文摘gydF4y2Ba
巨噬细胞、中性粒细胞和感染已经与闭塞性细支气管炎综合征的起源(BOS)后肺移植。sCD14 shed-cell表面蛋白是一种可溶性的。它能促进细胞因子诱导的炎症和稳定在临床肺移植受者(LTR)可能是重要的早期标志BOS。gydF4y2Ba
Bronchalveolar灌洗(BAL)和血液样本取自26 LTR稳定,达到或接近他们的最佳的一秒钟用力呼气量不受感染。sCD14水平测量gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba酶联免疫吸附试验。细胞计数进行过滤落下帷幕。gydF4y2Ba
LTR中性粒细胞计数,BAL sCD14和血清sCD14水平高于控制(中值3.8%gydF4y2Ba与gydF4y2Ba1.3%,p < 0.05;11.5 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与gydF4y2Ba6 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(p < 0.001);6.2µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba与gydF4y2Ba2.4µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别为,p < 0.05)。BAL白蛋白和sCD14相关(回归系数:0.77,p < 0.001)。gydF4y2Ba
存活率存在,横断面研究,作者描述了第一次的支气管肺泡灌洗和血清可溶性CD14水平稳定的肺移植受者,并表明这些是升高而控制。这是一个可行的候选标记系统,可以进行测试的预测作用,肺移植后闭塞性细支气管炎综合征。这种细胞蛋白质的起源及其时序关系闭塞性细支气管炎综合征的发展还有待阐明在更明确的纵向研究,其中应该包括其他的测量可能相关的先天免疫系统,如支气管肺泡灌洗内毒素水平。gydF4y2Ba
本研究在阿尔弗雷德医院基金会的支持下,整个阿尔弗雷德时间医学专家,澳大利亚国家健康与医学研究理事会和诺华的补助金。gydF4y2Ba
慢性排斥反应,在形式的闭塞性细支气管炎综合征(BOS),仍然是肺移植后长期生存的主要障碍gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。订单的患病率估计有50%的3年移植后,与一个3年BOS发病后50%的死亡率gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。许多风险因素BOS已定义的发展,包括早期再灌注损伤、急性同种异体移植物排斥反应和病毒感染gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。这些因素是如何诱发肺移植受者的不可逆变化的航空公司(LTR)尚不清楚。有人建议,最初的侮辱刺激增加上皮细胞和树突细胞主要histocompatability复杂的表达式,可以增强演讲的供体抗原和随后激活的淋巴细胞gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。反过来,这将导致招募巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞诱导纤维化gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba纤维发生的细胞因子和生长因子,如肿瘤坏死因子(TNF)的α和转化生长因子gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。目前,没有标记已被证明预测可靠BOS的发展。gydF4y2Ba
似乎可能甚至明显稳定,健康的LTR有一定程度的背景气道炎症和BOS发展的可能。在之前出版,作者证明了支气管活检在稳定,临床未感染LTR增加CD8和人类白细胞抗原(HLA) D量相关的阳性细胞与正常对照组相比gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。与此一致的是观察,里佐gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba10gydF4y2Ba指出支气管肺泡灌洗(BAL) HLA类还是我在稳定的LTR中抗原含量升高而正常的人口。那些感染、高水平和更高的急性排斥反应。罗斯gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba还指出,孤立transbronchial活检的证据支气管炎、细支气管炎与长期耐高温气流阻塞,即使在气道炎症的感染病因学是涉及。早期病理变化的相关性研究clinically-well LTR值得强调的,因为这似乎是一个逻辑的干预,如果这种变化可能早在BOS发作。gydF4y2Ba
