文摘gydF4y2Ba
特发性肺纤维化预后不良,几乎没有有效的治疗方法。免疫抑制剂环孢菌素可以抑制肿瘤生长因子(TGF) -β-induced胶原沉积gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba,广泛应用于日本作为一个强有力的antifibrotic代理。他克莫司(吸收FK506)是另一个吸引人的免疫抑制剂,这可能是有用的治疗肺纤维化。本研究的目的是阐明antifibrotic吸收FK506的效果。gydF4y2Ba
吸收FK506的抑制作用在培养的肺成纤维细胞的细胞胶原蛋白合成,TIG-3-20, antifibrotic影响博来霉素(BLM)全身的肺纤维化小鼠了。gydF4y2Ba
吸收FK506抑制TGF-β-induced胶原蛋白合成,抑制TGF-βI型受体的表达(TβR-I) TIG-3-20细胞。符合gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba发现,吸收FK506治疗开始在6天减毒BLM-induced肺纤维化,部分gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba减少TβR-I表达式。吸收FK506治疗在急性BLM损伤阶段意外增加支气管肺泡灌洗液的促炎细胞因子水平和增强肺损伤,导致可怜的生存。gydF4y2Ba
总之,目前的结果表明,吸收FK506的antifibrotic效果和治疗肺纤维化的可能是有用的,尽管它使用在急性炎症阶段可能加重肺损伤。gydF4y2Ba
特发性肺纤维化是一种无法治愈的疾病预后不良。导致肺纤维化的分子机制知之甚少。结果肺组织病理学变化可以通过重叠的不同特性,以不同程度的炎症和细胞外基质(ECM)分子的积累肺泡和间隙空间gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。糖皮质激素,有或没有细胞毒性药物,目前用于治疗肺纤维化gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。然而,这种疾病通常是进步的、不可逆的,无论治疗。gydF4y2Ba
他克莫司(吸收FK506)是一种钙调磷酸酶抑制剂和特定抑制剂的早期功能,已广泛应用在人类器官移植的免疫抑制剂。吸收FK506的抑制机制类似于环孢菌素(CsA),虽然有大量的效力和化学结构的差异gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。最近,据报道,CsA抑制肿瘤生长因子(TGF) -β-induced信号和胶原沉积gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba直接抑制AP-1 / JunD激活gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。此外,在临床报告CsA被表示为一个有吸引力的药物治疗间质性肺炎gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。吸收FK506, higher-potency免疫抑制剂,可能是一个有用的antifibrotic代理治疗肺纤维化。gydF4y2Ba
TGF-β中央纤维发生的因素在肺纤维化的发展gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。这是促有丝分裂的细胞因子和趋化因子对成纤维细胞和促进ECM蛋白质的积累,增加胶原蛋白的合成和抑制矩阵退化。中和抗体的TGF-β降低实验性肺纤维化gydF4y2Ba7gydF4y2Ba和外源表达Smad7, TGF-β信号通路的抑制剂,防止博来霉素(BLM)全身的肺纤维化小鼠gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。因此,堵塞的细胞影响TGF-β可能提供一种有效的治疗肺纤维化。胞质结合蛋白的吸收FK506 FKBP12,已被证明与TGF-β受体的激活域(TβR)我负责启动下游信号通路gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。然而,它尚未完全阐明,如果还是如何,吸收FK506与TβR-I肺纤维化。本研究调查了在成纤维细胞吸收FK506对TGF-β-induced胶原蛋白合成的影响。吸收FK506的antifibrotic效应在小鼠BLM-induced肺纤维化模型也被评估。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
试剂gydF4y2Ba
请提供了吸收FK506阿斯特拉制药有限公司(日本东京)。解决方案的形式吸收FK506·注射液(5毫克gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)在4毫升无菌PBS稀释股票的解决方案,并进一步稀释到适当的浓度与PBS用于实验。BLM盐酸盐(Nihonkayaku,大阪,日本)溶解在无菌PBS。gydF4y2Ba
细胞培养gydF4y2Ba
人肺成纤维细胞的细胞系TIG-3-20得到日本收集的研究生物细胞银行(日本大阪)。细胞培养在组织培养瓶(美国新泽西州猎鹰,富兰克林湖)基底鹰的介质(本;美国GIBCO表达载体,卡尔斯巴德,CA),补充10%胎牛血清(的边后卫;血清学Corp .)正在美国GA)和1% penicillin-streptomycin (GIBCO表达载体)。治疗进行了5%股份有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在37°C在湿润的气氛中。细胞被使用在25日和30日之间的通道。gydF4y2Ba
