肺单个核细胞对抗原的反应gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba活动性结核病患者的健康家庭接触者和社区健康对照者gydF4y2Ba^{1gydF4y2Ba2gydF4y2Ba}

有大量的临床和流行病学证据支持存在对艾滋病的保护性免疫gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba在人类身上。大约90-95%gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba被感染的人成功控制了他们的主病毒gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba感染，永远不会发展成肺结核。事实上，结核病的发病率只有5% - 10%gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba来华的个人。gydF4y2Ba

主动免疫监测是维持静止潜伏期的必要条件gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba病灶和CD4gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞对细胞介导的抗结核免疫至关重要(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)，可能是因为它们是保护性细胞因子IFN-γ (gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)．IFN-γ反应在分枝杆菌感染中的重要性被观察到，遗传性IFN-γ受体1缺乏症的儿童在接种疫苗后容易感染无处不在的分枝杆菌或传播Calmette-Guérin杆菌(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)．此外，IFN-γ已成功用于难治性非结核分枝杆菌感染患者的辅助治疗(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)，并在耐多药肺结核患者身上显示出有希望的结果(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

然而，在肺结核患者中，gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Baag特异性IFN-γ产生细胞(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)和自发产生IFN-γ (gydF4y2Ba11gydF4y2Ba)被分隔到感染部位(肺)，尽管疾病仍在持续。结核病患者代表的对象是在光谱的一端gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba感染，即失去免疫控制的个体，重新激活其感染焦点，并发展为疾病。因此，大多数结核患者可能不允许保护性免疫手术的研究gydF4y2Ba结核分枝杆菌-gydF4y2Ba被感染的人。gydF4y2Ba

活动性肺结核患者的健康家庭接触者gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba被反复暴露在gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Baaerogenically。在高强度和长时间接触的情况下，被发现感染的接触者的比例gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba诊断时痰涂片结核指数阳性的病例高达30-40% (gydF4y2Ba12gydF4y2Ba）;然而，如果长期接触未经治疗的结核病患者，感染率甚至会更高(高达80%)(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)．免疫学研究gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba-反应性HHC因此可能允许阐明保护免疫gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba．因为肺是感染的主要入口gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba在本研究中，结核菌素皮肤试验阳性HHC对人类的肺免疫反应gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2BaAgs与来自社区(CC)的结核菌素皮肤试验阳性健康对照个体的自体全身(血液)免疫反应以及肺和全身免疫反应进行比较。我们发现IFN-γ-产生细胞对Ag 85复合物(Ag 85co)具有特异性，这被认为是一种保护性的AggydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba这些细胞在HHC的支气管肺泡细胞(BAC)中明显多于CC的支气管肺泡细胞。gydF4y2Ba

1996年至1999年期间，墨西哥国立呼吸疾病研究所(墨西哥城，墨西哥)筛选自愿接受支气管肺泡灌洗、静脉穿刺和HIV-1血清学检查的HHC和CC受试者参与这项研究。国家呼吸疾病研究所和克利夫兰大学医院的机构审查委员会批准对同意的健康个体进行支气管肺泡灌洗、静脉穿刺和HIV-1血清学。gydF4y2Ba

HHC的招募选择了痰涂片阳性(3级)、接受抗分枝杆菌化疗时间不超过1周的活动性肺结核患者的家庭。这是在脱落的假设下完成的gydF4y2BaM。gydF4y2Ba肺结核gydF4y2Ba进入室内空气，从而暴露在HHCgydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba的比率，在这些家庭中会比在涂片阳性程度较低的结核病患者的家庭中更高(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)．所有愿意并符合以下资格要求的家庭HHC被纳入:1)与结核病患者生活≥3个月，2)明显的临床健康，3)正常的胸片，4)结核菌素皮肤试验，在注射5个结核菌素单位(TU)的净化蛋白衍生物后48-72小时，硬化大小> 10mmgydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba(PPD)，年龄18-65岁，HIV-1血清阴性。gydF4y2Ba