CD14是一个表面蛋白发现巨噬细胞和中性粒细胞激活和作为细胞受体对脂多糖(LPS),这是一种革兰氏阴性细菌的外膜的主要组成部分gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。CD14还可以间接触发释放白介素1,高6 8和肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba13gydF4y2Ba。CD14-dependant炎症机制已被证明在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,结节病gydF4y2Ba15gydF4y2Ba和哮喘gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。可溶性CD14的形式(sCD14)是由膜相关表单的蛋白水解脱落(mCD14)细胞激活和能被探测到的比例在落下帷幕gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。在它自己的权利,sCD14似乎与有限合伙人,进一步放大细胞反应gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。目前还不清楚如果BAL sCD14源自本地或代表从外周血泄漏。肺移植的设置,即使在临床稳定LTR,气道炎症通常发生由于同种异体免疫系统激活和同时代的感染或微生物殖民。球和血清的研究CD14表达细胞表面标志因此有关。gydF4y2Ba
球白蛋白水平被用来作为替代alveolar-capillary膜功能障碍的标志。在间质性肺病患者放射性同位素的研究,作者认为BAL白蛋白水平相关的肺部炎症的影响,而不是从血清急性通量gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。类似的逻辑可能适用于当你的研究。gydF4y2Ba
没有描述sCD14系统在稳定的LTR。作者,因此,测试的假设sCD14高架在球和外周血临床稳定的LTR,摆脱同种异体移植物排斥反应或感染的证据,而增加BAL sCD14与肺间水平上升,而不是代表微血管渗漏和血液代用品的水平。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
这项研究是由阿尔弗雷德医院伦理审查委员会批准,和病人给他们的知情同意。BAL和外周血样本取自26稳定,不吸烟的LTR在常规随访,58 - 1301天移植后(平均195天)。患者被排除在外,如果他们有并发肺部感染的临床或支气管镜的证据或急性或慢性肺排斥。特别是,临床或支气管镜的支气管炎患者被排除在外,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba那些有咳嗽、痰或过度或化脓性支气管镜的分泌物。当时的研究都在一秒用力呼气量(FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba)测量,或接近,他们最大的移植后值(100%,中值范围:84 - 100%)。临床细节展示在表1所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
19无症状控制不吸烟的志愿者招募。这组的平均年龄25岁(范围:18-38岁)。他们nonasthmatic,负醋甲胆碱的挑战。肺供体的选择和采购按照指南描述了其他地方gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。没有器官来自捐赠者与已知的呼吸道疾病或气流阻塞的证据。gydF4y2Ba
免疫抑制gydF4y2Ba
所有患者手术后立即开始标准三联疗法。维持治疗包括环孢霉素(200 - 350年实现血液水平µg·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(enzyme-multiplied免疫测定技术(排放)测定、家长药物;美国CA Syva)、咪唑硫嘌呤(1.0 - -2.0毫克公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba·天gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)和强的松(0.15 - -0.25毫克公斤gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba·天gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
肺功能测试gydF4y2Ba
肺功能测试之前进行支气管镜检查。肺量测定法进行例行gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba一个Masterscreen肺活量计(Jaeger、维尔茨堡、德国)每周6个月移植后,每月超过这个时间。研究FEVgydF4y2Ba1gydF4y2Ba之前与接受者的移植后最好的价值。gydF4y2Ba
Fibreoptic支气管镜检查gydF4y2Ba
Fibreoptic支气管镜检查了下静脉镇静与midazalam(罗氏公司、法国)。气道,曝露了局部1.5%利多卡因和3×60毫升BAL的中部叶或海豆芽楔入后进行支气管镜在一个合适的亚节。液体立即被吸进一个玻璃容器的负压−10.64 kPa(−80毫米汞柱),运到实验室4°C。其次是transbronchial活检(TBB)的远端组织。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗细胞处理gydF4y2Ba
细胞计数进行过滤BAL流体使用修改后的纽鲍尔血球计(英国米德尔塞克斯韦伯科学)。复制cytocentrifuge准备工作就绪使用200µL落下帷幕吸入过滤(Shandon Cytospin三世;Shandon道,英国柴郡)82×gydF4y2BaggydF4y2Ba在10分钟),沾Diff-Quick(美国科学制品有限公司,McGaw公园)。细胞数量由500个细胞计数·幻灯片gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba获得一个意思,报告为百分比。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗可溶性CD14和白蛋白水平gydF4y2Ba