胶原蛋白测定gydF4y2Ba
胶原蛋白与Sircol胶原蛋白进行了化验分析工具包(英国Newtownabbey Biocolor)根据制造商的协议。简单,1毫升Sircol染色试剂添加到100年µL文化上层清液或胶原蛋白标准和孵化为30分钟25°C。离心后10000×gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟,浮在表面的被丢弃。绑定染料释放到溶液中,1 0.5毫升氢氧化钠添加到collagen-bound染料颗粒。每个样品的光学密度在540 nm用分光光度计测定。gydF4y2Ba
制备蛋白质和西方的印迹gydF4y2Ba
TIG-3-20细胞种植在本subconfluence + 10%的边后卫。24小时血清饥饿后,细胞溶解在radioimmunoprecipitation化验(里帕)裂解缓冲(sc - 24948;圣克鲁斯生物技术公司,圣克鲁斯,CA,美国)。溶菌产物被储存在−80°C进行进一步分析。gydF4y2Ba
小鼠肺组织被单一化3毫升(1 g)里帕裂解缓冲。匀浆孵化在冰1 h和澄清在15000转离心10分钟。上层含脂质又丢弃,样本在15000转离心10分钟。切除后剩余的脂质层,上层清液被储存在−80°C到分析。gydF4y2Ba
免疫印迹分析,15µg的蛋白质样品决定使用一个直流试验设备(美国Bio-Rad大力神,CA)是由SDS-polyacrylamide凝胶电泳分离和转移到PVDF膜(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。一夜之间,屁股被探测的1:1000稀释主要抗体TβR-I或TβR-II(兔多克隆抗体TβR-I (v - 22)或TβR-II (c-16);圣克鲁斯生物技术有限公司)在0.5%牛奶/ Tris-buffered盐水+ 0.05%渐变20。墨迹是孵化与辣根peroxidase-conjugated anti-rabbit免疫球蛋白G (Ig)。蛋白质含量呈现与西方闪电+化学发光试剂(美国PerkinElmer生命科学,波士顿,MA)和量化扫描密度计。gydF4y2Ba
动物和治疗gydF4y2Ba
六个雄性C57BL / 6小鼠体重- g从日本购买SLC Inc .(日本静冈县)和特定的无菌条件下保持在一个恒定的温度和食物和水gydF4y2Ba随意gydF4y2Ba熊本大学动物设施(熊本、日本)。所有程序批准的动物是动物保健和使用委员会Kunamoto大学。gydF4y2Ba
老鼠被随机分配到一个五组包含5个老鼠。老鼠在组1和2治疗气管内的50µL无菌PBS单独或PBS包含吸收FK506(1毫克公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。诱发肺纤维化,老鼠在组三、四和五BLM (3 - 5 U·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba体重50µL无菌PBS)。组三个当时对待PBS车辆,和老鼠组4和5每天与腹腔内注射吸收FK506治疗(1毫克公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在0或天6天)开始。所有程序进行麻醉诱导下腹腔内注射的水合氯醛(400 mg·公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Bai.p。gydF4y2Ba)。在指定的时间点(天3、7、14 BLM)后小鼠死亡,支气管肺泡灌洗(BAL),双肺和液态氮冷冻立即删除。组织样本存储在−80°C,直到进一步的处理。gydF4y2Ba
组织学gydF4y2Ba
动物犀牛和灌注gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba左心室和2.5毫升PBS。肺被通货膨胀率为0.7毫升缓冲10%福尔马林固定24小时解决方案,然后根据标准处理程序和嵌入在石蜡。部分3µm大小,安装在幻灯片和苏木精和伊红染色。gydF4y2Ba
羟脯氨酸量化gydF4y2Ba
量化胶原蛋白沉积,羟脯氨酸含量测定如前所述gydF4y2Ba10gydF4y2Ba。总之,切碎的肺是看在110°C 6 N盐酸水解16 h。pH值调整与氢氧化钠6.5 - -7.0,和样品体积与无菌水调整到30毫升。一个2毫升整除的样品溶液加入1毫升1.4%氯胺T和孵化在室温20分钟,1毫升3.15米高氯酸为5分钟然后添加和孵化,紧随其后的是添加1毫升Erlich设计的解决方案。孵化后20分钟60°C,吸光度测量用分光光度计在560海里。羟脯氨酸的量是由与已知浓度的羟脯氨酸的标准曲线准备试剂。gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
肺部分(3µm厚)嵌入在石蜡在二甲苯和水化deparaffinised分级乙醇系列和PBS。进行免疫组织化学染色对TβR-I TβR-I的兔多克隆抗体(v - 22)稀释1:200一夜之间在4°C。免疫反应性得到了二级抗体共轭peroxidase-labelled葡聚糖聚合物(想象+;DAKO Corp . Carpinteria、钙、美国)和diaminobenzidine衬底(DAKO),根据制造商的建议。然后用苏木精复染色部分。gydF4y2Ba