CC是从国家呼吸疾病研究所的工作人员及其亲属中招募的;没有人参与过任何卫生保健或已知与活动性结核病患者有过接触。CC组的合格要求是:1)明显的临床健康，2)正常的胸片，3)结核菌素皮肤试验硬化大小>10 mm在48-72小时后，通过Mantoux技术注射5 TU PPD, 4)年龄18-65岁，5)HIV-1血清阴性。gydF4y2Ba

HHC和CC的排除标准为1)血血红蛋白浓度<10 g/dl, 2)任何慢性全身性(糖尿病、癌症)或肺部(哮喘)疾病，3)研究前1个月内上呼吸道感染，4)免疫抑制药物或免疫抑制疾病。gydF4y2Ba

在获得符合条件的HHC和CC的书面知情同意后，在每个实验当天上午进行支气管肺泡灌洗(BAL)和静脉穿刺。gydF4y2Ba

如前所述，使用Olympus柔性纤维支气管镜进行BAL (gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)．简单地说，在用2-4%利多卡因局部麻醉上呼吸道后，将150 ml无菌等渗生理盐水注入右中叶的两个节段。BAL液以300 ×离心gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C下放置15分钟。计数BAC，在完全培养基(RPMI 1640 (BioWhittaker, Walkersville, MD)中，加入50 μg/ml硫酸庆大霉素，200 mMgydF4y2BalgydF4y2Ba-谷氨酰胺和10%热灭活池人血清)。gydF4y2Ba

从每个研究对象获得40 - 60毫升全肝素化静脉血。通过Ficoll-Paque梯度离心血液制备PBMC (gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)，并在完全介质中进行计数和重悬。gydF4y2Ba

PPD被收购(Statens Seruminstitut，哥本哈根，丹麦)。甘露糖盖脂阿拉伯甘露聚糖;纯化的gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba菌株H37Rv培养滤液;内毒素污染，3.46 ng/mg manLAM，用gydF4y2Ba鲎gydF4y2Ba从H37Rv及其三个密切相关的成分Ag 85A、Ag 85B和Ag 85C的培养滤液中纯化的Ag 85co (gydF4y2Ba17gydF4y2Ba)，由John T. Belisle博士(科罗拉多州立大学微生物学系，Fort Collins, CO)提供。ag85co是一种代谢活性的主要分泌蛋白gydF4y2Ba结核分枝杆菌,gydF4y2Ba是纤维连接蛋白结合(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba)，在分枝杆菌细胞壁组装的最后阶段发挥mycolyltransferase的作用(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)．短期培养滤液中分泌的蛋白质gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba， ESAT-6(内毒素污染，<0.05 ng/μg蛋白)(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba)，短期培养滤液(ST-CF;内毒素污染<0.05 ng/μg蛋白)(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba)是额外的gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba本研究中使用的Ags。银的一种非分枝杆菌的银gydF4y2Ba白色念珠菌gydF4y2Ba（gydF4y2Ba假丝酵母gydF4y2Ba；格里尔实验室，勒努瓦，NC)用于评估反应的特异性。所有Ags的使用浓度均可产生峰值刺激，如之前的研究所确定的(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)．测定了Ag 85A, Ag 85B, Ag 85C, ESAT-6和ST-CF的剂量反应，以获得最佳的DNA合成诱导，以及IFN-γ和IL-10酶联免疫斑点(ELISPOT)测定的性能。gydF4y2Ba

将PBMC和BAC以5 × 10添加到圆底96孔板(Nunc, Copenhagen, Denmark)gydF4y2Ba^4gydF4y2Ba细胞/。细胞被分枝杆菌和非分枝杆菌Ags和丝裂原PHA刺激(Sigma, St. Louis, MO)。完全培养基作为阴性对照刺激。1 μCi/孔脉冲培养[gydF4y2Ba^3.gydF4y2BaH]胸苷(Amersham, Aylesbury，英国;sp.行动。，5Ci/mmol) on day 4, and cells were harvested 24 h later. Incorporation of [^3.gydF4y2BaH]胸苷用闪烁计数器测定，以每分钟计数表示。gydF4y2Ba