BAL sCD14和白蛋白水平是衡量unconcentrated BAL的上层清液。商用sCD14测量,夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(免疫生物实验室,德国汉堡)。白蛋白测定gydF4y2Ba通过gydF4y2Baimmunonephelometry(美国富勒顿贝克曼仪器)。看过intra-assay变异系数(的简历了。)sCD14测定为6%,8%的intra-assay的简历。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗微生物评估gydF4y2Ba
BAL微生物评估进行上层清液的一部分。细菌的标准显微镜和文化(包括分枝杆菌),真菌和呼吸道病毒进行LTR。Shell-vial文化,由immunofluoresence cytomegalovirus-infected细胞的检测,也经常执行。gydF4y2Ba
Transbronchial活组织检查gydF4y2Ba
在每个LTR,五至七TBB被使用鳄鱼钳。用苏木精和伊红染色组织,一个有经验的histopathologist报道急性或慢性排斥的存在根据标准标准gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
静脉穿刺和血液采样gydF4y2Ba
静脉穿刺和血液采样前立即进行支气管镜检查。环孢霉素检测血清水平测量使用以前提到排放试验。子群的12 LTR控制和10,sCD14测定血清中使用ELISA和血清中白蛋白测定使用溴甲酚紫方法(草毒死实验室,表现杰出,英国)。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
变量并不是正态分布,并利用非参数相比,双尾Mann-Whitney U量测试和中位数和范围是引用。斯皮尔曼相关系数(r)获得的排名方法。p值< 0.05被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
临床研究人群的细节时的支气管镜检查如表1所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba。环孢霉素血清中值水平为271µg·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(范围:134 - 820年µg·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),平均剂量强的松15毫克每日-20毫克(7.5),和用药剂量中值为50毫克每日(0 - 125毫克)。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗gydF4y2Ba
球返回在LTR组比对照组显著减少(平均89毫升(范围:40 - 112 n = 26)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba120毫升(80 - 145年,n = 9), p < 0.01;表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。LTR组中性粒细胞计数明显升高(3.8% (0.4 - -39.8,n = 26)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba1.3% (1.1 - -5.3,n = 9);p < 0.05)。gydF4y2Ba
sCD14 LTR组升高(11.5 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(5.3 - -100.0 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,n = 25)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba6.0 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(1.0 - -8.0 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ban = 9), p < 0.001;图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。白蛋白增加LTR组(39µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(15 - 324µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba26µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(20-55µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba);p < 0.05)。有显著相关性BAL sCD14和白蛋白水平,r = 0.77, p < 0.001 n = 24日(图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。BAL sCD14没有明显落下帷幕,与巨噬细胞或淋巴细胞中性粒细胞百分比。gydF4y2Ba
微生物检验证明一个真菌,11个细菌和八个病毒16人(表1gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba),尽管所有被认为是临床和微生物共生的;肺炎或支气管炎不在,没有病人临床感染或拒绝的历史。巨细胞病毒细胞病变效应并不是出现在BAL TBB组织学或细胞学分析。在这个LTR队列,sCD14结果没有显著的不同分析时根据存在的细菌或病毒cultureable BAL(表3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
血清gydF4y2Ba
sCD14稳定LTR组升高(6.2µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(1.4 - -10.0µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,n = 12)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba2.4µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(0 - 3.4µg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ban = 10), p < 0.05;图3gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),但没有显著相关性血清和BAL sCD14水平。gydF4y2Ba
LTR组之间没有显著相关性sCD14也落下帷幕或血清白蛋白水平和移植后的时间和免疫抑制治疗的水平。尽管没有病人急性或慢性同种异体移植物排斥反应,之间没有显著相关性sCD14或白蛋白水平和剩余“a”或“b”国际社会对心脏和肺移植排斥评分(数据没有显示)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
存活率存在,横断面研究,作者描述了第一次落下帷幕的sCD14水平和血清LTR。BAL和血清sCD14升高,即使在临床稳定LTR,无明显临床感染的证据,与正常对照组相比。BAL白蛋白水平也提出了与sCD14水平显著相关。血清水平的sCD14没有直接与BAL的水平,表明sCD14肺水平高,而不是代孕的标志血液水平以下简单的微血管渗漏,在落下帷幕。BAL sCD14不与任何特定的细胞群中落下帷幕,也没有落下帷幕的微生物的存在。sCD14的起源及其时序关系的发展BOS仍有待阐明在更明确的纵向研究,还应该包括其他的测量可能与先天免疫系统,如BAL内毒素水平。gydF4y2Ba
积累的sCD14气道可能来自两个来源:当地由支气管肺泡和间质巨噬细胞分泌或从血管内舱外渗;这些并不是相互排斥的。支持当地生产实验显示upregulation CD14表达在肺部疾病的特点是慢性肺泡巨噬细胞活化gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。使用放射性同位素通量间质性肺疾病的研究,作者认为BAL白蛋白水平升高与炎症有关,而非急性渗透率变化由于球过程本身gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。支持外渗是杜宾的工作gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba显然,他们的研究表明,最大的sCD14释放,从antigen-challenged BAL巨噬细胞只占2% sCD14落下帷幕。支持这一观点,值得注意的是,血单核细胞CD14的有力生产商gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。从本研究的结果,这表明BAL和血液sCD14没有关系,支持假设BAL sCD14将增加,至少在某种程度上,对当地生产。gydF4y2Ba
考虑到细菌内毒素之间有密切的关系,有限合伙人和CD14,微生物在航空运输LTR权证考虑作为一个潜在的BAL sCD14水平升高的原因。这有治疗意义,因为单克隆抗体CD14已被证明对endotoxin-induced冲击保护灵长类动物模型gydF4y2Ba23gydF4y2Ba。在这种灵长类动物实验中,注入anti-CD14抗体减少血浆细胞因子和BAL蛋白质含量在面对一个内毒素挑战。虽然在本研究作者们选择了临床,诊断“未感染病人进入标准标准,小心微生物评估并展示生物落下帷幕的样本。负BAL革兰染色证实这些患者携带只有低负载的生物。缺乏相关性BAL有机体的存在和其他BAL的结果(表3gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)可能是一个真正的发现,尽管在未来的研究中,定量文化和直接有限合伙人和LPS-binding蛋白质测量应该进一步探讨这种关系。本研究的缺点,这些数据无法获得与sCD14水平同时由于缺乏足够的生物材料。gydF4y2Ba
很可能是亚临床,持续感染的航空公司不是无害的,但是是一个辅助因子添加到气道细胞激活和长期损害。在流仪最近的一项研究中,作者表明,大量肺泡巨噬细胞表面标记,与先天免疫对细菌,真菌和病毒,抑制在两个稳定LTR和BOS,对比增加自然杀伤和CD8淋巴细胞激活gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。认为,目前sCD14工作和近期的流式细胞仪数据gydF4y2Ba24gydF4y2Ba支持紧急假设,即使在临床稳定肺移植接受者存在复杂的淋巴细胞和巨噬细胞的变化,这可能源于clinically-silent感染,部分抑制排斥反应,或两者兼而有之。gydF4y2Ba
使用一个类似的ELISA测量系统在当前的研究中,马丁gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba14gydF4y2Ba发现,sCD14高架BAL和ARDS患者的血清,细菌性肺炎和弥漫性间质性肺疾病。虽然测量水平球和血液隔间都与目前的研究中,似乎奇怪,稳定和健康LTR极为相似的价值观在这些广泛的肺部疾病,包括ARDS。然而,StrizgydF4y2Baet al。gydF4y2Ba15gydF4y2Ba展示了类似BAL sCD14水平不活跃的结节病和间质性肺疾病相比LTR组在目前的研究。他们表现出更高的值组与结节病临床活跃。杜宾gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba研究了BAL sCD14哮喘和对照组。一般水平略低于目前的LTR研究和他们的两组之间无统计学差异。总的来说,sCD14 BAL水平是值得注意的是所有这些不同研究之间的可比性,包括当前的工作,考虑到一定的多样性将不可避免的由于BAL返回的可变性,dilutional因素和分析系统。gydF4y2Ba
在最近的研究中,BAL回报高于对照组,有可能是相对的,上皮衬里液体,溶质浓度导致了更高水平的BAL sCD14和白蛋白LTR组。BAL sCD14没有与BAL然而回报水平,和作者觉得BAL返回的结果不抱愧蒙羞。最新推荐指南引用BAL溶质浓度是一个·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba返回,因为稀释的程度基本上是不可能精确地定义gydF4y2Ba25gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
在ARDS,马丁gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba14gydF4y2Ba发现sCD14之间很强的相关性水平,中性粒细胞和总蛋白浓度在落下帷幕。LPS-induced嗜中性粒细胞的表达变化mCD14已被证明是一个重要的风险因素在ARDS的发展gydF4y2Ba26gydF4y2Ba。在一只兔子模型中,注入有限合伙人和补充,导致增加中性粒细胞积聚在肺部和增加白蛋白漏到肺泡空间gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。有趣的是,目前的研究显示趋势BAL中性粒细胞和sCD14水平之间的相关性,虽然这没有意义。表3患者亚组之间的相似性gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba表明,气道殖民与生物并不能完全解释的结果sCD14水平的增加。gydF4y2Ba
BAL嗜中性与BOS的发展gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,虽然嗜中性粒细胞不一定是细胞负责影响气道损伤。其他作者认为血清sCD14水平败血症的病人gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,BAL sCD14水平肺结核gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba和结节病gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,反映了单核细胞/巨噬细胞激活。作者发现以前巨噬细胞和淋巴细胞数量的增加在稳定的LTR支气管活检gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。在当前的研究中,作者没有发现血清之间的关系或BAL sCD14 BAL巨噬细胞的百分比,但巨噬细胞来源不能被解雇,因为它可能是这些细胞的活动而不是他们相关的实际数量。gydF4y2Ba
总之,众所周知,甚至稳定肺移植受者气道单核细胞炎症尽管三重免疫抑制gydF4y2Ba9gydF4y2Ba而嗜中性与闭塞性细支气管炎综合征的发展变得突出gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。虽然这项研究并不是为了探究可能的闭塞性细支气管炎综合征和可溶性CD14水平之间的关系,有可能是CD14是早期和积极参与这一过程。气道炎症的临床稳定的肺移植受者可能继续闭塞性细支气管炎综合征,但引发不可逆的气道的结构改造和疤痕了解甚少,因此,研究稳定的肺移植受者是一个逻辑的第一步,这样的项目的研究。气道脂多糖的作用,与细菌殖民化或污染和表演gydF4y2Ba通过gydF4y2BaCD14,仍被排除在外。这里给出的结果,尽管第一个描述可溶性CD14在肺移植,本质上是有限的横断面研究的性质。但是,它们表明,一个简单的血液和支气管肺泡灌洗可溶性CD14可能代表一个合乎逻辑的候选人评估肺移植受者的标志,在未来的工作中,旨在预测这些闭塞性细支气管炎综合征的风险。更明确,纵向研究正在进行中,以跟踪可溶性CD14水平及其与闭塞性细支气管炎综合征的关系发展潜力。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者要感谢b Orsida技术援助的支气管肺泡灌洗样品接收。c·沃德是一个人研究员。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2001年3月15日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2001年10月10日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba