从而获得另一项研究中使用gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。versican只有哮喘受试者组织染色,冷冻活检标本在对照组中不可用。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
幻灯片是沾主要抗体实验,(多克隆兔、反1:50 0),lumican(1:50 0多克隆兔子,反;两个p . Roughley礼物,后来医院,麦吉尔大学)、decorin(多克隆兔、anti-mouse 1:1000;杂种细胞发育研究银行,爱荷华市,美国IA)或versican(单克隆鼠标,反,1:50 0;发展研究杂种细胞银行)。二次抗体使用猪兔抗体免疫球蛋白(1:10 0;Dako斯特鲁普、丹麦)或兔抗体鼠标immunogloblulin(一60;Dako;versican染色)。Steptavidin-alkaline磷酸酶(1:200;Dako)或鼠标碱性磷酸酶/ anti-alkaline磷酸酶(一60; Dako; versican staining) was used for detection. All immunostaining was developed with Fast Red (Sigma-Aldrich, Toronto, ON, Canada). Slides were counterstained with Gill II haematoxylin and coverslips applied. Positive staining appeared red under bright-field illumination. For negative controls, sections were processed in the absence of primary antibody. Not all biopsy samples were stained for all PGs. The number of biopsy specimens examined for each PG ranged from four to six. Some patients had separate biopsy samples stained for more than one PG.
形态测量学gydF4y2Ba
幻灯片使用奥林巴斯光学显微镜检查(芒康,卡森集团、加拿大)与商业软件和图像捕获(Image-Pro +;美国马里兰州银泉的媒体控制论)。在牙龈层检测阳性染色,使用200×放大。牙龈层被定义为包括网状基底膜和扩展到平滑肌层。血管和粘液腺被排除在分析之外。中的所有可识别的基底膜下牙龈面积活检标本是包括在分析中。阳性染色法建立了确定颜色阈值,并通过量化跟踪区域使用数字笔(美国Wacom、温哥华、佤邦)或使用图像分析软件(对照组)。区域(μmgydF4y2Ba2gydF4y2Ba)是标准化的基底膜长度的平方(基底膜长度的平方,这样一个区域是修正的区域)。值计算使用SigmaScan (Jandel科学、Corteㄧ、钙、美国)。检测阳性染色的平滑肌层,一个目镜显微镜的应用。在100×放大,格的面积是1.0毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。的PG内或上覆平滑肌层被表达为阳性染色的百分比重叠网格交叉点的121点。测量了在放大1000×10随机选择的字段/活检。ASM地区显然是确定包括,相邻的结缔组织被排除在外。gydF4y2Ba
不同的地貌形态示量技术被用来测量牙龈PG和平滑肌层有几个原因。当有一个明确的阳性染色,在牙龈层一样,可以测量和标准化的基底膜。当阳性染色的面积更加分散,就像在ASM层,它更难以测量面积。参考卷是定义良好的,面积比估计(点估算)。PG结果之间的牙龈和平滑肌层没有直接相比。相反,同样的技术是用来比较中度和重度哮喘患者之间的信号。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
比较中PG沉积严重,中度患者和正常对照组进行使用方差分析和Bonferroni的多重比较检验。数据不是正态分布,克鲁斯卡尔-沃利斯检验,其次是邓恩的多重比较检验,应用。被认为具有统计显著性p值< 0.05。数据意味着±gydF4y2BasegydF4y2Ba。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
27哮喘病人的特点(与中度哮喘严重哮喘和13 14日)和六个控制对象如表1所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba。意味着FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba% pred严重的,温和的,对照组为63.6±6.8,87.5±4.7,109.8±7.1%。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
阳性染色实验,lumican, versican decorin被确认在所有严重的呼吸道标本和中度哮喘病人。积极染色实验,lumican versican出现在牙龈和平滑肌层;然而,两个种群之间的染色不同的模式(图1 a - cgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。而染色实验,lumican versican是突出在中度哮喘患者平滑肌层(图1 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),染色后卫在平滑肌层相对稀疏,严重哮喘患者(图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和c),不过仍大于观察对照组(图1 dgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。标志着这些后卫在牙龈层染色在中度和严重的哮喘病人。虽然decorin染色明显网状基底膜,在平滑肌层最小。温和派和严重的哮喘病患者活检标本显示大量的平滑肌。只有一小部分的活检(∼11%)包含ASM可以忽略不计。gydF4y2Ba
形态测量学gydF4y2Ba
量化的阳性染色的面积在牙龈层被基底膜正常长度的平方。测量实验,lumican, versican decorin如图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。染色lumican显著增加在严重的哮喘患者gydF4y2Ba与gydF4y2Ba正常对照组(p < 0.05),有一个强大的趋势差异实验三组(p = 0.06;克鲁斯卡尔-沃利斯测试)。没有明显差异的疣状decorin或versican在中度和严重的哮喘和对照组。gydF4y2Ba
PG表达式在平滑肌层由点计数测量,如图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。平滑肌层的中度哮喘病人,患有严重哮喘患者相比,有明显更大的biglycan蛋白表达和lumican(分别为p < 0.01和p < 0.05)和正常对照组(p < 0.001;方差分析)。最小的染色为decorin被发现在气道平滑肌层从所有三组。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
本研究的结果表明,改造的中度和重度哮喘患者气道壁区别;PG沉积在牙龈层相似的两组哮喘病人,中度哮喘患者有更高的PG在平滑肌层沉积比严重的哮喘病患者和正常对照组。这种分布矩阵的气道壁可能调节中度哮喘组气道变窄,阻碍ASM缩短。这些数据符合最近先进假设改造在哮喘气道壁的保护作用gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
增强沉积的矩阵在哮喘气道壁的牙龈层gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。研究哮喘病患者的清规戒律所突出的网状基底膜的增厚和牙龈纤维化gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。目前作者所示轻度哮喘患者,后卫versican沉积,实验和牙龈lumican增加气道壁层与正常人相比gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。de KluijvergydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba13gydF4y2Ba近日报道,虽然实验提高了航空公司的固有层从轻微哮喘病人比控制,decorin被降低了。罗伯茨gydF4y2Ba11gydF4y2Ba检查解剖标本的病人死于哮喘,并表明,气道壁versican彩色突出,实验和decorin;染色尤为明显黏膜下层和平滑肌细胞。de MedeirosgydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba19gydF4y2Ba显示最近的病人死于致命的哮喘,versican内容在内部区域的大型和小型航空公司增加与控制。也可以从一些信息gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究。成纤维细胞从内镜活检获得航空公司的轻度哮喘病人证明versican增加产量,perlecan和实验和细胞与正常对照组相比gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。目前作者表明消息decorin调节这些细胞gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。目前的研究证实这些发现:表达动力提高哮喘患者在牙龈层与控制。染色的动力实验和lumican平滑肌层显著增加患者的疾病温和的严重程度与控制。gydF4y2Ba
潜在的气道结构变化之间的相关性,在哮喘气道功能之前解决。增加胶原蛋白沉积之间的联系subepithelium和哮喘严重程度的检查,结果众说纷纭。贝纳永gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba描述增加III型胶原免疫染色的牙龈层航空公司只有在哮喘患者患有严重疾病;然而,楚gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba无法文档之间的关联黏膜下胶原蛋白沉积和程度的疾病。当前作者之前的研究的,中度和重度哮喘患者分组,显示相对大量的黏膜下胶原蛋白沉积在这些患者中,受试者相比,有轻微疾病和正常对照组gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。这个观察是进一步解决最近的重叠导致的一组病人当前的研究gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。牙龈纤维化的百分比在中度和重度哮喘患者之间没有什么不同,之间的距离ASM和上皮细胞显著减少严重的哮喘病人。ASM质量也更严重的病人。然而,细胞外基质的变化水平的平滑肌和疾病严重程度的关系没有检查之前。gydF4y2Ba
目前作者以前PG之间表现出显著相关性气道壁的沉积在牙龈层和临床疾病gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。牙龈之间的显著相关性决定沉积PG和航空公司反应轻微的过敏性哮喘患者。同样,Westergren-ThorssongydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba在成纤维细胞与内镜活检显示,哮喘患者最大程度的高反应性细胞产生更多的动力。gydF4y2Ba
目前发现更为温和的哮喘患者有PG在平滑肌层沉积比严重的哮喘病患者也许是令人惊讶的。没有发布信息后卫在ASM对照组。当前研究的结果证明最小沉积nondisease条件下ASM层内的动力。PG含量增加的潜在影响在ASM层通过考虑理论模型有最好的理解gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。一般公认的观点是,增加矩阵气道壁的沉积会导致气道收缩;一层增厚粘膜下将导致更大程度的鲁米那缩小对于一个给定的ASM收缩的程度。最近,这个假设被认为增加矩阵反击沉积在平滑肌层可能有调节作用gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。过度矩阵可以增加阻抗ASM收缩,从而减少实际长度变化的平滑肌收缩的刺激程度。沿着这些线路,绿色大苹果gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba表明,切除气管条接触蛋白酶解矩阵的显示增强的缩短收缩刺激的反应。最近的一项研究由酒井敦gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba表明,气道壁增厚,以电脑断层扫描来衡量,与哮喘患者的气道反应性负相关。当前数据,显示更大的矩阵在平滑肌层沉积在哮喘患者在临床疾病更严重的是谁,是患者的第一个直接证据来支持假设矩阵在ASM层沉积可能调节疾病严重程度。进一步的证据可以从最近的一次尸检研究由de Medeiros致命的哮喘患者gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。虽然这些作者没有具体量化后卫在ASM层,致命的哮喘病人气道显微照片显示明显缺乏PG ASM的疣状层。gydF4y2Ba
不幸的是,在当前的研究中,是不可能测量气道反应在两组患者中,因为他们的潜在疾病的严重性和基线气道狭窄的程度。这将是有趣的关联响应的PG ASM层内的沉积。gydF4y2Ba
一个潜在的混杂因子与类固醇治疗的数量由两组患者接收。而类固醇可能会影响PG沉积gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,没有gydF4y2Ba先天的gydF4y2Ba理由指望类固醇不同会影响沉积的牙龈gydF4y2Ba与gydF4y2Ba平滑肌层。gydF4y2Ba
后卫很可能候选人影响ASM的机械阻抗层。动力由一个蛋白质核心咽侧链相连。这些亲水性侧链影响组织膨通过改变组织的含水量,从而系统的机械特性gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。此外,动力分配调节胶原fibrillogenesis,可能影响组织力学gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba对胶原原纤维形成的影响gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。现在的作者进行了实验gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba模型,证明改变动力影响组织粘弹性行为。孤立的实质条实验表明,特定的降解动力改变组织的粘弹性行为gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。组织倒电容和电阻都咽侧链的消化后下降。在gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba实验老鼠缺乏decorin缺乏decorin力学特性的影响的实质组织和气管力学检测。肺是增加和气道阻力降低gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。因此,后卫在哮喘气道壁的变化可能导致的机械行为改变气道。是否改变是积极的或消极的方向可能取决于气道壁的特定层沉积的增强。gydF4y2Ba
进一步的问题是动力的影响功能或相邻结构细胞的表型特征。同样,一些信息是可用的gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba研究。赫斯特gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba显示各种ECM蛋白质,如胶原蛋白、纤粘连蛋白,有能力影响ASM扩散。约翰逊gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba报道,由哮喘ASM ECM蛋白质分泌,可能包括PG,增强ASM扩散,以自分泌的方式。精确的PG对ASM增殖和/或收缩性的影响仍有待确定。gydF4y2Ba
总之,本研究的结果表明,中度哮喘病人有相对大的沉积的蛋白多糖气道壁的平滑肌层比患者更严重的疾病。这个增强的沉积矩阵可能有调制作用,防止过度的平滑肌收缩。它也可能影响表型平滑肌本身的行为。这些是第一批从病人收集的数据支持的假设在哮喘气道重构的可能是一个“朋友,而不是敌人”gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2005年4月20日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2006年8月24日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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