用分枝杆菌和非分枝杆菌Ags刺激PBMC和BAC短期培养24小时上清液，使用市售ELISA试剂盒评估IFN-γ (Endogen, Woburn, MA)和TNF-α (R&D Systems, Minneapolis, MN)的含量。gydF4y2Ba

由于细胞培养上清液中的细胞因子水平反映细胞的产生、降解和消耗，因此进行ELISPOT分析以确定产生细胞因子的细胞频率，并评估单细胞基础上的细胞因子产生。ELISPOT分析的灵敏度是ELISA的10至200倍(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba)．如前所述，用ELISPOT法测定PBMC和BAC中细胞因子产生细胞的频率(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba)．简单地说，T斑点96孔检测板(Whatman, Clifton, NJgydF4y2Ba）gydF4y2Ba在4℃下用抗IFN-γ (Endogen)或IL-10 (PharMingen, San Diego, CA)的原代抗体以2-10 μg/ml的浓度涂敷过夜。广泛清洗盘子并用1-2% BSA (Sigma)堵塞。然后将PBMC和BAC以10的浓度加入ab涂层孔中gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba用分枝杆菌(PPD, manLAM, Ag 85co, Ag 85A, Ag 85B, Ag 85C, ESAT-6和ST-CF)和非分枝杆菌(gydF4y2Ba假丝酵母gydF4y2Ba) Ags和PHA。完全培养基作为阴性对照刺激。培养物在37°C下孵育，24小时(IFN-γ)和72小时(IL-10)后，用PBS冲洗孔3次，将细胞移除。然后将生物素化的IFN-γ次级抗体(Endogen, Woburn, MA)和IL-10 (PharMingen)加入孔中，在4°C下孵育过夜。过氧化物酶偶联链霉亲和素(Dako, Glostrup，丹麦;加入1/2000)，用1% 3-氨基-9-乙基咔唑(Pierce, Rockford, IL)观察斑点。gydF4y2Ba

每个孔中IFN-γ-和il -10产生细胞的频率使用计算机化系列1免疫斑点图像分析仪(细胞技术，克利夫兰，OH)测定。然后计算两个或三个孔中细胞因子斑点的平均数量。gydF4y2Ba

HHC组和CC组之间的比较使用非参数方法:Wilcoxon双样本秩和检验用于分布比较或Fisher精确检验用于比例比较。在检查肺和血液成对样本的组内比较中，使用Wilcoxon符号秩检验(用于非参数数据)。所有统计检验均使用SigmaStat(2.0版本，Jandel, Chicago, IL)和SPSS for Windows(8.0版本，SPSS, Chicago, IL)统计软件进行。统计显著性设为gydF4y2BapgydF4y2Ba≤0.05。gydF4y2Ba

10例hiv -1阴性HHC(男7例，女3例)和15例hiv -1阴性CC(男11例，女4例)行BAL和静脉穿刺获得BAC和PBMC。HHC组的中位年龄(23.5岁)与CC组的中位年龄(24岁)没有差异。相等数目(gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)每组参与者都是吸烟者。HHC为家庭成员(配偶(gydF4y2BangydF4y2Ba2)，儿子(gydF4y2BangydF4y2Ba= 2)，女儿(gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)，姐姐(gydF4y2BangydF4y2Ba= 1)、人生伴侣(gydF4y2BangydF4y2Ba= 1))，在BAL前至少3个月与指标患者住在同一房子(或同一房间)。gydF4y2Ba

以下中位数参数在HHC和CC之间具有可比性:体重(62和67 kg)，血清白蛋白(4.6和4.6 g/dl)，外周血白细胞计数(6.1和6.5 × 10)gydF4y2Ba^3.gydF4y2Ba/μl)和血红蛋白(16.3和15.9 g/dl)。HHC中性粒细胞的中位数比例略高于CC(分别为63.8和56.1%;gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.045)。在六分之四的HHC和七分之七的CC检查中，发现了表明之前接种过Calmette-Guérin杆菌的疤痕。结核菌素皮肤试验硬化与5 TU PPD相当(HHC和CC分别为20和18 mm)。gydF4y2Ba

