摘要
在比利时的囊性纤维化(CF)诊所,每3个月定期在选择性MAST培养基上评估痰标本。在这项研究中,1993年和1999年,分离株被进一步检查recA基因组DNA的限制性片段长度多态性分析和脉冲场凝胶电泳SpeI.
1993年,12名患者被植入伯克不过复杂(Bcc):b . cenocepacia(n = 6),B. Multivorans.(n = 3),B. stabilis.(n = 3)。四名患者被植入了同样的细菌b . cenocepacia应变;两个一样的B. stabilis.压力。5年后,三个b . cenocepacia——和一个B. Multivorans.-被殖民的病人已经死亡。
1999年,12例患者分离出基底细胞癌:B. Multivorans.(n = 9),B. stabilis.(n = 1)b . cenocepacia(n = 2)。三名病人被同样的细菌感染B. Multivorans.压力。与匹配的对照组相比,5年预后较差;四个不过患者死亡,对照组患者没有死亡。肺功能进化较差。
总之,比利时囊性纤维化患者的定植率是稳定和低的。伯克cenocepacia在1993年最为普遍;伯克multivorans在1999年。交叉感染率低。3名患者有短暂的定植。的影响伯克不过在比利时囊性纤维化种群中的发病率复杂,高而不限于伯克cenocepacia.
P. Vandamme感谢弗兰德斯科学研究基金的财政支持。
慢性呼吸道感染具有常规急性加剧的囊性纤维化(CF)肺病的标志。铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌CF患者最常从呼吸道分泌物中恢复1.伯克不过感染要少见得多,但它与交叉感染和迅速恶化的可能性有关,被称为cepacia综合征2- - - - - -4.不过CF中心之间的殖民频率差异很大;总体而言,患病率较低,但对患者个体生存的影响可能非常高5.此外,这种可能性不过殖民化在CF人口中引起了高度的焦虑。
最优的隔离不过CF痰液需要使用选择性培养基6.假定的非象限性显着的异质性不过菌株缺乏可靠的识别方案,使其无法正确识别不过殖民是一个复杂的问题5,6.几个不同的基因组被统称为不过复杂(Bcc)7.CF患者中最常见的BCC物种是多vorans, B. cenocepacia和B. stabilis..病情迅速恶化和患者间传播的可能性更大b . cenocepacia感染和殖民8,9.1993年的一项比利时监测研究显示,465名比利时CF患者中有12人是基底细胞癌。这些菌株属于三个不同的基因组即。B. Multivorans.,b . cenocepacia和B. stabilis.)10..
本研究的目的是批判性评估Bcc的患病率在比利时殖民CF患者在一个新的国家1年监测研究,以确定genomovar隔离的状态,评估病人的临床状态和Bcc殖民,相比与Bcc病人不是殖民。此外,对1993年监测研究中定植的CF患者的临床病程进行了评估。
方法
在比利时,自1993年以来,CF中心已经使用了选择性桅杆介质(桅杆诊断,英国)接种来自CF患者的所有痰样品和上气道样本。每3个月常规检查痰样品。喉咙拭子被患者无法产生痰。所有11位比利时卫生设施都关注CF患者同意参加目前的研究并发送所有不过于1999年2月至2000年2月期间向参比实验室运送的类分离株。首先对分离菌株进行了全细胞蛋白电泳检测,并与从CF和环境标本中分离的大量革兰氏阴性非发酵细菌数据库进行了比较11.- - - - - -15..广泛的分类学研究表明,该方法可以在种水平上对广泛的革兰氏阴性非发酵菌(通常被误鉴定为Bcc)进行鉴定,并在复杂水平上证实了推定Bcc菌株的鉴定14.,15..该方法已被证明是不够的识别所有物种在基底细胞14.,15..因此,我们用recA限制性片段长度多态性(RFLP)分析16.基因组DNA的脉冲场凝胶电泳(PFGE)限制SpeI17..采用全细胞脂肪酸分析进一步检测非基底细胞癌细菌7.索毛亚单位基因的存在18.和流行毒株标记物BCESM19.利用已建立的引物进行PCR检测。
对于通过BCC殖民殖民殖民的每种患者,从与指数患者相同的CF中心鉴定了对照患者,并匹配性别,胰腺状态和基因型(选择纯合的F508del患者,为F508del纯合子指数案例,杂合F508del /其他严重选择突变的杂合F508del /其他严重突变指数案例;与胰腺功能不全相关并报告在多伦多CF联盟数据库中的突变是严重的20..患者的呼吸定植状态也匹配,慢性铜绿假单胞菌殖民被定义为至少三个痰培养呈阳性铜绿假单胞菌在六个月的时间里21..如果有几个患者符合条件,则选择出生日期与指标患者最接近的患者。指标病例和对照组之间的平均年龄没有差异(表1)⇓).
对指数患者和对照组患者,计算体重指数(BMI),并用sd评分表示22..根据1994年美国胸廓协会标准进行最大呼气流动演习23..强迫肺活量(FVC)和强迫一秒呼气量(FEV)1据儿童和欧洲共同体为成年人煤炭和钢铁的欧洲共同体,根据正常价值的百分比表示为正常价值的百分比24..对于监测年度以外的时间段,从患者的病历中提取肺功能数据。对于每个bcc定植的患者,第一次定植的时间是根据患者的图表确定的。所有报告的患者的数据都包含在比利时CF数据库中。这些患者均签署知情同意书,同意在临床研究中对其临床数据进行匿名分析和报告。
将定植患者的中位年龄与纳入比利时CF注册表的CF患者的中位年龄进行比较。1999年比利时CF人口的年龄分布不正常,因此,为此目的,报告中值年龄并使用Mann-Whitney U - test进行分析。
自1995年以来,所有比利时中心都采取了特异性的感染控制措施,以防止患者对患者的患者传播。这些包括:强调所有患者和人员的洗手政策;所有住院患者的个别房间;在医院入院期间隔离,以及在与BCC殖民殖民地定植的患者的门诊诊所。
结果
1999年学习期间的桅杆分离
在研究期间,在选择性培养基中评估650cf患者的痰液或喉咙样。在11个参与中心中的八个中,将BCC样菌株分离并送到参考实验室。检查了来自26例不同患者的67分离物。来自六个不同中心的十二名患者用BCC真正殖民:B. Multivorans.(n = 9),B. stabilis.(n = 1)b . cenocepacia(n = 2)。的recA表2列出了各分离物的RFLP类型⇓.没有一个不过分离株携带BCESM或电缆绒毛基因。在一个病人体内b . cenocepacia,Stenotrophomonas maltophilia和无色菌xylosoxidans也被孤立。其余在MAST培养基上分离的不属于Bcc复合体的细菌鉴定为Sphingobacteriumsp。1,Chryseobacterium脑膜炎2,铜绿假单胞菌4和Pandoraea pnomenusa2.五种菌株无法识别。
脉冲场凝胶电泳分型结果
图1给出了基底细胞癌分离株分型结果的概述⇓.分型结果证实,在研究过程中,患者仍然被同一菌株定植(数据未显示)。三名患者被一种相同的菌株定植;E中心随访2例(PFGE III型),H中心随访1例(PFGE III型’)。后一分离株的PFGE DNA图谱在4个片段上与前两分离株不同。众所周知,这种有限程度的基因组变异发生在基因组多面体有机体中,如Bcc细菌25.,与不相关的分离株在更多的DNA片段上存在差异,如图1所示⇓.E中心和H中心相距50公里,3名患者声称彼此没有任何接触。在1993年的队列研究中,已经有三名患者被检测出阳性。分型结果表明,这些患者继续被同样的细菌寄生不过压力。在一名患者中,在2002期间,临时切换来自殖民化B. stabilis.到殖民化B. Multivorans.发生。目前,这个病人又感染了B. stabilis.他已经这样做了10年了。
临床患者数据
12例患者均为胰腺功能不全。9例患者为纯合子F508del, 3例患者为杂合子F508del和另一个已知与严重表型相关的突变。三个病人没有被铜绿假单胞菌或其他非发酵的革兰氏阴性菌(表1)⇑).在1例7岁的患者中,由b . cenocepacia在研究期间是短暂的。然而,该患者在2001年再次呈阳性。
bcc定菌者的中位年龄(四分位范围)为19.5岁(14.4-24.5),而1999年比利时CF队列的中位年龄为15.6岁(6.5-21.5)(p<0.05, Mann-Whitney U - test;C. Sevens,布鲁塞尔自由大学,布鲁塞尔,个人通讯)。
1999年bcc定植患者和对照组的临床状况在肺功能方面存在差异,但在体重和BMI方面没有差异(表1)⇑).FVC和FEV1(平均±sem) FVC 57±6%与80±8%,未配对t‐检验,p<0.01;FEV141±7%与64±8%,未配对t -检验,p<0.05)。
在特殊监督期结束时(即。2000年2月),指示病例中Bcc的平均殖民持续时间为3.8年(范围为0.5-7.25年)。因此,在定植的患者和对照组患者中,评估了Bcc定植开始以来的5年进化。Bcc患者的进化是不利的(p<0.01,卡方检验)。对照组的病人没有死亡。四个不过被殖民的病人死亡:三个被殖民的B. Multivorans.;一个人b . cenocepacia.后者死于不过肺移植后2个月出现败血症。在第一次隔离的时候不过,与对照组相比,指数患者肺功能值较低,但差异无统计学意义:FVC 65±7%与76±6%,未配对t‐检验,p=0.27;FEV150±7%与62±8%,未配对t‐检验,p=0.15)。然而,bcc定植患者的肺功能从定植前1年到定植后5年的演变明显比匹配的对照组差(p<0.01,重复测量方差分析)(表3)⇑).
