文摘gydF4y2Ba
到目前为止,严重急性呼吸系统综合症(SARS)的发病机制在人类仍不清楚。SARS冠状病毒(冠)特殊CTL反应,特别是postinfection免疫力的大小和持续时间,并没有被广泛地研究过了。在这项研究中,我们发现heat-inactivated冠引起回忆CTL反应新发现飙升protein-derived抗原表位(SSp-1, S978, S1202)外周血抗原* 0201gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在1年postinfection恢复“非典”病人。有趣的是,heat-inactivated冠引起recall-like CTL反应SSp-1但不要S978 S1202,或从其他几个主要抗原表位人类病毒5 36(13.8%)于* 0201gydF4y2Ba+gydF4y2Ba健康的捐赠者没有任何联系历史与冠状。SSp-1-specific CTL扩大从记忆T细胞的恢复非典病人,和五个特殊健康的捐赠者共享一个分化的效应细胞毒性T淋巴细胞表型,CD45RAgydF4y2Ba+gydF4y2BaCCR7gydF4y2Ba−gydF4y2BaCD62LgydF4y2Ba−gydF4y2Ba,并表示CCR5和CD44。然而,相比之下的高活动性SSp-1-specific ctl源于记忆T细胞恢复非典病人,SSp-1-specific ctl五个特殊健康的捐赠者的活动性较低,由快速四聚物解离动力学和细胞毒性反应性降低,IFN-γ分泌,和细胞内生产IFN-γ,TNF-α,穿孔素,和granzyme a。这些结果表明,冠感染诱发强烈和持久CTL-mediated幸存的SARS患者的免疫力,这可交叉反应的记忆T细胞在T细胞可能存在冠的一个小子集可以重新激活健康的个人和冠感染。gydF4y2Ba
第一个记录爆发的严重急性呼吸系统综合症(SARS)gydF4y2Ba3gydF4y2Ba2003年2月下旬,导致成千上万的感染者,数百人死亡。病因代理人的综合症,一种新的冠状病毒称为SARS冠状病毒(冠),已经被识别和分离(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba),它的基因组已经测序(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
迄今为止,人类SARS的发病机制仍不清楚。特别是,对冠状病毒感染细胞介导免疫的作用还不清楚。SARS-associated淋巴球减少症也被很好的记录(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba),但是底层的机制尚不明了。一些先前的研究表明淋巴细胞和淋巴细胞的绝对计数是一个有用的指标子集的发展有效的非典型肺炎的诊断和治疗方法gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),和三个CD8抗原* 0201 -限制gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞抗原表位,SSp-1 S978, S1202,最近被发现从冠状突起蛋白(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
虽然记忆T细胞反应抗原表位S1202和S978被检测到的有关酶联免疫斑点试验IFN-γPBMCs抗原* 0201gydF4y2Ba+gydF4y2BaSARS康复患者3莫postinfection (gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),这个免疫力将持续多长时间需要进一步监控。令人惊讶的是,一代效应ctl从健康的捐赠者没有任何联系历史与体外重复挑战PBMCs后冠heat-inactivated SARS-CoV-pulsed树突状细胞与IL-7培养基补充,il - 10, 2,灭活冠激起recall-like T细胞反应在某些健康的捐赠者,这暗示可能存在记忆T细胞数量可交叉反应的冠。它是吸引我们来阐明这些问题。最近发现的抗原表位,SSp-1 S978 S1202,抗原* 0201 / SSp-1四聚体(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)帮助定量和定性调查的特点具体记忆T细胞反应heat-inactivated冠在SARS康复患者1年postinfection和健康的人。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
捐助者gydF4y2Ba
SARS-CoV-seropositive血液样本取自恢复患者(12 - 14月后恢复)知情同意和有关当地医院伦理委员会的批准在广州,中国。健康的捐赠者的血液样本是从上海血液中心获得的。所有的捐赠者从18岁到61岁。13个SARS康复患者由8女性和5男性选择本研究类型的抗原* 0201亚型阳性,pcr DNA类型(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)。十二个抗原* 0201gydF4y2Ba−gydF4y2BaSARS康复患者包括5女性和7个男性,和36抗原* 0201gydF4y2Ba+gydF4y2Ba健康的捐赠者由21个女性和15名男性没有任何接触历史作为控制。Abs对冠被SARS-specific捕获ELISA和免疫球蛋白检测终点稀释Ab滴度,从1:8 1:64,观察在所有SARS患者中恢复过来。没有Ab冠中检测出任何健康的捐赠者。gydF4y2Ba
肽gydF4y2Ba
protein-derived CD8抗原* 0201 -限制冠飙升gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞抗原表位,SSp-1 (RLNEVAKNL残留1167 - 1175),S978 (LITGRLQSL残留978 - 986),S1202 (FIAGLIAIV残留1202 - 1210),从hcov - 229 e突起蛋白抗原表位(H77 LLLNCLWSV,残留77 - 85;H881 LITGRLAAL,残留881 - 889),并从人类流感病毒基质蛋白主要抗原表位(GILGFVFTL残留58 - 66),人类巨细胞病毒pp65 (NLVPMVATV残留495 - 503),EBV LMP2 (CLGGLLTMV残留426 - 434),乙型肝炎病毒核心Ag (FLPSDFFPSV残留18-27)、癌胚Ag (CAP-1 YLSGANLNL,残留物,571 - 579年),在GL物化学合成和纯化> 98%的反相高效液相色谱,质谱证实。冻干肽溶解在DMSO和存储在整除−80°C到使用。gydF4y2Ba
细胞系和斯派克protein-recombinant腺病毒转染gydF4y2Ba
293年人类TAP-deficient T2,胚胎肾,结直肠癌SW480 (HLA-A2.1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba)和HT29 (HLA-A2.1gydF4y2Ba−gydF4y2Ba)细胞系得到来自美国文化集合类型。高峰protein-transfected靶细胞是由我们如前所述gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。短暂,峰值蛋白质互补脱氧核糖核酸rt - pcr扩大了使用远期(5′-GCCTCGAGACCATGTTTATTTTCTTATTATTTCTTACTCTCACTAGTGGTAGTGACCT-3′)和反向(5′-TTTATGTGTAATGTAATTTGACACCCTT-3′)引物从RNA提取冠BJ01应变(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。重组腺病毒包含峰值蛋白质互补脱氧核糖核酸构建和传播在293细胞,病毒滴度取决于空斑实验293细胞。感染、SW480和HT29细胞孵化与重组腺病毒的感染复数50:1 24 h。证实了斯派克蛋白表达rt - pcr和免疫印迹使用高峰蛋白特异性Ab (IMGENEX)。SW480和HT29细胞转染重组腺病毒包含β-galactosidase cDNA被用作控制。gydF4y2Ba
病毒和病毒失活gydF4y2Ba
的冠BJ01应变(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba在维洛细胞培养在传播IMDM (HyClone)。病毒悬液离心机在300×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟,上层的整除,储存在−80°C。病毒股票效价为1.6×10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba中间组织culture-infective剂量(TCIDgydF4y2Ba50gydF4y2Ba每毫升)。病毒灭活,股票被加热60°C 60分钟,和病毒粒子被色谱分离纯化。所有细胞培养在三级生物安全水平的实验室条件下进行。gydF4y2Ba
从内存和克隆CD8细胞毒性t淋巴细胞扩张gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞gydF4y2Ba
PBMCs从SARS康复患者的全血分离或健康的捐赠者Ficoll-Hypaque (Sigma-Aldrich)密度梯度离心法。总共2×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba/毫升PBMCs挑战了heat-inactivated冠(1.6×10gydF4y2Ba6gydF4y2BaTCIDgydF4y2Ba50gydF4y2Ba每毫升)RPMI 1640中包含10% heat-inactivated FCS和20个国际单位/毫升rIL-2 (Sigma-Aldrich)。定期收集培养细胞进行流式细胞术分析。功能评估,tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba淋巴细胞是由四聚物积极选择磁性细胞分选细胞培养(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。三千万培养PBMCs沾1μg PE-conjugated抗原* 0201 / SSp-1四聚物在室温下为30分钟。细胞被洗了两次,然后用2μg anti-PE孵化微(Miltenyi研究)在4°C为20分钟。与PBS的细胞被洗一次,用于分隔符列女士(Miltenyi研究),和积极的细胞分离根据制造商的指示。孤立tetramer-positive ctl被限制克隆稀释和维护在人类AB血清RPMI 1640中补充了10%和50个国际单位/毫升rIL-2在辐照(80 Gy)同种异体PBMCs馈线细胞(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