落下帷幕,肺组织准备gydF4y2Ba
后腹腔内水合氯醛麻醉,总共3毫升PBS气管内的注入,在三个整除1毫升,和检索。球流体(BALF)离心5分钟,每分钟1500转,浮在表面的游离被用于生化分析。对于每个动物,细胞颗粒在1毫升resuspended PBS和总白细胞计数进行血球计。细胞差异离心法测定与DiffQuik cytospin和染色(Sysmex,神户,日本)。gydF4y2Ba
评估白蛋白漏gydF4y2Ba
检查肺血管通透性、BALF /血清白蛋白(B / S)比率通过ELISA测定(TX Bethyl实验室Inc .,蒙哥马利,美国)。gydF4y2Ba
肺wet-to-dry重量比率gydF4y2Ba
在另一个系列的实验中,小鼠犀牛和胸部打开gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba中线切口。肺部轻轻注入了2.5毫升无菌PBS从心脏30年代和认真分析从大型航空公司、心脏和纵隔结构,流体与软组织纸吸收过剩。肺部被立即重菜(湿重),后又在一夜之间被放置在烘箱中80°C(干重)计算的湿/干重量比(W / D)。gydF4y2Ba
测定BALF中细胞因子水平的差异gydF4y2Ba
水平的活跃TGF-β1测定小鼠免疫测定设备(研发系统,明尼阿波利斯,美国)根据制造商的建议。的敏感性分析是3 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。水平的白介素(IL) 1β,肿瘤坏死因子(TNF) -α和干扰素(IFN) -γBALF和鼠标ELISA试剂盒测定(BioSource国际,打击士气,CA)根据制造商的协议。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
数据表示为±gydF4y2Ba扫描电镜gydF4y2Ba对于所有平均值进行比较分析。学习任务或Mann-Whitney紫外线测试被用于双官能团的比较。的假定值< 0.05被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
在TIG-3-20细胞吸收FK506抑制TGF-β-induced胶原蛋白合成gydF4y2Ba
测试的能力吸收FK506减少TGF-β-induced胶原蛋白合成、人工肺TIG-3-20细胞被刺激10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba重组人类TGF-β没有或不同浓度的吸收FK506的存在(图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。刺激与10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaTGF-β1诱导增强胶原蛋白生产的1.5倍。吸收FK506治疗显著降低TGF-β1-induced胶原蛋白合成。然而,吸收FK506对基线水平没有影响这些细胞的胶原蛋白的生产。胞质结合蛋白的吸收FK506 FKBP12,据报道与TβR-I的激活域进行交互gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。因此,目前的作者提出,吸收FK506抑制调制TβR-I TGF-β-induced胶原蛋白合成的表达式。西方墨点法用于分析引起TβR-I BLM的表达水平在没有刺激或吸收FK506的存在(图1 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。与100年相比,如果细胞,细胞刺激ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaBLM表明TβR-I程度增加的蛋白质。吸收FK506治疗(10 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)显著降低BLM-induced TβR-I的表情。表达TβR-II也决定。TβR-I相比,TβR-II表示结构上并没有明显改变对BLM治疗。gydF4y2Ba
吸收FK506变弱BLM-induced在小鼠肺纤维化gydF4y2Ba
前面提到的鼓励吸收FK506的影响调查结果gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。因此,鼠标BLM-induced肺纤维化模型被用来评估antifibrotic吸收FK506的效果。吸收FK506治疗了6天,以避免吸收FK506的抗炎效应在急性BLM-injury阶段,从第一天到第五天gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。吸收FK506的antifibrotic效果评估通过组织学检查的苏木精和伊红染色幻灯片14天(图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。没有观察组织学变化控制肺从接受PBS老鼠(PBS /车辆;图2一个gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)或从PBS / FK506-treated老鼠(PBS /吸收FK506;图2 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。肺部分BLM-challenged吸收FK506的老鼠没有显示明显的组织学变化,包括:1)大纤维领域;2)倒塌的肺泡空间;和3)在胸膜下牵引支气管扩张、支气管旁地区(BLM /车辆;图2 cgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。然而,相比之下,从BLM /车辆小鼠肺,肺BLM / FK506-treated老鼠(天6-13)显示有限的纤维化病变的衰减强度(BLM /吸收FK506;图2 dgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