在HHC和CC中，BAL液的回收比例、BAC的产量和BAC的细胞特征，包括过氧化物酶阳性细胞的比例(中位数，2和1.5%)，分别具有可比性。HHC和CC的BAC中肺泡中性粒细胞的比例均≤1%，肺泡淋巴细胞的中位数比例分别为14.1和14.0%，肺泡巨噬细胞的中位数比例分别为85.8和83.9%，与既往CC的研究相似(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

DNA合成(结合[gydF4y2Ba^3.gydF4y2BaH]胸苷激酶)在PBMC中被评估(图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BaCgydF4y2Ba)和BAC(图;gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2BaBgydF4y2Ba而且gydF4y2BaDgydF4y2Ba)从HHC (gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BaBgydF4y2Ba)及CC (gydF4y2BaCgydF4y2Ba而且gydF4y2BaDgydF4y2Ba)至最佳浓度gydF4y2Ba假丝酵母gydF4y2Ba(10μg / ml),产后抑郁症(10μg / ml), 85 Ag公司(5μg / ml), ESAT-6(2μg / ml), ST-CF(1μg / ml) manLAM(10μg / ml),和PHA(1μg / ml)。正如HHC和CC中BAC的细胞组成所预期的那样，对所有刺激反应的DNA合成在两组中都很低。PPD、Ag 85co、ST-CF、gydF4y2Ba假丝酵母gydF4y2Ba， PHA显著降低(gydF4y2BapgydF4y2Ba有趣的是，在PPD、Ag 85co和PHA的作用下，HHC PBMC的DNA合成显著低于CC (gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。gydF4y2Ba

用于最佳诱导IFN-γ斑点的Ags浓度与用于诱导DNA合成的Ags浓度相同(见上文)。来自HHC的PBMC和BAC(图;gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)和CC(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2BaBgydF4y2Ba)用培养基、PPD和ag85co刺激。无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba描述了HHC和CC成对的自体PBMC和BAC中ag特异性IFN-γ产生细胞(即IFN-γ斑点)的频率。由于肺细胞的可用性有限，并不能在所有个体中检测所有Ags。gydF4y2Ba

HHC BAC中Ag 85共特异性IFN-γ产生细胞的中位数频率显著较高(gydF4y2BangydF4y2Ba= 10)比BAC从CC (gydF4y2BangydF4y2Ba= 13;gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.022)。与CC相比，HHC BAC中PPD特异性IFN-γ产生细胞的频率无统计学差异。此外，在6个和7个HHC中，BAC中PPD和Ag 85共特异性IFN-γ产生细胞的频率分别高于自体PBMC。相反，在CC中，BAC中PPD和ag85co特异性IFN-γ-产生细胞的频率低于自体PBMC，在PPD测试的15 CC中有7 CC和Ag 85co测试的13 CC中有7 CC。当将BAC中IFN-γ-产生细胞的频率与自体PBMC中IFN-γ-产生细胞的频率选择截断值为3时，HHC BAC中IFN-γ-产生细胞的频率(gydF4y2BangydF4y2Ba= 10)在40%的PPD和50%的Ag 85co中均比自体PBMC高3倍。使用相同的标准，CC的BAC中IFN-γ-产生细胞的频率高于自体PBMC, PPD为7% (1 / 15)，Ag 85co为12% (1 / 13;gydF4y2BapgydF4y2Baag85co, HHC vs CC = 0.05)。因此,gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba-特异性IFN-γ-产生细胞似乎富集于HHC的肺部(与血液相比)，并且HHC的BAC中出现的频率高于CC的BAC。gydF4y2BangydF4y2Ba= 2) PPD-和Ag 85共特异性IFN-γ-产生BAC的频率高于PBMC，提示可能暴露于gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba在社区内。gydF4y2Ba