四聚物染色和流式细胞术免疫荧光分析gydF4y2Ba
抗原* 0201 / SSp-1四聚体建立了由美国(如前所述gydF4y2Ba13gydF4y2Ba
细胞毒性试验gydF4y2Ba
ctl细胞毒性的测试标准4 - hgydF4y2Ba51gydF4y2BaCr释放试验由美国(如前所述gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。每个试验进行了一式三份。特定百分比裂解决心按照下列公式:特定百分比裂解=[(平均实验cpm−平均自发cpm) /(平均最大cpm−平均自发cpm)×100%。自发的和最大的释放是由孵化标记目标中单独或2% Triton x - 100,分别。自发释放总是< 15%的最大的释放。一式三份的SD井< 10%。gydF4y2Ba
ELISPOT试验gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
学生的gydF4y2BatgydF4y2Ba测试分析是用来确定结果的重要性。的值gydF4y2BapgydF4y2Ba≤0.05显示统计学意义。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
内存CTL反应恢复“非典”病人gydF4y2Ba
我们调查SARS康复患者的细胞免疫首先专注于识别IFN-γ-secreting T细胞和抗原* 0201 / SSp-1 tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在外周血T细胞。虽然记忆T细胞反应抗原表位S1202和S978被检测到的有关酶联免疫斑点试验IFN-γPBMCs抗原* 0201gydF4y2Ba+gydF4y2BaSARS康复患者3莫postinfection (gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),我们发现没有证据表明IFN-γ-secreting T细胞SSp-1 S978 S1202或抗原* 0201 / SSp-1 tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞中分离出新鲜PBMCs从SARS康复患者1年后复苏,表明如果SARS-CoV-specific CD8记忆gydF4y2Ba+gydF4y2Ba确实是存在于外周血T细胞在1年postinfection SARS康复患者,他们在较低的频率。gydF4y2Ba
扩大特异性细胞毒性t淋巴细胞克隆,新鲜孤立PBMCs与heat-inactivated挑战体外冠。SARS-CoV-specific ctl的一代是追踪顺序基于抗原* 0201 / SSp-1四聚物染色和CD8表达式。对于所有13抗原* 0201gydF4y2Ba+gydF4y2Ba恢复非典病人,tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞数量显著增加48 h后挑战与冠状,与水平见顶7天短期文化(图。1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba),表明召回CTL反应从记忆T细胞。tetramer-positive CD8的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在7天达到4.98±0.77% (gydF4y2BangydF4y2Ba= 13,表我gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba和图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。第七天灭活virus-challenged批量使用有关酶联免疫斑点试验IFN-γPBMCs进行了分析。这三个抗原表位,SSp-1、S1202 S978, IFN-γ释放引起T细胞反应相对较高,这表明没有统计学意义(图。2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
评估peptide-specific T细胞的功能,于本院* 0201 / SSp-1-positive淋巴细胞积极选择的四聚物磁性细胞分选virus-challenged PBMCs中描述gydF4y2Ba材料和方法gydF4y2Ba。SSp-1-specific T细胞表现出高功能性贪欲的Ag)认可,tetramer-positive T细胞有效,特别是赖氨酸蛋白表达HLA-A2.1飙升gydF4y2Ba+gydF4y2BaSW480细胞(图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba),但不是蛋白表达HLA-A2.1飙升gydF4y2Ba−gydF4y2BaHT29细胞或β-galactosidase-expressing SW480 HT29细胞(数据没有显示)。他们也能够有效地刺激后分泌IFN-γSSp-1(图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2BaBgydF4y2Ba),但不是针对抗原* 0201——限制无关肽CAP-1(数据没有显示)。于* 0201 / SSp-1 tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞中没有检测到heat-inactivated SARS-CoV-challenged PBMCs抗原* 0201gydF4y2Ba−gydF4y2Ba恢复SARS患者在任何时间点(数据没有显示)。gydF4y2Ba