1993年队列中患者的临床演变
1993年,465名比利时CF患者中有12人被检测出为基底细胞癌。6个参与中心中的3个对这些患者进行了跟踪。6名病人被植入了b . cenocepacia,三个B. Multivorans.和三个B. stabilis..11例患者均能收集到全部临床随访资料。在这11例患者中有3例记录了短暂的定植。在所有的患者中,超过10个痰样本在MAST培养基上生长,试图分离基底细胞癌。5名患者已经死亡;4例发生基底细胞癌后5年内。
六个病人中有四个感染了b . cenocepacia已经死亡。根据PFGE的记录,其中3名患者携带相同的(因此称为“流行病”)毒株。其中,2例患者在长时间殖民后死亡(7岁和11岁)。1例Bcc培养阴性后2年死亡。未携带流行毒株的患者在肺移植后2年死亡,仍为阳性b . cenocepacia后移植。两个b . cenocepacia-被殖民的病人仍然活着;一种不再是阳性文化,在被流行病毒株殖民化5年后。
三名患者殖民殖民B. Multivorans.被殖民了很长一段时间。其中一株在1998年3月被移植,暂时被清除,但在2001年又出现了一种独特的菌株。两名患者仍然呈阳性,也被纳入1999年的队列;其中一人于1999年12月去世,另一人于2001年8月接受了肺移植手术。
没有一个病人的资料B. stabilis..另外两名患者也被植入了相同的菌株,并在同一中心接受了随访。一名年轻的成年男性也被包括在1999年的群体中,并继续被殖民化B. stabilis.隔离。这位病人患有中度肺病。一个青春期的男性对B. stabilis.在1997年进行的右上叶术前3年,以来一直持续消极。
因此,在三个病人中,即使在选择培养基上的几个痰培养年复一年地检查时,也记录了短暂的定植。
讨论
1999年,650名比利时CF患者中只有12人被Bcc定位。流行的基因组是B. Multivorans.;只有两个病人被b . cenocepacia.Bcc定殖开始后的5年进化较差:12例指示病例中有4例死亡,但没有匹配的对照组死亡。此外,指标病例的肺功能演变明显比对照组差。1993年12例比利时CF患者中有11例移植了基底细胞癌,结果可以评估:3例患者短暂移植,5例患者死亡,其中4例在获得基底细胞癌后5年内死亡。
比利时CF患者的基底细胞定植率很低,并且仍然很低。1993年,465例筛查患者中有12例为基底细胞癌阳性。在第二项国家监测研究中,650例患者中有12例为基底细胞癌阳性。对于第二项研究,所有中心都能够合作,该研究包括比利时已知的所有CF患者(1999年比利时CF注册表包含605名患者的数据(C. Sevens,个人沟通))。这表明从1993年到2000年,比利时CF患者的基底细胞定植没有增加。
在比利时CF社区,盛行不过Genomovar随着时间的推移而变化。在1993年的队列中,12名患者中有六个殖民b . cenocepacia;最常与流行病传播和迅速恶化联系在一起的物种8,9.在1999年的队列研究中,大多数患者(12例中有9例)被殖民B. Multivorans.;只有两名病人感染了b . cenocepacia.这与美国和加拿大不同,美国和加拿大的大多数分离株属于这两个国家b . cenocepacia9,26.,27..在陈的研究中et al。27., CF患者60株Bcc中有59株为b . cenocepacia,这59个分离株中有57个是同一个克隆。在比利时,在两个评估期之间,对bcc患者采取了严格的隔离措施。到目前为止,这些措施似乎是成功的。
目前流行的基底细胞癌基因组在少数国家报道过。比利时的数据与意大利和英国的数据有所不同。这些国家没有全国性的调查报告,但对CF患者的大量Bcc分离株进行了研究。由单一感染引起的感染率高b . cenocepacia西西里的两个CF中心报道了具有电缆A基因和与美国-英国克隆“ET12”密切相关的流行病克隆28..最近一项对来自40家英国医院的117名分离患者的研究报告说b . cenocepacia是最流行的,大多数分离物属于流行病克隆29..然而,在意大利和英国,其他BCC物种与CF患者分离。似乎在没有一个特定菌株的流行病的情况下,BCC感染的发病率低(例如在比利时),基因组维拉的分布更加多样。
病人之间转移的可能性不过CF社区的情况一直令人担忧。1993年队列的AP - PCR和PFGE DNA指纹分析结果表明,4名比利时患者患有b . cenocepacia被同一种菌株所殖民这些病人都去了同一家诊所10..两名患者B. stabilis.殖民,去不同的诊所,共享相同的菌株。
在1999年的队列中,三名患有B. Multivorans.有相同的菌株。在英国,大多数报告都强调疫情的重要性b . cenocepacia应变;然而,B. Multivorans.是否发现了第二流行率和若干交叉感染群集29..此外,在意大利,除了基因组外,还观察到了患者对患者的传播b . cenocepacia28..共享同一菌株的患者数量减少的事实表明,比利时患者目前交叉感染的可能性小于从环境源获得的可能性。Bcc正在农业中用于植物病害控制30.来自所有基因组的菌株已经从环境中分离出来31.