为了评估产生IFN-γ的ag特异性细胞的频率增加是否由于HHC和CC的BAC或PBMC中淋巴细胞的绝对数量的差异，将BAC和PBMC中IFN-γ产生细胞的频率分别归一化为10,000个淋巴细胞。BAC和PBMC中每10,000个淋巴细胞中ag85特异性IFN-γ产生细胞的中位数为29(第25百分位，17;第75百分位，90)和7(第25百分位，2;第75百分位，11)和13(第25百分位，5;第75百分位，34)和6(第25百分位，2;HHC和CC分别为75百分位14)。在BAC和PBMC中，每10,000个淋巴细胞中ppd特异性IFN-γ产生细胞的中位数为56(第25百分位，39;第75百分位，148)和17(第25百分位，9;第75百分位，23)和34(第25百分位，23;第75百分位，92)和8(第25百分位，7; 75th percentile, 27) in HHC and CC, respectively. Differences in frequencies of Ag 85-specific IFN-γ-producing cells per 10,000 lymphocytes in BAC and PBMC were significant in HHC only (pgydF4y2Ba= 0.022)。gydF4y2Ba

为了估计PBMC中IFN-γ产生细胞的IFN-γ输出量，以及HHC和CC中的BAC输出量，用图像分析仪测量斑点的大小。Ag 85共刺激HHC PBMC和BAC中IFN-γ斑点的比例(gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和CC (gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)在每个尺寸类别(10gydF4y2Ba^{−gydF4y2Ba1gydF4y2Ba}-10年gydF4y2Ba^{−gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba}毫米gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba)在来自HHC和CC的BAC和PBMC之间具有可比性，表明每个细胞的IFN-γ输出具有可比性(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

在HHC亚组中研究了st - cf特异性IFN-γ产生PBMC和BAC (gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)和CC (gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)。每10个st - cf特异性IFN-γ产生细胞的中位数频率gydF4y2Ba^5gydF4y2BaHHC和CC的BAC和PBMC与PPD反应平行，6个HHC中有4个BAC比PBMC高2倍，6个CC中0个(HHC BAC, 147(25百分位，16;第75百分位，206);HHC PBMC, 51(第25百分位，34;75百分位，101);CC BAC, 38(第25百分位，24;第75百分位，68);CC PBMC, 85(第25百分位，43;第75百分位，139);不显著)。ESAT-6-、manLAM-和gydF4y2Ba假丝酵母gydF4y2Ba特异性IFN-γ产生细胞低(<30/10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba另一方面，pha诱导的IFN-γ斑点的中位数频率较高(580-810/10)gydF4y2Ba^5gydF4y2BaPBMC或BAC)和HHC和CC的可比性(数据未显示)。gydF4y2Ba

在研究对象的子集(HHC，gydF4y2BangydF4y2Ba= 6;CC,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6) Ag 85co的三种组分，即Ag 85A (5 μg/ml)、Ag 85B (5 μg/ml)和Ag 85C (5 μg/ml)对IFN-γ产生细胞的响应频率也进行了评估;表格gydF4y2Ba我gydF4y2Ba)．HHC中产生IFN-γ-的BAC和PBMC (BAC/PBMC)频率比显著高于CC (gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.01)。gydF4y2Ba

在HHC和CC中，PPD-和Ag 85共特异性il -10产生PBMC和BAC的频率分别在细胞群和受试者组之间具有可比性(数据未显示)。gydF4y2Ba

在一组研究对象中(HHC，gydF4y2BangydF4y2Ba= 6;CC,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)，体外ag85co和ppd刺激的PBMC和BAC培养24 h上清液可用ELISA法分析IFN-γ和TNF-α浓度。与CC BAC相比，HHC BAC对Ag 85co反应的IFN-γ产量显著降低(gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.032)。因此，HHC BAC中Ag 85共特异性IFN-γ产生细胞的高频率并不伴随着细胞培养上清液中相应的高浓度IFN-γ。gydF4y2Ba