CTL反应在健康个体灭活冠gydF4y2Ba
我们之前研究的效应ctl体外代健康的捐赠者没有任何联系历史与重复挑战PBMCs后冠heat-inactivated SARS-CoV-pulsed树突状细胞与IL-7培养基补充,il - 10, 2。Ag-specific效应ctl生成通过三个或更多从天真的前体在17轮每周重复挑战36健康的捐赠者(数据未显示)。36的有趣的是,健康的捐赠者,另外五个健康的捐赠者,捐助者7日,11日,16日,23日和31日,由三个女性和两个男性,47岁,38岁,51岁,42岁和29日分别产生了recall-like CTL反应从记忆T细胞在挑战heat-inactivated冠。于* 0201 / SSp-1 tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞数量显著增加48 h后挑战冠和7天达到高峰,与那些来自动力学相似SARS患者(图1中恢复过来gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。7天,tetramer-positive CD8的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba5 T细胞达到4.31±0.83%特殊健康的捐赠者,与非典病人(4.98±0.77% 13恢复gydF4y2BapgydF4y2Ba> 0.05,表我gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba和图1gydF4y2Ba⇑gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
第七天灭活virus-challenged散装PBMCs从五个特殊健康使用有关酶联免疫斑点试验IFN-γ捐赠者进行了分析。SSp-1引起T细胞的反应相对较低数量的IFN-γ证监会241±67/10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba第七天培养PBMCs相比,452±96/10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba第七天培养PBMCs SARS病人的恢复,但抗原决定基S1202或S978并未引起T细胞反应的五个特殊健康的捐赠者。阐明问题的主要感染出现这些记忆T细胞的数量可交叉反应的SSp-1发现在五个特殊健康的捐赠者,我们进行了一次广泛的寻找可交叉反应的记忆T细胞识别的抗原表位替代人口使用抗原决定基板包括从hcov - 229 e突起蛋白肽(H77 LLLNCLWSV,残留77 - 85;H881 LITGRLAAL,残留881 - 889),并从人类流感病毒基质蛋白主要抗原表位(GILGFVFTL残留58 - 66),人类巨细胞病毒pp65 (NLVPMVATV残留495 - 503),EBV LMP2 (CLGGLLTMV残留426 - 434年),和乙肝病毒核心Ag (FLPSDFFPSV残留18-27)。不幸的是,没有对这些抗原表位的有关酶联免疫斑点试验IFN-γ五个特殊健康献血者(图2所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。所有这些数据表明可交叉反应的记忆T细胞冠抗原决定基SSp-1,不要S1202或S978,可能存在于T细胞的健康个体的一个小子集。然而,在这项研究中,我们获得的知识的起源这些可交叉反应的记忆T细胞数量。因此,我们关注SSp-1-specific T细胞的性质的差异五个特殊健康的捐赠者和恢复“非典”病人。gydF4y2Ba
尽管tetramer-positive CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba五项异常T细胞是从PBMCs扩大健康的捐赠者与那些来自动力学相似SARS患者中恢复过来,他们显示功能障碍。细胞毒性活动和IFN-γ四聚物的生产积极选择五个特殊健康捐助者的T细胞不到一半的平均显示tetramer-positive从SARS康复患者T细胞E: T比率和肽浓度测试(图3所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
胞内细胞因子在virus-challenged PBMCs和tetramer-positive T细胞的表型gydF4y2Ba
SSp-1-specific ctl源自于特殊健康的捐赠者呈现出受损的细胞毒性的活动和低水平的IFN-γ生产相比,这些ctl的SARS患者恢复;这相关的观察细胞内IFN-γ较少,TNF-α,穿孔素,granzyme累积异常健康donor-derived ctl的ctl SARS康复患者短期体外后扩张。胞内cytokine-positive CD8的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba总一天7 virus-challenged CD8的T细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在五个特殊健康的捐赠者IFN-γ54.9±5.3%,TNF-α53.8±3.7%,穿孔素60.6±2.5%,和59.1±3.3% granzyme, IFN-γ相比83.8±3.4% (gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05),TNF-α76.3±2.3% (gydF4y2BapgydF4y2Ba穿孔素(< 0.05),79.5±2.9%gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)和78.2±2.8% granzyme (gydF4y2BapgydF4y2Ba在13 SARS康复患者(< 0.05)表我gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba和图4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
tetramer-positive T细胞体外扩大从记忆T细胞的13个SARS康复患者和5特殊健康的捐赠者都共享一个分化的效应细胞毒性T淋巴细胞表型,CD45RAgydF4y2Ba+gydF4y2BaCCR7gydF4y2Ba−gydF4y2BaCD62LgydF4y2Ba−gydF4y2Ba。他们还表示CCR5和CD44(表我gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba和图5gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),分子代表优惠归航周组织而不是淋巴结。然而,这是否表型可能反映了实际peptide-specific T细胞的体内状态应该进一步确认。gydF4y2Ba
比较low-avidity ctl的特殊健康的捐赠者high-avidity ctl从SARS患者中恢复过来gydF4y2Ba
获得进一步了解反应的差异大小和功能之间的贪欲SSp-1-specific ctl恢复SARS病人和特殊健康的捐赠者,tetramer-selected ctl是克隆和维护从五个随机选择的病人捐赠者和五个特殊健康的捐赠者中描述gydF4y2Ba材料和方法gydF4y2Ba。1周后,是由功能贪欲Ag)认可gydF4y2Ba51gydF4y2BaCr释放试验和有关酶联免疫斑点试验IFN-γ,评估细胞毒性t淋巴细胞克隆的能力特别是溶解SSp-1-pulsed T2细胞和分泌IFN-γSSp-1系列稀释的存在,分别。half-maximal溶菌作用(EC所需SSp-1浓度gydF4y2Ba50gydF4y2Ba)使用克隆CTL效应细胞和SSp-1-pulsed T2细胞作为靶细胞E: T比25:1不同在不同的细胞毒性T淋巴细胞克隆。所有的细胞毒性t淋巴细胞克隆来自恢复患者认可SSp-1很高的功能与EC贪欲gydF4y2Ba50gydF4y2Ba的(1.34±0.37)×10gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba肽m .相比之下,五个特殊的细胞毒性t淋巴细胞克隆健康的捐赠者表现出更低的热望与EC Ag)识别gydF4y2Ba50gydF4y2Ba的(3.18±1.42)×10gydF4y2Ba−6gydF4y2Ba肽(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001)。与细胞毒性相关活动,细胞毒性t淋巴细胞克隆来自同等水平的IFN-γ产生的特殊健康的捐赠者的恢复患者当刺激> 2日志肽剂量越高。所需的浓度SSp-1产生400每5000年克隆ctl是证监会(0.97±0.28)×10gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba肽M与SARS病人恢复的(2.15±0.49)×10gydF4y2Ba−6gydF4y2Ba肽(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001)五个特殊健康献血者(表二世gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。功能差异贪欲SSp-1-specific Ag)识别的细胞毒性t淋巴细胞克隆之间恢复SARS病人和肽的特殊健康的捐赠者也显示滴定曲线(图。6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba和gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
进一步研究结构的差异之间的贪欲CTL克隆来自恢复SARS病人和特殊健康的捐赠者,我们进行四聚物离解化验如前所述(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba)。克隆ctl和饱和浓度的孵化PE-labeled抗原* 0201 / SSp-1四聚体在4°C,然后用过多的清洗和孵化标记四聚体,,PE-labeled四聚物分离被流式细胞术化验。四聚物的分离速度与细胞毒性t淋巴细胞克隆来自五个特殊健康的捐赠者比那些来自恢复SARS病人(图。6gydF4y2Ba⇑gydF4y2BaCgydF4y2Ba)。离解的半场PE-labeled四聚物的复合物从细胞毒性t淋巴细胞克隆了荧光降低50%是64±6分钟恢复SARS患者相比之下34±3分钟(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01)五个特殊健康献血者(表二世gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
证据表明,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Bactl发挥关键作用在消灭病毒和/或急性呼吸道病毒感染的发病机理(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba)。在这项研究中,我们首先分析了CTL反应恢复SARS患者的冠状。灭活冠引起Ag-specific召回CTL反应在PBMCs SARS康复患者1年后复苏,表明这些个体生成保护性细胞介导免疫对感染后冠冠和开发了一种自限性疾病。相比之下,那些遭受批评SARS或死于非典显然无法产生足够的保护性免疫消除冠;他们这种病原体的免疫反应可能实际上加剧了他们的疾病。gydF4y2Ba
我们也调查了Ag-specific CTL反应灭活在健康个体冠。有趣的是,5产生的36健康的捐赠者recall-like Ag-specific CTL反应在短期挑战heat-inactivated冠。虽然体外扩大Ag-specific T细胞通过长期引发刺激会导致实质性的功能区别原始体内的T细胞(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba体外扩张),我们发现,短期(不超过2周)没有从天真的前体生成特异性T细胞(数据未显示),与先前的研究一致的(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。我们因此认为SARS康复患者的CTL反应产生PBMCs和五个特殊健康捐献者48 h后体外文化反映非典冠状Ags的记忆T细胞遇到。gydF4y2Ba
记忆T细胞可分为两个功能不同的基于表达趋化因子受体CCR7的子集。CCR7gydF4y2Ba−gydF4y2Ba记忆细胞表达的受体迁移到组织发炎,但CCR7gydF4y2Ba+gydF4y2Ba记忆细胞表达淋巴结归巢受体(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba)。tetramer-positive CTL激活从记忆T细胞恢复SARS病人和五个特殊健康的捐赠者展出一个分化的效应细胞毒性T淋巴细胞表型,CD45RAgydF4y2Ba+gydF4y2BaCCR7gydF4y2Ba−gydF4y2BaCD62LgydF4y2Ba−gydF4y2Ba,并显示即时效应函数。这些细胞也表达了CCR5和CD44,所需优惠归航,外围组织而不是淋巴结。相关地,解剖的脾脏和淋巴结的病人死于非典显示淋巴损耗以及淋巴细胞数目减少(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
这些数据可能反映了ctl扮演双重角色控制急性冠状病毒复制和免疫病理的感染。冠状病毒感染的肺组织引起细胞存在于这些组织,如上皮细胞、pneumocytes,基质细胞、浸润装甲运兵车,释放细胞因子和趋化因子,吸引的特异CCR5gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD44gydF4y2Ba+gydF4y2Bactl进入肺部,支持根除病毒自限性的病人。并发CCR5的招聘gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD44gydF4y2Ba+gydF4y2Bactl外围组织导致CD8明显下降gydF4y2Ba+gydF4y2Ba外周血T细胞,从而部分地导致SARS-associated淋巴细胞减少。相比之下,CTL也可以溶解病毒感染细胞,和一个极端的CTL反应可能会导致组织损伤和吸引更多的中性粒细胞和巨噬细胞受伤部位,观察在肺泡和肺间质组织在SARS受害者的尸体解剖(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。反过来,这导致增强生产的促炎细胞因子激活的淋巴细胞,单核细胞/巨噬细胞和肺内上皮细胞,导致细胞因子网络失调(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba),增加吞噬细胞和NK细胞活性,从而加剧了疾病。未来的研究在急性非典型肺炎病人将必须找到具体的证据关于CTL反应冠感染;然而,这种情况现在已经少见,由于非典疫情下降。gydF4y2Ba