肺纤维化羟脯氨酸含量也检查了通过测量肺胶原蛋白积累的索引。羟脯氨酸含量数据表示为每左肺(图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。调节羟脯氨酸的积累对BLM政府显著降低反应吸收FK506与车辆(BLM /车,61.8±8.4µg /左肺gydF4y2Ba与gydF4y2BaBLM /吸收FK506 76.8±7.2µg /左肺;n = 7;p < 0.05)。吸收FK506治疗本身没有改变羟脯氨酸水平(PBS /吸收FK506: 51.7±5.5µg /左肺,n = 3;PBS /车辆:55.1±4.9µg /左肺,n = 3)。gydF4y2Ba
据报道,TGF-β肺纤维化的发病机制中扮演着关键角色gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。确定吸收FK506的antifibrotic效果取决于TGF-β活动,活跃的TGF-βBALF的水平是衡量天7和14。TGF-β水平增加对BLM管理,14天,高于7天。然而,在活跃TGF-β水平没有显著差异BLM /车辆老鼠和BLM /吸收FK506老鼠(7天:49.9±17.5 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与gydF4y2Ba40.1±5.1 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;14天:87.6±6.8 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与gydF4y2Ba92.8±8.6 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;图3 bgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
TGF-β显示生物效应的活跃,细胞需要TβR-I的存在。因此,免疫组织化学检查TβR-I表达式进行肺部分BLM-challenged老鼠没有或吸收FK506的存在。肺部分控制或BLM-challenged 14天小鼠染色anti-TβR-I抗体。在正常肺(PBS /车),TβR-I染色是无处不在的支气管细胞(数据未显示),肺泡上皮细胞和肺泡巨噬细胞(图4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。从BLM /车辆小鼠肺、强TβR-I染色发现上皮细胞和纺锤状间质细胞的纤维化(图4 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,BLM /吸收FK506小鼠肺显示减少TβR-I染色细胞在纤维领域(图4 dgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。特别是TβR-I染色纤维的成纤维细胞面积显著减少BLM /吸收FK506老鼠的价格相比BLM /车辆老鼠。控制与兔肺免疫球蛋白g而不是anti-TβR-I没有免疫反应性(图4 fgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。此外,西方墨点法用于分析TβR-I肺组织中的表达水平(图5所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。与PBS /车辆小鼠相比,BLM-challenged老鼠增加TβR-I蛋白质的水平。吸收FK506治疗(天6-13)显著降低BLM-induced TβR-I表达式。TβR-I相比,TβR-II表示结构上并没有明显改变对BLM或吸收FK506治疗。gydF4y2Ba
早期在BLM吸收FK506治疗小鼠的影响gydF4y2Ba
据报道,钙调磷酸酶抑制剂抑制炎性介质的释放除了拥有T-lymphocyte-associated免疫抑制活性gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。因此,连续吸收FK506治疗在急性BLM损伤启动阶段预计将导致减少纤维化在BLM模型中。BLM-challenged老鼠每天摄入吸收FK506前一天BLM政府直到13天,和生存分析kaplan meier曲线(图。6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。只有少数BLM /车辆或BLM /吸收FK506 6-13(天)老鼠死于第14天。BLM的生存/吸收FK506(天0 - 13)小鼠明显减少,存活率并没有改善,即使吸收FK506治疗仅限于天0 - 5(数据没有显示)。早期吸收FK506治疗在这个组织还降低了生存。gydF4y2Ba
确定为什么早期吸收FK506治疗BLM-challenged老鼠的存活率下降,病理组织检查肺部分从7天(图7所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。部分从PBS /车辆老鼠和PBS /吸收FK506(6天)小鼠肺架构(图7显示正常gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和7 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。部分从BLM /车辆(6天)小鼠显示局部间隙壁增厚,间质单核细胞浸润,主要在支气管旁区域(图7 cgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。部分从BLM /吸收FK506(6天)老鼠标志着肺泡间质水肿和炎症细胞浸润在空间(图7 dgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
分析吸收FK506的影响在BLM-challenged小鼠肺部炎症,总细胞数和微分在BALF细胞分析评估3天,7和14。而接受pbs老鼠时,老鼠BLM-challenged显著增加BALF中细胞总数3和7天(表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。的主要细胞类型BALF肺泡巨噬细胞,通常与激活的迹象与细胞内液泡增多(扩大)。7天,BLM /吸收FK506(天鹿)老鼠总细胞数高于BLM /车辆老鼠。没有明显的差异这两个团体之间的微分单元分析。gydF4y2Ba
吸收FK506对肺血管通透性的影响gydF4y2Ba
的基础上BALF的组织学结果和结果分析,当前作者提出,吸收FK506增强了BLM小鼠的肺通透性,特别是在急性BLM损伤阶段。肺渗透率的变化以应对BLM分析通过比较B / S比值(图8gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。7天,BLM的B / S比值/车辆老鼠和BLM /吸收FK506(6天)小鼠显著增加与控制的老鼠相比,PBS /车辆老鼠或PBS /吸收FK506老鼠(6天)。然而,增加7天也显著大于在BLM /吸收FK506(6天)老鼠比BLM /车辆老鼠(16倍增加gydF4y2Ba与gydF4y2Ba分别为增加9倍)。没有观察到B / S比值显著差异这两个组之间在3天(数据没有显示)。此外,肺W / D重量比率测定和比较每组(n = 3) 7天(图8 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。肺W / D比率显著增加在BLM /吸收FK506(6天)小鼠的价格相比BLM /车辆老鼠(1.47倍gydF4y2Ba与gydF4y2Ba分别为1.22倍)。gydF4y2Ba
BALF中促炎细胞因子水平gydF4y2Ba
进一步阐明吸收FK506对肺部炎症和血管通透性的影响,促炎细胞因子的浓度TNF-α,IL-1βIFN-γ以BALF在天3和7(图8 cgydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。在BLM /车辆和BLM /吸收FK506(6天)小鼠,增加促炎细胞因子水平在第三天发现了第七天回到了基底的水平。然而,在第三天,水平明显高于在BLM /吸收FK506(6天)老鼠比BLM /车辆小鼠(p < 0.05)。没有明显差异的水平在7天。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
本研究证明了以下。1)吸收FK506抑制TGF-β-induced人类肺成纤维细胞的细胞胶原合成。2)吸收FK506变弱BLM-induced肺纤维化小鼠当吸收FK506治疗开始后6天BLM管理。3)吸收FK506抑制BLM-induced TβR-I受体的表达gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。4)在急性BLM损伤阶段吸收FK506治疗肺血管通透性和分泌增加,并减少BLM-challenged老鼠的生存。gydF4y2Ba
目前的治疗肺纤维化的选项是无效的和相关的严重的发病率和贫穷的结果gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。目前治疗这种疾病的关注与代理antifibrotic抑制纤维化gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。最近,有人建议,CsA抑制TGF-β-induced信号和胶原蛋白沉积gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。鉴于吸收FK506比CsA更强有力的免疫抑制剂,当前作者感兴趣是否更有效吸收FK506 antifibrotic药物。gydF4y2Ba
吸收FK506是已知的炎症细胞表现出它的药理作用,包括t细胞,巨噬细胞gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,嗜酸性粒细胞gydF4y2Ba16gydF4y2Ba和中性粒细胞gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。关于吸收FK506对成纤维细胞的影响所知甚少。目前的研究表明,吸收FK506抑制TGF-β-induced人类肺成纤维细胞的细胞胶原合成。gydF4y2Ba