在HHC和CC中，BAC中Ag 85共同诱导的TNF-α的产生明显高于PBMC。在HHC中，BAC中位TNF-α水平为6871 pg/ml(第25百分位，4669;第75百分位，7513)，PBMC为2457 pg/ml(第25百分位，1537;第75百分位，3282;gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.043)。在CC中，BAC中的TNF-α水平为3187 pg/ml(第25百分位，2906;第75百分位，4113)，PBMC为1688 pg/ml(第25百分位，1377;第75百分位，1853年;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.043)。与CC相比，HHC Ag 85共刺激BAC中的TNF-α浓度更高(1.8倍)(不显著)。gydF4y2Ba

这项研究首次比较了来自活动性涂片阳性和培养阳性结核病患者家庭的健康个体的肺免疫反应，因此接触结核病的可能性很高gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba，和健康的人gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba-结核病流行社区中的敏感人群。在HHC中，ag85共特异性IFN-γ产生BAC被分隔到肺泡间隙。此外，HHC BAC中产生ag85共特异性、IFN-γ细胞的频率高于CC BAC, HHC BAC中产生Ag 85A-和Ag 85b特异性、IFN-γ细胞的频率明显高于CC BAC，但Ag 85c特异性、IFN-γ细胞的频率不明显。考虑到健康受试者(包括HHC和CC)肺泡间隙淋巴细胞的比例比外周血低4- 5倍，BAC中HHC中ag85共特异性IFN-γ产生细胞的比例明显高于PBMC。这些发现与气成性一致gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba结核病患者的HHC感染/暴露。因此，似乎在早期阶段gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba感染时，ag85共特异性肺单个核细胞扩增。gydF4y2Ba

ag85co是活的主要产物gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba（gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba)，并可能对人体保护性免疫的发展起关键作用gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba感染(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba)．最近，已证明接种ag85co可预防gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba小鼠的挑战(gydF4y2Ba29gydF4y2Ba，gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba31gydF4y2Ba)和豚鼠(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba，gydF4y2Ba33gydF4y2Ba)．在对Ag 85的人体免疫反应研究中，来自健康结核菌素皮肤试验阳性受试者的PBMC显示出对Ag 85co和Ag 85A的强烈DNA合成和IFN-γ分泌(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba)．此外，HHC中Ag 85刺激的PBMC的IFN-γ产量显著高于结核病患者的PBMC (gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)．事实上，PBMC对Ag 85co反应的DNA合成低52% (gydF4y2Ba33gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)至100%活动性肺结核患者(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba)相对于健康对照个体。此外，在肺结核患者中，对Ag 85A反应的IFN-γ产量较低(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba，gydF4y2Ba37gydF4y2Ba)．总的来说，T细胞对Ag 85co的反应可能表明宿主对Ag 85co的保护性免疫gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba在人类身上。我们发现，在结核菌素皮肤试验阳性的HHC中，Ag 85共特异性IFN-γ-产生BAC的频率增加，这可能表明在这些有高概率感染过HHC的受试者中，局部保护性免疫的扩大gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

HHC和CC中Ag - 85特异性IFN-γ-产生BAC频率的差异不太可能是由于血液和肺细胞组成的差异，因为通过组织化学分析HHC和CC的BAC和PBMC，淋巴细胞和单核吞噬细胞的数量和百分比没有差异，特别是淋巴细胞的比例在两组之间具有可比性。此外，IFN-γ产生细胞的频率是特定的gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba两个研究组的BAC中除Ag 85co外的其他Ags (PPD, ST-CF, manLAM, ESAT-6)具有可比性。因此，HHC中ag85共特异性IFN-γ产生BAC比例的增加可能是由于Ag 85共特异性BAC在最近的气成反应中发生的扩张gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba结核病患者家庭中的感染/接触情况。这与HHC的发现相一致，当PBMC和BAC中Ag特异性IFN-γ产生细胞的频率归一化至10,000个淋巴细胞时，BAC中的淋巴细胞中PPD-和Ag 85特异性IFN-γ产生细胞的数量明显高于PBMC中的淋巴细胞。然而，因为最近的数据表明gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba-感染AM可能是IFN-γ的来源(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba)， BAC中IFN-γ产生细胞与淋巴细胞数量的正常化可能不能反映BAC中IFN-γ产生细胞群的真实范围。这超出了本研究的范围，以解开细胞来源的IFN-γ和评估暴露的影响gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba对参与IFN-γ产生的细胞群的影响。阐明HHC和CC中IFN-γ的细胞来源是正在进行的研究的主题。gydF4y2Ba

HHC肺中Ag 85共特异性IFN-γ产生BAC的区隔化只能通过高敏感试验(ELISPOT)检测到，而不能通过细胞培养上清液中的DNA合成或IFN-γ免疫反应性检测到。gydF4y2Ba

频率增加的含义gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2BaHHC肺中产生IFN-γ的特异性细胞目前还不清楚，因为产生IFN-γgydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Baag特异性BAC也可在结核病患者肺部放射感染区域的BAC中高频检测到(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

由于本研究的横断面性质，无法评估HHC中结核菌素皮肤试验从阴性到阳性的转换时间点。新感染或再感染的明确诊断gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba由于与结核病患者接触，因此，在HHC中是不可能的。然而，一些观察结果可能表明最近接触或感染gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba在本研究中HHC。首先，外周血中循环中性粒细胞比例的轻微增加可能表明近期发生了系统性炎症反应。此外，HHC的BAC对Ag 85co的反应增加了TNF-α的产生(尽管与CC的差异没有达到统计学意义)，这可能表明局部炎症免疫反应。最后，与CC相比，HHC PBMC对PPD、Ag 85co和PHA反应的DNA合成水平较低，这可能表明由于最近的活跃，免疫抑制回路被激活gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba感染，如其他感染(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

在大多数HHC中，BAC中产生IFN-γ-的st - cf特异性细胞的频率高于PBMC，但与CC的BAC中没有显著差异。然而，如果研究的群体更大，这些差异可能会达到显著性。ST-CF是分泌Ags的粗混合物，含有ag85co和多种其他Ags。此外，由于目前研究中使用的纯化Ag 85co的浓度(5 μg/ml)超过了粗的ST-CF(最多1 μg/ml)，产生IFN-γ的Ag 85co-和ST-CF特异性细胞的检测频率的差异可能是由于后者的Ag混合物对细胞的刺激不佳所致。另外，ST-CF可能含有抑制IFN-γ表达的成分。Demissie等人最近发现，与结核病患者相比，ST-CF在HHC患者的PBMC中诱导了更多的DNA合成和更高的IFN-γ产生(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba)．有趣的是，与疾病轻微的HHC患者相比，晚期结核病HHC患者st - cf刺激的PBMC中IFN-γ的产生水平显著高于st - cf刺激的PBMC，这表明与更强烈的暴露有关gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

我们发现，HHC的BAC中特异性产生IFN-γ的BAC的频率，即Ag 85A和Ag 85B，而非Ag 85C，明显高于CC的BAC，这与纯化Ag 85co的结果相似。尽管纯化的Ag 85co中以Ag 85B为主，但Ag 85co组分(A、B和C)的相对免疫原性尚不清楚。此外，Ag 85A、-B和-C在生物活性和/或保护性免疫诱导方面是否存在差异尚不清楚。gydF4y2Ba

总之，最近的曝气性接触/感染gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba与HHC肺泡间隙中ag85共特异性IFN-γ产生细胞的积累有关。Ag 85共特异性IFN-γ产生细胞区室化到HHC的肺泡间隙可能反映了原位早期保护性免疫反应的激活。对人体保护性免疫反应的了解gydF4y2Ba结核分枝杆菌gydF4y2Ba在感染部位进行检测可能有助于确定保护性免疫的相关因素，这在评估新型抗结核疫苗的功效时是迫切需要的。gydF4y2Ba

我们感谢Elena Aguilar博士Sánchez为结核病患者的家庭成员进行筛查，并为来自社区的个人进行筛查，以及María del Carmen Sarabia León为细胞离心机的准备工作提供帮助。我们非常感谢David Hom(新泽西医学和牙科大学)关于统计分析的建议。我们感谢参与这项研究的个人的帮助。gydF4y2Ba