摘要
T-Helper(Th)2细胞因子被认为在特应哮喘中介绍过敏性炎症的大多数特征。然而,它仍然尚不清楚趋化因子途径是否在人类过敏反应期间直接选择招募Th2细胞到气道。
Bronchoalveolar灌洗(BAL)在15个非墨镜温和的Atopic哮喘症中进行,前24小时进行了24小时,并通过ELISA测定与T细胞募集有关的趋化因子。
Th2相关的C-C趋化因子(CCR)4配体,巨噬细胞衍生的趋化因子/ C-C趋化因子配体(CCL)22和胸腺和活化调节的趋化因子/ CCL17在攻击后的BAL中增加。这些趋化因子随着淋巴细胞数和白细胞介素(IL)-5和IL-13在攻击后BAL的趋化因子显着相关。相比之下,三个带有的TH1相关的趋化因子中的两个没有改变。干扰素(IFN)-γ/ CXC趋化因子配体(CXCL)9或巨噬细胞炎症蛋白-1α/ CCl3诱导的单孔诱导的单对象改变;然而,观察到IFN诱导的蛋白-10KDA / CXCL10的显着增加,而不与T细胞流入不相关。在来自特应激供体的外周单核细胞中,通过IL-4和IL-13诱导CCL22和CCL17,进一步支持CCL22 / CCL17和TH2细胞因子之间的关系。最后,CCL22能够在表达CCR4的外周CD4 + T细胞中触发肌动蛋白聚合。
因此,在过敏原暴露后,C-C趋化因子受体4配体在Atopic哮喘症的气道上调节,有助于呼吸道的T细胞流入,与TH2-细胞因子反应密切相关。
C. Pilette由瑞士洛桑欧洲呼吸学会(ERS;188bet官网地址批准号ltrf2002 - 037)。这项工作得到了英国国家哮喘运动(National Asthma Campaign UK)的拨款和葛兰素史克(GlaxoSmithKline)的财政支持(J.N. Francis的薪水)。*作者对这项研究贡献相同。
T细胞的组织渗透,其偏离T-辅助杆(TH)2表型作为哮喘和相关过敏性疾病的重要特征。1.因此,产生特异性细胞因子的T细胞(白介素(IL)-4,IL-5,IL-9和IL-13)是嗜酸性粒细胞和肥大细胞的免疫球蛋白(Ig)E中间体,粘液产生,募集和活化关键,并为气道高反应的发展(AHR)2.虽然在几项研究中记录了在哮喘急性急性急诊期间诱导Th2细胞因子的表达3.-6.,趋化因子反应过敏原的挑战的个人资料已经在变应性哮喘仅部分定义。
它已经表明,趋化因子在哮喘季节性过敏原的挑战后迅速引起的,与其相关影响气道嗜酸性粒细胞的数量7..Eotaxin受体C-C趋化因子受体(CCR)3由嗜酸性粒细胞和嗜碱粒细胞表达,但在活化的人T细胞上处于非常低的水平在体内8.那9..除了CCR3,CCR4和CCR8已与Th2细胞表型相关10..更具体地,已经提出了CCR4途径以将过敏原诱导的T淋巴细胞募集到小鼠的气道11.那12.和人类9.那13..而Th2的表达谱与与t淋巴细胞流入气道有关的Th1趋化因子,在人类晚期哮喘反应的同一研究中尚未得到评估。因此,尚不清楚特应性哮喘患者气道对过敏原暴露的趋化因子反应是否向Th2型极化,以及这种反应在多大程度上与Th2细胞因子反应相关。
当前作者以前曾表明CCR4的基因表达,通过评估原位杂交,在来自挑战的Atopic哮喘学的支气管组织中升级13..此外,CCR4表达变应原攻击后诱导T细胞浸润相关。本研究的目的是评估,在特应性哮喘,由T细胞表达的趋化因子受体的配体的支气管表达变应原引起的变化,并且更具体地,那些具有相关联的Th2与Th1应答。因此,当前作者评估Th2-和在支气管肺泡灌洗(BAL)液中Th1相关趋化因子之前和之后的过敏性哮喘患者的支气管局部过敏原攻击恢复。作者还评价了健康,非特对照组的趋化因子反应过敏原的挑战。Macrophage-derived chemokine /C-C chemokine ligand (CCL)22, thymus and activation-regulated chemokine/CCL17 (CCR4 ligands) and I-309/CCL1 (CCR8 ligand) represented Th2-related chemokines, while putative Th1 chemokines consisted of macrophage inflammatory protein‐1α/CCL3 (ligand for CCR1 and CCR5), monokine induced by interferon (IFN)‐γ/CXC chemokine ligand (CXCL)9 and IFN-inducible protein‐10 kDa (IP‐10)/CXCL10 (CXC chemokine receptor (CXCR)3 ligands). Chemokine pathways related to T-cells, irrespective of their Th2/Th1 phenotype (CCR6-7, CXCR1-2-4-6, CX3.CR1)14.,没有评估。研究了趋化因子响应和TH2细胞因子(IL-4,IL-5,IL-13)之间的关系在体内.为了进一步评估趋化因子和细胞因子反应之间的关联,当前作者评估,在体外,来自特应激供体的外周血单核细胞(PBMC)中细胞因子调节趋化因子。最后,作者评估了使用肌动蛋白聚合作为功能读数的散发循环,血液T细胞对CCR4配体的反应性15.那16..
材料与方法
患者表征
根据美国胸部社会标准所定义的,十五种非镜头特应学科,临床历史,具有由美国胸部社会标准所定义的,参与了这项研究。所有18-55岁的患者都需要在一秒钟内具有基线强制呼气量(FEV1)> 80%预计乙酰甲胆碱激发浓度引起FEV下降20%的1<32 mg·ml-1但> 0.5 mg·ml-1.所有受试者在家用尘螨皮肤点刺试验后15分钟均需有>直径5‐mm的伤口(Dermatophagoides pteronyssinus)或蒂莫西草花粉(猫尾草)提取(Soluprick;ALK Abello, Horsholm,丹麦),在稀释剂阴性和组胺阳性对照,以及血清特异性IgE抗体(通过放射变应原吸收试验(RAST)检测)对同一过敏原。如果受试者在过去6个月内接受过全身糖皮质激素治疗或在过去5年内接受过过敏原免疫治疗,则被排除在外。此外,在变应原激发前停止吸入皮质激素≥2周。患者特征(过敏原敏感性,后期反应)见表1⇓.In addition, four healthy, nonatopic and nonsmoking volunteers (aged 18–55 yrs, with negative skin and RAST tests to common aeroallergens) were included as a control group. The study was performed with the approval of the Ethics Committee of the Royal Brompton and Harefield Hospitals NHS Trust and the written informed consent of all the participants.
Fibreoleptic Endobronchial过敏原挑战
支气管镜检查的程序,BAL和节段过敏原挑衅如前所述6..在初次内镜检查中,从右上叶取BAL和相关变应原500个生物单位(先取100个单位,5分钟后取400个单位,如果局部支气管没有过度收缩)(d . pteronyssinus或者P. Praatense.为屋尘螨和花粉各自的主要过敏原,根据病史和皮肤点刺试验),在无菌生理盐水稀释,中间叶被灌输。所有的控制用挑战P. Praatense..从挑战的中间凸角段中获得24小时。FEV.1在过敏原挑战程序后仔细监测至少8小时和22-24小时。吸入β.2视角主义者根据需要进行。最大落入fev1>过敏原攻击后4小时用于定义临床后期反应。
支气管肺泡灌洗液处理
通过无菌纱布过滤BAL样品并离心。从重悬的细胞制备胞型素,将BAL上清液分成在-80℃下储存的1ml等分试样直至分析。在May-Grünwald和Giemsa染色后,对Bal细胞的甲醇固定细胞源进行总和差异细胞计数。
外周血单个核细胞培养
PBMC从特应性捐赠者的血液肝素化离心过的Histopaque隔离。Mononuclear cells were washed twice in RPMI‐1640 medium and resuspended in RPMI‐1640 supplemented with 2 mM l-glutamine, 5% human serum, 100 U·mL-1penicillin and 100 µg·mL-1链霉素。然后将PBMC孵育在1×106.细胞·好-1潮湿气氛中72小时(37°C,5%CO2), IL‐2 (10 ng·mL-1)和以下细胞因子之一:IL‐4、IL‐5、IL‐13或IFN‐γ (20ng·mL-1为每个)。植物凝集素(1µg·毫升-1)被用作阳性对照。将上清液在-20℃下冷冻直至趋化因子评估。
趋化因子和细胞因子ELISA试剂盒
使用特异性抗体对(捕获和生物素化检测),用ELISA法在未浓缩BAL和细胞培养上清中测定趋化因子和细胞因子。配对抗体CCL1、CCL3、CXCL9、CXCL10来自PeproTech (London, UK),检测抗体CCL17、CCL22。CCL17和CCL22的捕获抗体来自R&D Systems (Abingdon, UK), IL‐4、IL‐5和IL‐13的配对抗体来自BD Pharmingen (Oxford, UK)。IL‐12通过对细胞因子的所有亚单位(p35, p40, p70)的配对抗体(PeproTech)检测。