TGF-β已经组织纤维化中发挥关键作用,包括肺纤维化gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。TGF-β启动信号通过激活heterodimeric跨膜复杂TβR-I和TβR-II丝氨酸/苏氨酸激酶。在绑定TGF-β,活跃起来从而autophosphorylated TβR-II磷酸化,激活TβR-I。TGF-β从细胞核受体发出信号gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba一组Smad蛋白质。虽然immunophilin FKBP12,调节吸收FK506的影响,已经被证明可以直接干扰TβR-I信号gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,其功能在TGF-β-mediated信号仍然是有争议的gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。然而,吸收FK506可以有效竞争与TβR-I FKBP12绑定gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。阐明的可能作用吸收FK506 TGF-β信号和TGF-β-induced胶原蛋白合成、吸收FK506 TIG-3-20细胞是评估的影响。BLM报道刺激TβR-I在肺成纤维细胞的表达gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。因此,BLM-induced upregulation TβR-I表达的评估缺乏和吸收FK506的存在。显著抑制作用的吸收FK506 BLM-induced TβR-I表情显然是显示。吸收FK506也完全抑制TGF-β-induced胶原蛋白合成。这也可能是由于失活的转录因子gydF4y2Ba23gydF4y2Ba或掩饰的监管TGF-β受体,这是重要的受体TGF-β信号和营业额gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。确切的机制尚不清楚,需要进一步的调查。gydF4y2Ba
据报道,TGF-βmRNA的表达小鼠BLM-induced肺纤维化模型中迅速增加,峰后5天BLM管理gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。因此,在目前的研究中,吸收FK506治疗开始在6天来评估其antifibrotic效果。在当前的研究中,吸收FK506治疗开始在6天显著减毒BLM-induced肺纤维化。虽然没有观察到不同水平的活跃在BALF TGF-βBLM /车辆老鼠和BLM /吸收FK506老鼠,TβR-I表达式在肺纤维化,评估通过免疫染色和免疫印迹,在BLM /吸收FK506小鼠大大下降,这表明吸收FK506抑制TGF-β信号gydF4y2Ba通过gydF4y2BaTβR-I表达成纤维细胞减少,导致BLM-induced肺纤维化的改进。gydF4y2Ba
吸收FK506治疗在急性BLM损伤阶段意外恶化BLM-induced渗出性炎症,导致高死亡率。吸收FK506的早期政府增加促炎细胞因子水平在第三天BALF和增强肺渗透,导致严重的肺损伤。促炎细胞因子,如IL-1βTNF-αIFN-γ,已经被证明增加肺血管内皮渗透性和随后的肺部水肿gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。与此一致的是,过度性肺水肿,评估组织病理学,B / S比值升高和肺W / D重量比,是典型的观察7天BLM /吸收FK506老鼠(6天)。这个吸收FK506的不良效应的机制是未知的。然而,CsA,它已被证明诱导促炎细胞因子的生产在人类呼吸道上皮细胞剂量依赖性的方式gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,尽管其他的研究也表明,CsA抑制炎性介质的释放,影响T-lymphocyte-associated免疫抑制行为gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。这些发现急性损伤阶段会受到牵连,个人长期接受吸收FK506作为免疫抑制药物可能更容易患急性肺损伤和permeability-pulmonary水肿。gydF4y2Ba
总之,吸收FK506可能antifibrotic效果gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。然而,它也可能不利影响肺当管理条件下的急性炎症。虽然吸收FK506是一个有吸引力的人类肺纤维化治疗候选人,额外的调查是必要的。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者要感谢阿斯特拉制药有限公司(日本东京)请提供吸收FK506。作者欣赏价值的技术支持m . Endo和k .佐藤在作者的实验室工作。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2005年6月16日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2005年的10月25日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba