肠道菌群的重要作用在促进急性炎症反应gydF4y2Ba^1gydF4y2Ba

恢复血液流动,即。,reperfusion, is the treatment of choice to save viable tissue following acute ischemia of a vascular territory. Nevertheless, reperfusion of ischemic tissues can be accompanied by significant local, remote, and systemic inflammatory events that may limit the beneficial effects of blood flow restoration (1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。因此,相信策略限制再灌注后的急性炎症反应可能是有用的治疗兼职教授治疗急性缺血(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。影响因素包括血管炎症反应的严重程度的领土,持续缺血,再灌注期间,和抵押品血液流动的存在(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。一些炎症过程的介质已被证明参与事件的级联导致缺血和再灌注(I / R)gydF4y2Ba^3gydF4y2Ba损伤,包括科学家趋化因子,platelet-activating因子和细胞因子,特别是TNF-α和il - 10 (gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba)。对待动物与anti-TNF-αAbs或实验TNF-α受体(TNFR1 1-deficient动物gydF4y2Ba^{−−/gydF4y2Ba})清楚地表明TNF-α核心作用的中介组织损伤,系统性炎症,杀伤力后肠道再灌注损伤gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。TNF-α释放和行动是中央发病的地方和系统性炎症反应发生肠道再灌注后,更大的理解引起的介质或调节TNF-α生产在这个过程显然是感兴趣的。gydF4y2Ba

几对老鼠的研究表明,中断后肠道细菌易位肠上皮衬里会占TNF-α增加生产和组织损伤后发生肠I / R (gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)。值得注意的是,大部分的这些研究使用较短的缺血和再灌注时间延长,可以允许更大损失的上皮细胞的能力来维持他们的屏障功能。相比之下,其他研究用更短的缺血时间一直没能证明一个重要的角色为有限合伙人,或者有限合伙人受体TLR4在I / R损伤(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba)。因此,本研究的目的是调查是否细菌和/或有限合伙人易位发生,强调地方和系统性炎症损伤长期肠I / R后老鼠。为此LPS浓度的血液和血液和肝脏细菌负荷后肠I / R损伤量化。此外,实验评估炎性损伤I / R后也在无菌鼠进行,没有细菌(事实上,没有其他已知的病原体)在他们的直觉。在后一种动物,我们希望评估的相关性急性炎症的肠道微生物群,衡量在I / R损伤的模型。无菌鼠是显示不激怒I / R损伤或死亡后,额外的实验评估的角色il - 10在调解缺乏这些动物的炎症反应。相比之下,反应的无菌小鼠和传统有限合伙人和il - 10的角色也被调查。gydF4y2Ba

无菌瑞士/ NIH小鼠源自一个无菌核(泰康利农场,日耳曼敦,纽约)和保持灵活的塑料光电隔离器(标准安全设备、腭、IL)使用古典无菌生物学技术(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。传统的瑞士/ NIH小鼠来自无菌矩阵,两代人之后,只考虑常规传统的设施。所有的动物都是8 - 10-wk-old雄性和雌性。所有实验过程在无菌鼠在无菌条件下进行,以避免感染动物和在当地的动物伦理委员会的批准。gydF4y2Ba

老鼠与氨基甲酸乙酯麻醉(140毫克/公斤,i.p。)和剖腹手术。肠系膜上动脉(SMA)是孤立和缺血引起的完全阻塞的SMA 60分钟。测量的百分比幸存的老鼠,再灌注是重新建立,老鼠监测显示时间。其他参数,再灌注被允许发生了40分钟(I60R40)当老鼠牺牲。这个时候再灌注(40分钟)选择基于重大组织损伤的存在不会过分高死亡率。Sham-operated动物被用作控制。在一些实验中,重组小鼠il - 10 (PeproTech落基山,NJ)或车辆(PBS, 100μl /鼠标)管理南卡罗来纳州的剂量0.5μg /动物再灌注前45分钟。在其他的实验中,anti-IL-10多克隆(兔子anti-rat / murine-IL-10 1μl / g)或单克隆(SCX-2克隆100μg /鼠标)Abs南卡罗来纳州管理。再灌注前45分钟。作为后者的控制实验,小鼠收到preimmune兔血清(1μl / g)或纯化鼠IgM(100μg /鼠标,克隆R4-22;圣地亚哥BD Pharmingen CA)。gydF4y2Ba

居民的腹腔巨噬细胞得到天真无菌或普通老鼠和在DMEM培养补充10%的边后卫。腹膜细胞洗被播种在96孔板2×10gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba细胞/毫升。3 h后37°C和5%的孵化有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba不依从细胞被冲洗掉,贴壁巨噬细胞是有或没有孵化有限合伙人(100 ng / ml,gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba血清型0111:B4;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州)。48小时后,上层的删除和存储在−20°C到进一步分析。TNF-α和il - 10的浓度测定在上层清液使用商用Abs和根据制造商提供的程序(研发系统、明尼阿波利斯、MN)。gydF4y2Ba

殖民的过程无菌鼠与微生物群与传统的老鼠是一个过程称为惯例化,这是如前所述执行(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。短暂,粪便样本从传统老鼠的大肠均质在盐水(10%)和由口腔填喂法无菌鼠。7、14、21天后,肠I / R是在这些动物进行的,如上所述。评估是否有足够惯例化的无菌鼠,粪便样本培养使用thioglycolate测试(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

结合大型光谱抗生素用于消毒常规的小鼠的肠道菌群。为此结合甲硝哒唑、环丙沙星、万古霉素,imipenem(所有在50毫克/公斤体重/天)在饮用水管理。动物床每天改变,所有实验过程在无菌条件下进行,以避免再感染的动物。评估抗生素治疗是否足以耗尽肠道微生物群,粪便样本培养使用thioglycolate测试后7日,14日和21天的抗生素治疗(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。21天,动物被提交到肠I / R损伤。gydF4y2Ba

血液收集臂神经丛和肝脏是收获和磨通风罩。匀浆和血液样本放在冰,和串行1/10稀释。一百毫升的每个稀释麦肯基镀在琼脂板(Difco、底特律、MI)和孵化24 h在37°C,然后菌落的数量计算。测定的检出限是100毫升细菌gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}或100个细菌每100毫克的组织。有限合伙人在血浆样品中决心使用gydF4y2Ba鲎gydF4y2Ba变形细胞试验由美国普尔博士(国家生物研究所的标准和控制,波特酒吧,英国)。gydF4y2Ba

有限合伙人(1和10毫克/公斤gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba血清型0111:B4;Sigma-Aldrich)是传统管理ip或无菌鼠。在这些动物,杀伤力是注射后观察在不同时期或血清得到TNF-α和il - 10的测量。在一些实验中,控制Ab(鼠IgM)或anti-IL-10单克隆(SCX-2克隆100μg /鼠标)Abs南卡罗来纳州管理。60分钟前政府的有限合伙人(10毫克/公斤)。gydF4y2Ba

伊文思蓝染料的外渗到组织作为一个索引的血管渗透性增加,如前所述(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba)。简单地说,伊文思蓝(20毫克/公斤)是管理增长值(1毫升/公斤)通过尾静脉动脉缺血性再灌注前2分钟。再灌注后四十分钟,一段十二指肠(∼3厘米)或刷新左肺被切成小块,伊文思蓝提取使用1毫升的甲酰胺。在组织中伊文思蓝的含量(毫克每100毫克的伊文思蓝的组织)获得了通过比较提取的吸光度与伊文思蓝标准曲线在620 nm的ELISA板读者。gydF4y2Ba

中性粒细胞在肠中积累的程度对肺组织是衡量分析髓过氧物酶活动,如前所述(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)。短暂,部分十二指肠和刷新对肺的动物经历了I / R损伤被移除,在液态氮冷冻。解冻和加工、髓过氧物酶活动的组织化验是通过测量使用tetramethylbenzidine OD的变化在450海里。结果表示为中性粒细胞总数通过比较组织上层清液的OD的OD casein-elicited小鼠腹膜中性粒细胞以同样的方式处理。gydF4y2Ba

血红蛋白浓度的测定组织作为一个索引的组织出血。洗后,灌注肠去除多余血液在血管内空间,样本∼100毫克的十二指肠切除和均质Drabkin颜色的试剂根据制造商的指示(Analisa、贝洛奥里藏特、巴西)。暂停15分钟在3000×离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba并使用0.2 -μm过滤器过滤。最终的解决方案是使用一个读ELISA板读者在520纳米,而对血红蛋白的标准曲线。gydF4y2Ba

血清得到从血液凝固(15分钟37°C,然后30分钟4°C)和存储−20°C到进一步分析。血清样本分析在PBS稀释1/3。一百毫克的十二指肠或肺sham-operated和reperfused动物均质1毫升的PBS (0.4 M氯化钠和10毫米NaPO4)包含anti-proteases(苄索氯铵PMSF 0.1毫米,0.1毫米,10毫米EDTA,和20激肽释放酶抑制剂抑肽酶的单位)和0.05%渐变20。样品被离心机在3000×10分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba和上层清液立即被用于ELISA 1/3在PBS稀释。TNF-α的浓度,KC, MIP-2 MCP-1, il - 10测定血清和组织的动物使用商用Abs和根据制造商提供的程序(研发系统)。gydF4y2Ba

结果显示为±SEM手段。抑制百分比被减去背景值计算获得sham-operated动物。差异比较采用方差分析后跟Student-Newman-Keuls posthoc分析。结果与gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05被认为是明显不同的。gydF4y2Ba

评估的可能作用的细菌易位和/或细菌产品作为一种触发或其余reperfusion-associated系统性炎症反应,血液和肝脏被培养和评价有限合伙人的存在。没有检测到cfu或可测量的量的有限合伙人在小鼠血液和肝脏组织缺血再灌注后的SMA(数据没有显示)。gydF4y2Ba

本地(肠),远程(肺),和系统性炎症反应在无菌I / R损伤后的价格相比传统的同行(即。通常,动物暴露在土著微生物群)。见图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,大规模增加血管通透性和中性粒细胞流入肺部和肠道的传统,但不是无菌动物提交给I / R。同样,肠道出血没有发生再灌注损伤后无菌动物,但以传统动物(图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2BaEgydF4y2Ba)。TNF-α的浓度和趋化因子(KC, MIP-2 MCP-1)显著增加后再灌注肠和肺的传统,但不是无菌小鼠(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和表gydF4y2Ba我gydF4y2Ba)。除了组织的变化,常规的小鼠有显著的系统性变化提交到I / R。因此,血清TNF-α浓度明显升高后再灌注在传统老鼠(图。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba),这是与标记和早期reperfusion-associated杀伤力(无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。相比之下,无菌鼠血清中没有检测到大量的TNF-α并没有死亡(图。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba),即使4 h(再灌注(数据没有显示)。而组织炎症和促炎细胞因子/趋化因子生产在无菌鼠明显抑制,增加reperfusion-associated发现il - 10在无菌的肠和肺,但不是传统,老鼠(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

肠道细菌已经检测到7天之后惯例化的无菌(数据没有显示)。然而,没有组织损伤(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)或致命性(无花果。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)在无菌肠I / R后7天后的细菌。相比之下,有重要的肠道炎症14和21天后,作为评估血管通透性,中性粒细胞涌入,肠道出血,和当地的生产TNF-α(无花果。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。也标志着后者动物肺部炎症(数据没有显示)。总的来说,炎症变化更为显著21比14天之后惯例化(无花果。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。除了诱导组织炎症,也有系统性炎症反应微生物群的恢复14和21天后,血清TNF-αreperfusion-induced增加评估的浓度和杀伤力(无花果。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。如上所述,无菌鼠肠I / R后产生大量的il - 10(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。惯例化是伴随着时间抑制il - 10的生产已经最大14天后重新定位(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。总的来说,有一个良好的关系的能力的丧失产生il - 10和点燃的获得能力的再灌注损伤。gydF4y2Ba

传统治疗小鼠大光谱抗生素导致没有检测到细菌在天7日14日和21日开始后的治疗(数据没有显示)。尽管这些动物没有检测到细菌,reperfusion-associated杀伤力是类似于未经处理的小鼠和antibiotic-treated传统在天7日14日和21(数据没有显示)。gydF4y2Ba

下进行了一系列的实验来检查重组小鼠il - 10的外生政府是否能够调节组织和系统损伤和杀伤力,发生再灌注后缺血SMA。il - 10在再灌注系统管理与il - 10的浓度的增加肠道内的免疫反应性和肺reperfused动物(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。组织水平的il - 10在无菌鼠70 - 80%的发现,表明il - 10的选择剂量足以达到组织的影响。在IL-10-treated传统的老鼠,有明显抑制reperfusion-induced增加血管通透性和中性粒细胞在肺和肠涌入以及肠道出血(图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。外源性il - 10也阻碍了增加血清,肠道和肺TNF-α浓度(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。reperfusion-induced增加浓度的趋化因子KC, MIP-2, MCP-1大大减弱了il - 10治疗(表gydF4y2Ba我gydF4y2Ba)。更重要的是,在IL-10-treated杀伤力利率和reperfused传统老鼠显著延迟和∼75%的动物还活着120分钟后再灌注(无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。完全上面的实验表明,il - 10是有效防止组织损伤和致命性由于肠I / R损伤小鼠(无花果。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

il - 10防止组织损伤和杀伤力和无菌鼠il - 10的水平大大提高SMA I / R后,下一个进行了一系列的实验来评估是否内源性il - 10在缺乏组织损伤和杀伤力在无菌鼠。为此,无菌小鼠接受再灌注前anti-IL-10 Abs和组织损伤和致命性。缺血后治疗的无菌鼠anti-IL-10伴随着reperfusion-induced组织损伤的显著增加,所评估的肠道和肺血管通透性显著增加,中性粒细胞涌入,出血(无花果。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。实际上,在无菌鼠组织损伤处理anti-IL-10达到∼70%的伤害中观察到控制传统的老鼠(比较无花果。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。TNF-α在组织和血清的浓度anti-IL-10-treated无菌鼠图所示。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。而未经处理的无菌鼠TNF-α在组织和血清浓度检测I / R损伤,有显著和显著增加TNF-α动物对待anti-IL-10(无花果。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。同样,而无菌鼠并没有死后的I / R损伤,治疗anti-IL-10伴随着重大reperfusion-induced杀伤力,这是类似于在传统老鼠(图。gydF4y2Ba7gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。几乎相同的结果在无菌鼠管理一个anti-IL-10多克隆Ab(数据未显示)。总体而言,我们的研究结果认为,缺乏reperfusion-induced组织炎症在无菌鼠在很大程度上是由于他们天生的能力产生il - 10和顺向IL-10-mediated系统性炎症反应的抑制作用。gydF4y2Ba

无菌鼠的IL-10-dependent无能应对这样一个强有力的炎症刺激,作为缺血再灌注引起的血管,是一个惊人的发现。感兴趣的,因此,研究是否缺乏无菌鼠的炎症反应也适用于其他刺激诱发系统性炎症反应的能力,比如来自微生物。为此,无菌或传统的小白鼠注射ip有限合伙人(10毫克/公斤)和致命性率和细胞因子(TNF-α和il - 10)在不同时间点浓度检查。TNF-α浓度迅速上升(在1.5小时)在传统的老鼠和仍在升高的血清6 h,而只有少量的TNF-α(< 10%的浓度中发现传统的老鼠)检测血清的女朋友后小鼠系统性管理有限合伙人(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。相比之下,il - 10浓度更大、更持久的无菌小鼠比传统的血清(无花果。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。的确,甚至发现了可衡量的il - 10的24小时后注射LPS的无菌(112±8 pg / 100毫克的组织)而不是传统的小鼠(低于检出限的测定)。所有传统的老鼠注射LPS死了注射后12 h,而没有一个LPS-injected无菌或PBS-injected老鼠死后由96 h有限合伙人注入(图。gydF4y2Ba8gydF4y2BaCgydF4y2Ba)。事实上,没有杀伤力甚至10天后有限合伙人注入(数据未显示)。gydF4y2Ba

检查是否对有限合伙人的内源性il - 10的生产治疗无菌鼠也会占这些动物缺乏响应的有限合伙人,实验在anti-IL-10 Ab。类似于我们的发现在I / R损伤模型中,无菌处理anti-IL-10变得非常适应有限合伙人管理和生产大量TNF-α和死于类似的方式传统老鼠(图。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2BaCgydF4y2Ba和gydF4y2BaDgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