基底细胞癌定植的患者可在较长时间内保持定植。从1993年到1999年,有三名患者被同一菌株感染。然而,暂时的殖民似乎确实发生了。在本文所描述的21例患者中,有3例患者有记录。因为在这些病人身上生长了一些痰样本不过选择性培养基,不太可能遗漏病原体。然而,在一些患者中,基底细胞癌数年未被分离出来,然后他们的第一个菌株在10年后再次出现。在其中一些患者中,不能排除发生了从环境中重新获得的情况。来自英国的报道32和加拿大33此外,此外还提到了瞬态BCC感染,但尚未报道群组评估该事件的频率的核心。
与最初的报告不同2,3.提示,基底细胞癌的获得并不局限于患有铜绿假单胞菌也不是严重肺部疾病的患者。在比利时的研究中,一些病人没有被感染铜绿假单胞菌早于公元前殖民时期。在基底细胞癌定植开始时,基底细胞癌阳性患者与对照组之间肺功能异常无显著差异。然而,在定植开始后的5年,死亡率更高,肺功能恶化更快。
在比利时的这项研究中,bcc定植患者的死亡率很高;在1993年的队列研究中,6名患者中有4人感染了b . cenocepacia已经死亡。剩下的6名患者中已有1人死亡;该患者被纳入1999年的队列。1999年队列中的其他4名患者也死亡,而对照组的患者没有死亡。只有移植的病人死于典型的发热细菌性“洋葱综合征”。Bcc的殖民化对疾病严重程度和死亡率的巨大影响已经被报道过2,3.,32并被本研究证实。这项在低基底细胞癌发病率国家的研究清楚地证实了基底细胞癌问题不仅限于b . cenocepacia.
总之,在比利时囊性纤维化人群中,伯克不过复杂殖民率低且稳定。伯克multivorans和伯克cenocepacia殖民是最常见的。虽然大多数患者的定植时间较长,但有些患者似乎出现短暂定植。的影响伯克不过在囊性纤维化人群中发病率和死亡率较高且不限于伯克cenocepacia隔离。在比利时囊性纤维化患者中,大多数患者携带不同的菌株,交叉感染率低。
致谢
比利时伯克不过学习小组:L. Van Schil, J-P。乌尔西(安特卫彭的圣文森修斯);K. Desager, G. Ieven(安特卫彭大学,安特卫彭);A. Mertens (Algemeen Ziekenhuis Middelheim,安特卫彭);A. Malfroot, I. Dab, S. Lauwers (Academisch Ziekenhuis,自由大学布鲁塞尔,布鲁塞尔);P. Lebecque, J. Gigi (Université鲁汶天主教,布鲁塞尔);C. Knoop, M. Struelens (Hôpital Erasme,布鲁塞尔);H. Franckx (Zeepreventorium, De Haan);F. De Baets, S. Vandaele, G. Verschraegen (u.z Gent, Gent);P. Vandamme, S. lavens(根特大学,根特); K. De Boeck, M. Proesmans, J. Van Eldere (Universitair Ziekenhuis Gasthuisberg, Leuven); F. Lebrun, F. Pauquay (Clinique de l'Espérance, Montegnée); E. Bodart, Y. Glupczynski (Clinique Universitaire de Mont-Godinne, Mont-Godinne); C. Sevens from the Belgian cystic fibrosis registry (Vrije Universiteit Brussels, Brussels).
- 收到了2003年10月23日。
- 接受2004年2月4日。
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