Nunc微孔板(96孔)(96孔)(Life Technologies,佩斯利,英国)涂有适当的捕获抗体,并用1%重量/体积(W / V)牛血清白蛋白(BSA) - 磷酸盐缓冲盐水(PBS)封闭。然后在适当的生物素化学检测抗体之前培养,重组趋化因子/细胞因子(从BD Pharmingen)的重组趋化因子/细胞因子(来自PEProtech)的BAL样品。通过与过氧化物酶 - 缀合的链霉抗生物肽孵育并用四甲基苯胺和过氧化氢培养来揭示反应。在450nm中记录光密度,并以pg·ml表示的浓度-1.检测限为5-10 pg·ml-1for CCL22, CCL1, CCL3, IL‐4, IL‐5, IL‐13, IL‐12 and IFN‐γ, and 2 pg·mL-1对于CCL17,CXCL9和CXCL10。一般实验室试剂从Sigma(UK)获得。
对BAL趋化因子数据进行蛋白血浆渗漏校正17.通过使用DPC免疫系统分析仪(Eurodpc Ltd,Llanberis,UK)通过化学发光免疫测定通过化学致发光免疫测定在BAL中的白蛋白浓度来测量白蛋白浓度。对于每个趋化因子,在间段挑战之前/之后计算与白蛋白的比例。
肌动蛋白聚合法测定
用染色缓冲液(0.1%w / v Bsa和0.09%w / v叠氮化物)洗涤新鲜分离的pbmc,重新悬浮在5×106.细胞·mL的-1并孵育10μg·mL-1of anti-CCR4-phycoerythrin (BD Pharmingen) and anti-CD4-phycoerythrin-Cy5 (DakoCytomation, Ely, UK) for 30 min. After washing for 10 min at 37°C in RPMI, either CCL22 or CCL17 at 10 ng·mL-1加入细胞悬液中;每隔15秒,0.5×106.除去细胞并与400μL10混合−7M FITC-labelled phalloidin, 0.125 mg·mL-1L-α-溶血磷酰胆碱和PBS中4%多聚甲醛(Sigma)。通过流式细胞学使用双激光面部(Becton-Dickinson,MountainView,CA,USA)和WinMDI软件(J.Trootter,Scrips Research Institute,La Jolla,Ca,Ca,Ca,Ca,Ca,USA),通过流式细胞仪分析固定细胞。
统计分析
通过非参数(四分位数范围)的过敏原挑战之前和之后,通过非参数核苷酸的匹配测试进行比较,并通过Spearman的秩相关试验评估相关性的相关性。通过配对的T检验分析为平均±SD的细胞培养实验的结果,并在用相同的控制条件进行多次比较时施加Bonferroni的校正。
结果
淋巴细胞招募到气道后特应哮喘的过敏原挑战
支气管内暴露于过敏原与总细胞数和淋巴细胞数高度显著升高相关(3.28 (0.08-11.43)×106.,中位数(范围),与0.36(0.06-1.12)×106.,p <0.001),恢复24小时,返回BAL(表1⇑).其中10名哮喘患者谁开发攻击后临床显著晚期反应(由FEV≥20%的跌幅定义1),七名病人显示BAL淋巴细胞≥10倍。与此相反,没有五个无应答者的显示,BAL淋巴细胞的数量的这种增加。在非特控件(未示出)在攻击后,观察到在BAL淋巴细胞没有显著增加,与不存在在这些健康受试者一个显著临床晚期应答的沿。
在过敏原攻击后,CCL22和CCL17在支气管肺泡灌洗液中诱导
基线时特应性哮喘患者BAL液上清中均检测到CCL22(图1)⇓)在过敏原攻击后,在BAL 24小时内强烈增加(P <0.001)。CCL17,CCR4的其他配体也一直在攻击后一致诱导(P <0.001)。相比之下,CCL1在局部暴露于过敏原后没有改变BAL。
在TH1相关的趋化因子CCL3中,CXCL9和CXCL10中,只有CXCL10从攻击的哮喘患者中显着上调(P = 0.004)。
CCL22和CCL17在气道过敏原挑战后局部生产
为了证实在BAL诱导趋化因子的局部挑战气道内产生时,当前作者校正趋化因子的浓度为白蛋白或尿素。白蛋白的BAL浓度变应原激发后显著增加(0.1(0.06-0.15)与0.04(0.03-0.06)毫克·毫升-1,p <0.001),与血浆蛋白质的非特异性泄漏有关,进入支气管肺泡空间。BAL UREA也倾向于挑战后增加,但不达到统计学意义(0.4(0.4-0.5)与0.3 (0.2 - -0.3), p = 0.07)。挑战后,CCL22/白蛋白、CCL17/白蛋白和CXCL10/白蛋白比值也显著增加,提示气道内局部产生,这些趋化因子的血清水平没有显著变化(数据未显示)。
与过敏原引起的淋巴细胞流入气道CCL22和CCL17归属关系
CCL22的水平与胚胎过敏原攻击后的BAL中淋巴细胞的数量显着相关(图2⇓).观察到类似的相关性为CCL17(在反应:R = 0.62,P = 0.02)。另外,在10个应答,CCL22与淋巴细胞流入到气道中的增加倍数方面相关。无CCL22或CCL17和其他细胞类型之间观察到显著相关性,例如嗜酸性粒细胞(未示出)之间,或CXCL10和过敏原诱导的细胞流入到气道。然而,CXCL10与临床晚期响应性(r = 0.55,P = 0.04)相关,特别是在反应性(r = 0.65,P = 0.03)。
过敏原刺激后,Th2细胞因子上调
为了评估后支气管节段性变应原攻击的趋化因子和细胞因子应答之间的关系,也测定Th2和Th1细胞因子。IL‐5 and IL‐13 were markedly increased in BAL from atopic asthmatics 24 h after allergen challenge, as compared to baseline (fig. 3⇓;p <0.001和p = 0.002)。IL-4仍然在检测限之上,挑战后没有改变(数据未显示)。与Th2细胞因子相比,IFN-γ和IL-12的水平在挑战后保持不变。
CCL22和CCL17水平与Th2细胞因子相关
在挑战后BAL中,CCL22与CCL17强烈相关的CCL22水平(图4⇓;r = 0.89,p <0.001)。CCL22也与IL-5和IL-13强烈相关(分别为0.84和0.77,P <0.001)。CCL17还与TH2细胞因子IL-5和IL-13相关。
在健康对照中过敏原挑战后,CCL22和CCL17不会增加
在健康的非特应性对照组中,节段性变应原激发后,CCL22或CCL17没有显著增加(表2)⇓).CXCL10仍低于检测限,包括攻击后。事实上,没有一个衡量趋化因子在非特,健康对照者的攻击后BAL是显著上升。
CCL22和CCL17是上调的在体外通过Th2细胞因子
目前的作者推测,CCL22/CCL17与Th2细胞因子之间的相关性可能是由于Th2细胞因子激活后单核细胞上调了它们的产生。为了解决这一假设,我们评估了在Th2细胞因子存在下培养的PBMC产生趋化因子的情况,并与IFN‐γ进行了比较。在IL - 4或IL - 13存在的情况下,培养的单核细胞持续诱导产生CCL22和CCL17(图5)⇓), IFN‐γ下调CCL22的组成性生成。相比之下,CCL1没有表现出th2型调控模式。
正如预期的那样,IFN‐γ诱导PBMC产生CXCL10(图5)⇑),并由IL-13下调(并在较小程度上通过IL-4)。CXCL9表现出与CXCL10相同的调节模式,而IFN-γ则CCL3未显着增加。
CCL22和CCL17诱导的肌动蛋白中的T淋巴细胞的聚合
当前作者进行实验,以确定是否CCL22 / CCR4和CCL17 / CCR4途径是循环T细胞活性。功能性读数是响应于CCL22和CCL17的刺激而肌动蛋白聚合。从Atopic供体(n = 5)的外周血CD4 + T细胞的32.05±1.54%(平均±1.54%(平均±1.54%(平均±1.54%)观察到CCR4表达(n = 5)。CCR4表达血液CD4 + T细胞,与10ng·mL温育-1CCL22, exhibited ∼2-fold increase in polymeric filamentous F-actin immediately after 15 s of stimulation (fig. 6⇓).使用CCL17也观察到t细胞的细胞骨架组织发生了显著的变化,尽管这个信号比使用CCL22观察到的程度要低。
讨论
目前的作者和其他先前已记载,CCR4是上调在哮喘气道过敏原攻击后9.那13..这项研究表明,CCR4的配体也强烈变应性哮喘反应后期上调。CCL22 and CCL17 levels were increased in the BAL fluid recovered 24 h after endobronchial allergen challenge of atopic asthmatics, and significantly correlated with BAL lymphocytes to some extent, more particularly in patients developing a significant clinical late-phase response. Moreover, the current authors observed, for the first time在体内,CCL22和CCL17与IL-5和IL-13强烈相关,其在挑战上也诱导。CCL22和CCL17未在非含量,健康对照中的节段性过敏原攻击中诱导。此外,通过IL-4和IL-13诱导来自Atopic受试者的PBMC中CCl22和CCl17的表达,进一步支持CCR4配体与Th2-细胞因子反应密切相关的想法。在TH1相关的趋化因子中,在攻击后哮喘患者群体中只有CXCL10显着增加,并且与气道的T细胞流入没有相关。最后,目前的作者观察到CCR4在循环T细胞上在功能上有效,响应趋化因子配体。
在哮喘中,一次的T细胞已通过同源相互作用活化与抗原呈递细胞,它们重新在血流中循环,并在进一步变应原暴露/挑战可能被招募到气道。虽然无论全身出现的Th2分化(在排出气道的淋巴结)或本地它仍然是有争议的,它已被提出,从特应性受试者的循环T细胞是2型偏置18..由于CCR4出现选择性地在Th2淋巴细胞表达在体外10.,在特应性哮喘患者变应原激发后,CCL22和CCL17在气道中强烈上调,并与BAL淋巴细胞相关,这与循环Th2细胞的选择性招募相一致。相比之下,攻毒后CCL1没有增加,与既往研究一致,哮喘患者攻毒后CCR8的上调幅度远低于CCR49.,并且在小鼠重复暴露过敏原后,t细胞的长期招募中没有发挥重要作用12..
已经提出,细胞因子微环境,特别是由树突细胞提供的,在致敏期间起重要作用以确定T细胞谱19..同样,炎症哮喘气道中的细胞因子环境可能是在进一步暴露于过敏原时驱动血液Th2细胞组织募集的重要因素。这一假设在当前的研究中得到了支持,该研究首次表明,在哮喘晚期反应中,气道产生的ccr4结合趋化因子和Th2细胞因子之间存在很强的相关性在体内.此外,目前的作者表明,在从特应性受试者,生产CCL22和CCL17的,与此相反用CCL1单核细胞,通过IL-4和IL-13诱导。因此,它是诱人的推测,变应原致敏后,进一步变应原暴露刺激粘膜产生Th2细胞因子(由浸润性T细胞和IgE轴承白细胞)触发的Th2相关的趋化因子,即CCL22和CCL17的释放。这些趋化因子可以进而,介导选择性募集到循环Th2淋巴细胞表达CCR4的气道。既CCL22和CCL17的通过IL-4或IL-13,并通过这些趋化因子的Th2细胞因子产生细胞的选择性吸附(作为放大电路),感应可占在的Th2细胞因子之间的这种研究中观察到的相关性响应和CCR4配体。
这项研究并非旨在确定在过敏原的挑战在呼吸道发布的趋化因子的细胞源(S)。目前的作者在体外系统基于单核细胞(由单核细胞和淋巴细胞组成)代表CCR4配体的主要来源。然而,已经描述了替代来源,例如气道上皮细胞或平滑肌细胞。使用PBMC的这些发现与Andrew的结果一致et al。20.,显示CCL22在IL-4或IL-13刺激时诱导单核细胞,如在T细胞中所观察到的;虽然巨噬细胞组成型生成CCL22,但通过IL-4进一步增加,并且通过IFN-γ降低。结果表明,CCL17也可以通过肿瘤坏死因子(TNF)-α和IFN-γ刺激的支气管上皮细胞产生21..激活通过Toll样受体通过时TNF-α活化的树突细胞可以产生CCL22和CCL17,同时产生和CCL1 CXCL1022..CXCR3结合趋化因子CXCL10,包括可以通过单核细胞中释放和/或由活化的支气管上皮细胞23.,尽管有关CXCR3配体生产调控的信息较少。初步数据,包括本研究的信息,证实CXCL10的产生主要依赖于IFN‐γ,至少在外周血单个核细胞中是这样。
目前作者发现CXCL10在气道过敏原攻击可能出现有趣的情况下,在Atopic Athmatics中也显着上调。CXCL10主要涉及Th1介导的疾病,例如结节病24.或慢性阻塞性肺疾病25.,这与观察到CXCR3(CXCL10受体)主要由Th1细胞表达一致26..然而,最近的研究也表明CXCL10在哮喘中的作用。首先,据报道,CXCL10的气道表达在人类哮喘中增加27.并且在对卵磷蛋白敏化的小鼠中28..其次,在对哮喘小鼠模型中,CXCL10的双重效应已经确定的AHR和嗜酸性粒细胞组织28.那29..第三,它表明CXCL10在角质形成细胞中由两个Th1-和Th2来源的上清液诱导30..在从atopics血单核细胞中,作者在本研究中观察到,CXCL10表达仅依赖于IFN-γ(通过和IL-13抑制),作为用于观察CXCL9。然而,CXCL10未显著与来自激发的哮喘患者(未示出)在BAL IFN-γ相关,在小鼠中观察到的先前28.,提示有其他因素可以触发CXCL10的表达在体内.有趣的是,过继转移实验中,斯蒂芬斯et al。31.表明Th1细胞的活化病毒可以增强在肺病毒激发变应原 - 特异性Th2细胞的随后募集。此外,最近已经提出,在淋巴结,Th2细胞能以某种方式影响位于相同的微环境的T细胞,包括Th1细胞32.,表明T细胞程序是显影的免疫应答过程中灵活,并取决于本地提供的信号。总之,这些数据表明,CXCL10 / CXCR3可能代表参与了哮喘的另一个途径趋化因子,但它在人体的作用和意义仍有待确定。该配位体CCR4仅适度与T淋巴细胞相关的事实进一步表明,趋化因子的其它途径参与。此外,CXCR3轴也可能是通过对其他细胞类型的动作,如γδT细胞在哮喘作用33.或肥大细胞34.,表达CXCR3和其配体的响应。
关于哮喘IP-10上调的替代解释涉及Th1细胞的选择性募集。因此,已经提出了在特应患者外周血中检测到的IFN-γ-型细胞,并提出在哮喘中起作用35.那36.,特别是在疾病的症状阶段。假设哮喘的Th2定位主要表现在致敏过程中的免疫反应和过敏原暴露的急性反应;然而,慢性炎症可以通过特异性较低的t细胞谱来强调。这一观点得到了临床观察的支持,Th2- (例如变应原)和Th1-(例如病毒)驱动因子可以代表哮喘恶化的触发。
最后,可以观察到循环CD4 + T淋巴细胞的一致比例(约30%)表达CCR4,在与先前的研究一致37.那38..评估表达CCR4的循环血液T细胞在循环血液T细胞中的评价证实,这些细胞对CCL22和CCl17具有功能响应,并且可以在应固定剂暴露于特应性哮喘患者之后局部释放的这些趋化因子刺激后迁移到气道。
总之,本研究进一步凸显了C-C趋化因子受体4通路作为介导T淋巴细胞募集至发炎气道过敏性哮喘。为C-C趋化因子受体4配体:1)被强烈气道内从变应原攻击后特应性哮喘患者上调;2)向T细胞涌入到气道;和3)密切相关的T辅助2细胞因子应答。的C-C趋化因子受体4途径因此可以参与底层循环T辅助2个细胞向气道的募集选择性的机制。这项研究还表明,各种趋化因子的途径可能被牵连和支持的想法,针对一些趋化因子受体可能是适当的14.在慢性哮喘浸湿的T细胞浸润。
- 收到2003年9月10日。
- 接受2004年1月6日。
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