居民的刺激腹膜巨噬细胞从无菌或传统与LPS诱导小鼠获得不同的细胞因子的生产(表gydF4y2Ba二世gydF4y2Ba)。没有差别的基底细胞因子的生产。然而,而LPS-stimulated巨噬细胞来源于传统的小鼠产生大量TNF-α和il - 10,从无菌鼠巨噬细胞产生大量的il - 10和小TNF-α(表gydF4y2Ba二世gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

恢复血流的缺血性血管床是治疗的选择,以防止组织细胞在急性缺血性事件的死亡。然而,再灌注本身可以引起局部炎症反应,限制血流恢复的好处。本研究调查的相关性进行肠道菌群的细菌易位和炎症反应和组织损伤后发生肠I / R。gydF4y2Ba

炎症或缺血性损伤小肠可能足够的强度导致破坏肠道上皮衬里和随之失去上皮细胞的屏障功能。这可能发生,例如,在低血容量性休克和促进细菌和/或细菌易位的产品,如有限合伙人,随后激活的巨噬细胞和机体的感染(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba)。而一些调查人员发现中LPS浓度升高的系统性或门户系统的血液再灌注后缺血血管床(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba),其他人,包括目前的研究中,还没有能够发现有限合伙人或相当水平的循环细菌(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba)。这些研究之间的冲突主要是由于不同持续时间的I / R,这样,有限合伙人/细菌更容易检测到经过长时间的再灌注时间。然而,它仍然是有可能的,足够数量的细菌和/或有限合伙人和激活炎症和内皮细胞在肠道粘膜(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)。在这方面,LPS-hyporesponsive影响/ HeJ小鼠的研究表明,组织炎症和E-selectin表达式类似于一个匹配LPS-responsive背景(Ref。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba我们的未发表的结果)。摘要:HeJ老鼠不具备功能TLR4和,因此,不能应对有限合伙人或其他TLR4配体,但仍反应通常在其他配体通常(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。无菌鼠提供另一种方法来调查的可能贡献包含分子模式能够激活肠道细菌通常与TLR4截然不同。下面将更详细地讨论,无菌鼠没有激怒或肠I / R后死亡。然而,当这些动物是管理一个anti-IL-10 Ab再灌注前,组织炎症和杀伤力类似发现在传统的动物。值得注意的是,anti-IL-10再灌注前,,因此,无法修改微生物状态的动物。因此,很明显从目前研究的细菌易位和/或bacterial-derived产品不需要激活炎症的级联事件导致急性组织损伤,系统性炎症,杀伤力再灌注后缺血性肠。gydF4y2Ba

在老鼠中,肠道再灌注是紧随其后的是严重的本地(肠)和远程(肺)组织病理学,特点是中性粒细胞涌入,水肿形成,出血,(这里显示和Ref和组织破坏。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。不仅有组织损伤,但也是系统性炎症、评估的高程的血清浓度促炎细胞因子和趋化因子(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。在这个模型中,TNF-α似乎发挥重要的病理生理作用,证明了政府的保护作用可溶性TNF-α受体在过去或实验gydF4y2Ba^{−−/gydF4y2Ba}老鼠(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。同样,其他研究已经明确的角色TNF-α在调停本地和系统性炎症在几个I / R损伤后血管床(如参考文献。gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba)。相比这些发现和缺乏细菌/细菌易位的产品,无菌鼠呈现几乎没有证据表明局部或全身性损伤后肠I / R。事实上,肠道或肺损伤和促炎细胞因子和趋化因子的浓度在再灌注后无菌鼠都几乎相同的与sham-operated老鼠(没有提交给I / R)。此外,没有杀伤力,即使再灌注240分钟,而传统的老鼠死了90分钟。尽管没有局部或全身性炎症,无菌小鼠主动传感炎症刺激,显著增加reperfusion-induced il - 10为代表的生产。gydF4y2Ba

几项研究已经报道了内源性或外源性il - 10的能力限制I / R损伤二次各种血管床(如参考文献。gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba)。在这些模型中,il - 10的行为通过限制TNF-α生产和嗜中性粒细胞(涌入gydF4y2Ba34gydF4y2Ba)。在我们的模型中,政府的il - 10,剂量导致组织il - 10浓度类似发现在无菌鼠,是有效地减少reperfusion-associated组织损伤和延缓杀伤力。更重要的是,管理anti-IL-10 Abs在缺血再灌注的SMA无菌鼠之后,标志着reperfusion-associated inflammation-roughly 70%的观察传统的老鼠和杀伤力。在我们的实验中,内源性或外源性il - 10的能力防止致命性和组织损伤明显与局部或全身性的浓度TNF-α(参见无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。局势LPS-injected无菌小鼠和传统几乎是相同的。与传统的老鼠,无菌动物产生小TNF-α,没有死亡,产生大量的il - 10在有限合伙人。此外,政府的anti-IL-10无菌鼠增强了LPS-induced TNF-α生产和随后显著增加杀伤力。因此,体内注射il - 10可能模仿,封锁内源性il - 10可能阻止,“no-inflammation”表型的表达在无菌鼠系统性炎症的两个模型。其他抗炎分子的可能性和/或通路是由完全anti-IL-10无力扭转,il - 10模仿完全无菌小鼠的表型。gydF4y2Ba

目前的研究没有任何详细地调查TNF-α的细胞负责生产和/或il - 10。然而,一些研究已经表明巨噬细胞是后者的一个重要来源设置I / R损伤的细胞因子(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba)。评估是否巨噬细胞来源于无菌小鼠和传统不同的能力来应对炎症刺激,居民腹膜巨噬细胞得到两株与LPS刺激。如上所述,无菌注射LPS后没有死在活体内和响应通过产生大量的il - 10。相比之下,LPS-stimulated巨噬细胞来源于无菌鼠产生il - 10作为回应,而从传统TNF-α产生的老鼠。总的来说,后者的结果表明,巨噬细胞的功能可能从根本上传统和无菌鼠之间表明巨噬细胞功能的研究可能提供线索为什么无菌优先产生il - 10。gydF4y2Ba

有趣的是,无菌产生il - 10的先天能力,可能其他分子,是一个主动的过程,防止炎性表型,即。,一个nimals not exposed to an intestinal microbiota have an innate ability to produce molecules with anti-inflammatory properties that suppress the development of an inflammatory response. In contrast, mice that had a normal intestinal microbiota or in which the microbiota had been reinstated were capable of responding to inflammatory stimulation, suggesting that the presence of microorganisms in the gut induce a “state of alert” that is characterized by the loss of the innate ability to produce IL-10 and, possibly, other molecules (e.g., TGF-β). Indeed, colonization of the gastrointestinal tract of germ-free with gut bacteria of conventional mice was capable of preventing the preferential production of IL-10 and restoring inflammatory responsiveness. It was interesting to notice that there is a need for prolonged colonization of the gastrointestinal tract as an effect of conventionalization was only seen after 14 days and was maximal at 21 days. In contrast, even prolonged treatment with large spectrum antibiotics was not capable of modifying the inflammatory responsiveness of conventional mice, even if bacteria could not be detected in feces of treated mice. The test used for bacterial detection is sensitive, suggesting that there was a decrease of the number of bacteria below the number necessary to establish an efficient ecological relation between host and microbiota (usually around 10^7gydF4y2Ba细菌)(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)。目前尚不清楚为什么抗生素治疗无效的扭转炎性反应。可能需要更多的长期治疗逆转无菌鼠的炎症反应,但这是实验难以实现。另外,一旦机体会激怒回应刺激,不会产生IL-10-it可能不可能扭转“没有炎症”表型观察无菌鼠。进一步的研究显然是必要的来解决这个问题。gydF4y2Ba

总之,我们的研究表明,无菌鼠无法点燃,以应对系统性有限合伙人或reperfusion-induced损伤主要是由于这些老鼠产生il - 10的天赋能力,可能其他抗炎分子。无菌鼠的机制先天能力产生il - 10没有调查任何进一步的但是我们的最近的研究表明,il - 10的lipoxin生产构成更大的生产无菌鼠(d . g . Souza和m . m .特谢拉未公开的数据)。然后关上了促炎细胞因子产生的il - 10生产、炎性细胞涌入,导致的组织损伤和杀伤力。分子相互作用的详细了解底层先天il - 10生产是一个基本问题,可能揭开新靶点治疗急性和慢性炎症性疾病。gydF4y2Ba

我们感谢Ricardo Gazzinelli博士博士对他有用的评论和杰奎琳Alvarez-Leite供应传统的老鼠。gydF4y2Ba