已经广为人知,有些可交叉反应的记忆T细胞可以被重新激活不同的病毒感染(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba的响应),第二个挑战可能是由可交叉反应的记忆T细胞的扩张引起的主要感染,这可能低亲和力的二次挑战Ag) (gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba39gydF4y2Ba,gydF4y2Ba40gydF4y2Ba)。这个礼物的风险从可交叉反应的记忆T细胞克隆激活T细胞功能损伤,延缓病毒消除二次挑战,事实上促进免疫病理的主机(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba,gydF4y2Ba42gydF4y2Ba)。肺是初始站点的一些病毒复制。重新激活记忆的CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞在肺不齐的代理可能会导致当地的免疫病理损伤(gydF4y2Ba43gydF4y2Ba)。我们的研究结果表明,虽然从五个特殊健康的捐赠者生成PBMCs recall-like Ag-specific T细胞反应在挑战heat-inactivated冠,低贪欲的ctl是产生与high-avidity ctl来自记忆恢复SARS患者的T细胞。考虑到五个特殊健康的捐赠者没有联系历史与新定义的冠,一个可能的解释为他们代low-avidity SARS-CoV-specific ctl的存在可能是可交叉反应的记忆T细胞克隆T细胞体验。gydF4y2Ba
这将是有趣的,以确定哪些类型的病原体可能负责原发性感染,产生记忆T细胞克隆可交叉反应的冠抗原决定基SSp-1但不是S978或S1202;这可能提供一种手段,识别个人特别容易在后续发展中至关重要的疾病冠感染。我们从hcov广泛评估CTL反应肽- 229 e和主导从人类流感病毒抗原表位,人类巨细胞病毒,EBV,和乙肝病毒在五个特殊健康的捐赠者,但没有回应这些抗原表位,我们不找到同源多肽SSp-1通过在线数据库分析。主机如何回应的传染病是一个函数的历史之前的感染和影响记忆T细胞池(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba)。不幸的是,当前的方法检测病毒感染历史不是最优的,在许多情况下,它是不可能的,以确定前感染病原体。非典的儿童似乎表现为轻度的疾病与成年人相比gydF4y2Ba44gydF4y2Ba,gydF4y2Ba45gydF4y2Ba)。这种差异是由于免疫病理发生由于记忆细胞的激活,这可能是更多样化和突出免疫成熟个体?我们所知,我们的研究是第一个报告,可交叉反应的记忆T细胞在T细胞可能存在冠的健康个体的一个小子集。gydF4y2Ba
考虑到非典疫情的严重程度,目前SARS疫苗的一代的兴趣(gydF4y2Ba46gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba,gydF4y2Ba49gydF4y2Ba,gydF4y2Ba50gydF4y2Ba,gydF4y2Ba51gydF4y2Ba)。更好地了解SARS的发病机制将极大地帮助安全的疫苗和治疗方法的发展。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
简雷纳博士的贡献在批判性阅读手稿是真诚地承认。我们感谢郭Zhenhong博士Shuxun刘博士,鲁伊·张,Chunfang罗为自己出色的技术援助。gydF4y2Ba
披露的信息gydF4y2Ba
作者没有财务利益冲突。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
这篇文章的出版成本支付部分费用的支付页面。这篇文章必须在此标记gydF4y2Ba广告gydF4y2Ba按照18事项部分1734只表明这个事实。gydF4y2Ba
↵gydF4y2Ba1gydF4y2Ba这项工作是支持由中国国家重点基础研究计划(2003 cb514108 2003 cb514113 2001 cb510002 2001 cb510009)、上海市自然科学基金(03 dz14104)和中国国家自然科学基金(30490240,30490240)。gydF4y2Ba
↵gydF4y2Ba2gydF4y2Ba地址的信件和重印请求Xuetao曹博士,第二军医大学免疫学研究所的乡音路800号,200433年上海,中国。电子邮件地址:gydF4y2Bacaoxt在}{public3.sta.net.cngydF4y2Ba
↵gydF4y2Ba3gydF4y2Ba略语摘要:非典型肺炎,严重急性呼吸系统综合症;冠,SARS冠状病毒;protein-derived CD8 SSp-1,冠飙升gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞抗原决定基1;证监会,spot-forming细胞。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2004年11月22日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2005年4月16日。gydF4y2Ba
- 版权©2005年由美国免疫学家协会gydF4y2Ba
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