文摘gydF4y2Ba
四大环内酯物抗生素的效果(罗克拉霉素、红霉素和阿奇霉素)的生成一些介质和细胞因子参与炎症过程的体内和体外研究。大鼠角叉菜胶胸膜炎作为急性炎症模型,和大环内酯类管理(10、20和40毫克/公斤订单。)前1 h角叉菜胶的挑战。渗出物体积和白细胞积累都是剂量依赖性降低罗克拉霉素和红霉素在正常或肾上腺切除的动物。此外,在正常大鼠前列腺素(PG) EgydF4y2Ba2gydF4y2Ba硝酸盐和亚硝酸盐,肿瘤坏死factor-α水平胸膜渗出物被这些大环内酯类显著降低。罗似乎比红霉素、克拉霉素更有效,而阿奇霉素稍微影响了炎症反应。没有一个大环内酯类可以修改白三烯BgydF4y2Ba4gydF4y2Ba渗出物的水平。体外实验表明,四大环内酯类(5 - 80μM)浓度的方式减少6-keto-PGF的生产gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba,没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba、肿瘤坏死factor-αinterleukin-1β,白细胞介素- 6 lipopolysaccharide-stimulated J774巨噬细胞。6-keto-PGF J774细胞的抑制作用gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba也没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba生产罗红霉素并没有依赖cyclooxygenase-2直接抑制和诱导一氧化氮合酶的活动,因为它似乎是与cyclooxygenase-2的抑制和诱导一氧化氮合酶蛋白表达。总之,目前的研究表明,大环内酯物抗生素具有抗炎活性,这可能取决于他们的能力阻止炎性介质和细胞因子的产生,表明这些制剂,特别是罗,可以起到治疗作用独立于他们的抗菌活性。gydF4y2Ba
大环内酯物抗生素对革兰氏阳性细菌,是活跃的gydF4y2Ba支原体gydF4y2Baspp。gydF4y2Ba军团菌gydF4y2Baspp。gydF4y2Ba衣原体gydF4y2Baspp。,gydF4y2Ba流感嗜血杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Ba巴里et al ., 1987gydF4y2Ba;gydF4y2Ba年轻的et al ., 1989gydF4y2Ba)。除了他们的抗菌活性,这些药物具有广泛的药理作用(gydF4y2BaBryskier et al ., 1994gydF4y2Ba在人类和动物),包括抗炎活动(gydF4y2BaTarayre et al ., 1987gydF4y2Ba;gydF4y2BaMikasa et al ., 1992gydF4y2Ba;gydF4y2Ba再次et al ., 1993gydF4y2Ba)。大环内酯类已经被证明能够影响炎症过程的几个途径,如中性粒细胞迁移、吞噬细胞氧化破裂,促炎细胞因子的生产(gydF4y2BaTakeshita et al ., 1989gydF4y2Ba;gydF4y2Ba手et al ., 1990gydF4y2Ba;gydF4y2BaMikasa et al ., 1992gydF4y2Ba;gydF4y2BaKonno et al ., 1994gydF4y2Ba)。尽管这些影响的确切机制尚不清楚,有人建议,大环内酯类之间的交互和白细胞可能是重要的。事实上,大环内酯物抗生素能够积累到多形核白细胞,到达细胞内浓度远高于那些获得的细胞外液(gydF4y2BaLaufen et al ., 1985gydF4y2Ba;gydF4y2Ba手et al ., 1987gydF4y2Ba)。这种能力可能会改变吞噬细胞的功能,而出现的关键抗菌防御和炎症过程经常与感染有关。一些人认为抗氧化性能,由几个大环内酯类(共享gydF4y2BaLabro et al ., 1989gydF4y2Ba),可能发挥作用在这些制剂的抗炎活动(gydF4y2BaPlewig Schopf, 1976gydF4y2Ba;gydF4y2Ba新西兰et al ., 1987gydF4y2Ba)。总之,尽管迄今为止积累的证据表明,大环内酯类做发挥本地和系统性抗炎作用,这些行动的机制仍不清楚。在这项研究中,我们调查了,体内(大鼠角叉菜胶胸膜炎)和体外(脂多糖(LPS)刺激J774小鼠巨噬细胞),四个大环内酯物抗生素的效果(罗克拉霉素、红霉素和阿奇霉素)的一代一些介质和细胞因子参与炎症过程,如花生四烯酸代谢物、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死factor-α(TNF-α)、白介素(IL) 1β,IL - 6的分泌。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
化学物质。gydF4y2Ba
罗是来自Hoechst-Marion Roussel (Romainville、法国)。红霉素,前列腺素(PG) EgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba白三烯(LT) BgydF4y2Ba4gydF4y2Ba兔抗血清,anti-β-actin鼠抗体从σ(意大利米兰)。克拉霉素和阿奇霉素从商业产品纯化Klacid (Abbott)和Zithromax(辉瑞),分别。有限合伙人是来自gydF4y2Ba沙门氏菌typhosagydF4y2Ba(0901)从Difco购买(底特律,MI)。杜尔贝科的修改鹰的媒介和胎牛血清来源于BioWhittaker(德国海德堡)。羧甲基纤维素和镉粉(325目)从奥尔德里奇(意大利米兰)。脱脂奶粉和硝化纤维膜获得Bio-Rad(意大利米兰)。Anti-cyclooxygenase (COX) 2和anti-inducible没有合酶(间接宾语)小鼠抗体购自转导实验室(肯塔基州的列克星敦)。Anti-mouse免疫球蛋白与过氧化物酶是从Amersham购买(意大利米兰)。TNF-α和IL-1β酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒获得Genzyme(意大利米兰)。il - 6 ELISA试剂盒获得从单子叶植物(沃本,MA)。所有其他化合物从σ。gydF4y2Ba
动物。gydF4y2Ba
雄性Wistar鼠(哈伦,意大利)重240 - 260克被用于这项研究。动物被安置在丙烯的笼子里随意提供食物和水。光周期自动控制(上午7点和晚上7点),和房间温度恒温调节的22±1°C。在实验之前,动物被安置在这些条件3到4天变得那么费劲儿。一些大鼠肾上腺切除或sham-operated乙醚麻醉和手术后3到4天。肾上腺切除动物收到直到使用等渗盐水作为饮用水。动物保健是按照意大利和欧洲法规保护动物用于实验和其他科学。gydF4y2Ba
Carrageenin-Induced胸膜炎。gydF4y2Ba
老鼠略与乙醚麻醉,和0.2毫升的1%λ-carrageenin,悬浮在无菌生理盐水,注入了胸膜腔。罗克拉霉素、红霉素和阿奇霉素,悬浮在橄榄油,通过胃强饲法管理范围(0.5毫升/鼠)10、20和40毫克/公斤1 h之前注射角叉菜胶。在一些实验中,大环内酯类注射肾上腺切除大鼠。对照组收到同等体积的车辆。角叉菜胶胸膜炎也引起一些老鼠用消炎痛治疗(5毫克/公斤)溶解在羧甲基纤维素和管理订单,前1 h phlogogenic代理。胸膜炎的感应,4小时后动物牺牲的氛围中有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。胸膜渗出物从每个动物被洗胸膜腔收获2毫升无菌生理盐水含5 U /毫升肝素和吲哚美辛10μg /毫升。渗出液与血液污染被否决。渗出物量测量,样本离心机,享年800岁gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟,细胞颗粒resuspended盐水和微分细胞总数。台盼蓝染色后细胞总数估计使用的伯克计数室。在一些实验中,微分细胞计数是由May-Grunwald染色染色。上层清液被整除,储存在−80°C到使用。gydF4y2Ba
细胞培养。gydF4y2Ba
小鼠单核细胞/巨噬细胞细胞系J774来自欧洲的动物细胞培养(英国索尔兹伯里)。J774细胞生长在杜尔贝科的修改鹰的媒介和培养在湿润的37°C公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba空气/ 95%。培养基与10%胎牛血清,补充2毫米gydF4y2BalgydF4y2Ba消息灵通的谷氨酰胺,25毫米,100 U /毫升青霉素,链霉素100μg /毫升、丙酮酸钠和5毫米在37°C。这些细胞被镀上24-well文化板块(猎鹰,Meylan法国)密度为2.5×10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba/毫升,可以坚持2 h。此后,媒介换成新鲜培养基,细胞被激活1μg /毫升LPS存在与否的不同浓度的抗生素(5 - 80μM)。吲哚美辛(1μM)gydF4y2BaNgydF4y2BaGgydF4y2Ba单甲-gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸(gydF4y2BalgydF4y2Ba-NMMA;30μM)被用作参考药物。在一些实验中,罗红霉素和添加到细胞后12 h有限合伙人。在不同的时间点(3、8、24 h),根据代谢物或细胞因子来衡量,培养基被和离心机,上层的整除,储存在−80°C到使用。细胞生存能力(> 95%)确定了3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyl溴化四唑试验(gydF4y2BaDenizot朗,1986gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
没有gydF4y2Ba3gydF4y2Ba−gydF4y2Ba+没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba(没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba)分析。gydF4y2Ba
的数量没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba,代谢物不稳定,出现在上层清液炎性渗出物的决心根据gydF4y2BaThomsen et al。(1991)gydF4y2Ba。后减少硝酸盐(NOgydF4y2Ba3gydF4y2Ba−gydF4y2Ba亚硝酸盐(NO)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba)使用酸洗镉粉,没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba根据微型板块含量测定分析方法的基础上,格里斯反应,结果表示为微克每鼠。亚硝酸盐含量从J774巨噬细胞培养基测定后24 h有限合伙人(1μg /毫升)刺激格里斯反应(如前所述)(gydF4y2BaDi罗莎et al ., 1990gydF4y2Ba)。结果表示为μg /毫升和代表均值±S.E.gydF4y2BangydF4y2Ba实验进行了一式三份。gydF4y2Ba
未及的铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,6-Keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba,LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba离心机的上层清液渗出物(800gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟)被放射免疫检定法根据化验程序所描述的gydF4y2BaGranstrom和Kindhal (1978)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba三文鱼et al。(1982)gydF4y2Ba,分别。结果表示为毫微克每鼠和代表均值±S.E.gydF4y2BangydF4y2Ba老鼠。铂族元素的大gydF4y2Ba2gydF4y2Ba兔抗血清PGF是3.4%gydF4y2Ba2αgydF4y2Ba2.1%,PGDgydF4y2Ba2gydF4y2Ba为PGA, 2.0%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。大的LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba兔抗血清为LTA < 0.1%gydF4y2Ba4gydF4y2BaLTC, < 0.1%gydF4y2Ba4gydF4y2Ba有限公司,< 0.1%gydF4y2Ba4gydF4y2BaLTE, < 0.1%gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。6-keto-PGF的积累gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba在细胞培养基测定,没有提取或纯化之前,通过放射免疫检定法(gydF4y2BaMaclouf 1982gydF4y2Ba)。的anti-6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba兔抗体显示大11%的铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba10%,PGFgydF4y2Ba2αgydF4y2Ba3%,PGDgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,< 0.5%为凝血恶烷BgydF4y2Ba2gydF4y2Ba。结果表示为pg / ml 6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba并代表均值±S.E.gydF4y2BangydF4y2Ba实验进行了一式三份。gydF4y2Ba
细胞因子的测定。gydF4y2Ba
TNF-α离心机的上层清液渗出物(800水平gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟)与酶联免疫试剂盒测定根据制造商的指示,结果表示为毫微克每只老鼠。TNF-α、IL-1β和il - 6水平细胞培养基是化验使用商用小鼠细胞因子ELISA检测组件根据制造商的指示,结果表示为ng / ml和代表均值±S.E.gydF4y2BangydF4y2Ba实验进行了一式三份。gydF4y2Ba
制备胞质分数。gydF4y2Ba
如果提取或LPS-stimulated(24小时1μg /毫升)J774巨噬细胞在缺乏或存在80μM罗或红霉素准备如前所述(gydF4y2Ba施赖伯et al ., 1989gydF4y2Ba)。简单地说,收获细胞(2×10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)洗两次冰冷的PBS和离心机,享年180岁gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟在4°C。的细胞颗粒在100年resuspendedμl冰冷的低渗的裂解缓冲MgCl(玫瑰10毫米,1.5毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba氯化钾,10毫米,0.5毫米phenylmethylsulfonyl氟化物,1.5μg /毫升大豆胰蛋白酶抑制剂、7μg /毫升抑肽素,5μg / ml亮抑酶肽,苯甲脒0.1毫米,0.5毫米在冰二硫苏糖醇)和孵化了15分钟。细胞细胞溶解了五六个快速通道通过20量度针;细胞质分数在13000年通过离心分离gydF4y2BaggydF4y2Ba1分钟;和上层的整除,储存在−80°C。gydF4y2Ba
免疫印迹分析。gydF4y2Ba
免疫印迹分析cox - 2,进气阀打开,β-actin蛋白质进行胞质分数。胞质部分蛋白质混合凝胶在装货缓冲区(50毫米三,10% SDS、10%甘油、10% 2-mercaptoethanol,溴苯酚和2毫克(mlgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在1:1的比例),煮3分钟,和离心机,享年10000岁gydF4y2BaggydF4y2Ba蛋白质含量为10分钟。决心按照制造商的指示(Bio-Rad)和等量的蛋白质从每个样本(75μg)在8%的不连续聚丙烯酰胺电泳minigel。蛋白质转移到硝化纤维膜,根据制造商的指示。细胞膜在4°C在一夜之间被孵化饱和10%脱脂奶粉在PBS然后孵化anti-COX-2(摘要),anti-iNOS(1:10,000),或anti-β-actin(1:1000)小鼠抗体在室温下2 h。1%的膜清洗三次Triton x - 100在PBS然后孵化anti-mouse免疫球蛋白与过氧化物酶(1:20 00)。增强化学发光免疫复合物是可视化的方法(Amersham)。gydF4y2Ba
统计分析。gydF4y2Ba
值表示为均值±S.E.gydF4y2BangydF4y2Ba和动物体内实验gydF4y2BangydF4y2Ba在体外实验中实验运行一式三份。比较被单向方差分析和Bonferroni-corrected计算gydF4y2BaPgydF4y2Ba值为多个比较。统计上的显著差异定义为水平gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
角叉菜胶胸膜炎gydF4y2Ba
渗出物体积和细胞迁移。gydF4y2Ba
注入0.2毫升1%λ-carrageenin进入胸膜腔炎症反应引起的大鼠表现为渗出物形成和细胞迁移(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。控制动物(角叉菜胶),平均体积的渗出物4 h为0.70±0.03 ml /鼠(gydF4y2BangydF4y2Ba= 35),总白细胞(中性粒细胞> 95%)数迁移到胸膜腔为126.6±5.6×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba/大鼠(gydF4y2BangydF4y2Ba= 35)。治疗大鼠获得了大环内酯类在10 20或40毫克/公斤订单。注射角叉菜胶前1 h。抗生素治疗无效时在10毫克/公斤,而炎症反应是抑制高剂量使用时。罗在20和40毫克/公斤剂量依赖性和渗出物体积显著降低了36% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和50% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 7),分别,而细胞迁移到胸膜腔的总数下降了20% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和30% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 7),分别。只有当在40毫克/公斤,克拉霉素和红霉素明显渗出物的体积减少了43% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和50% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8),分别和迁移的白细胞数量降低了30% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和32% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba分别为= 8)(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。阿奇霉素(10-40毫克/公斤)没有对渗出物体积的影响,而它显著地抑制了19% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)白细胞的数量只在40毫克/公斤。吲哚美辛(5毫克/公斤订单。)渗出物的体积减少了67% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和白细胞数量的31% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8;表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
在肾上腺切除的动物,角叉菜胶引起的炎症反应,与控制老鼠相比,极大地促进了渗出物体积(2.25±0.10毫升/老鼠;gydF4y2BaPgydF4y2Ba<。gydF4y2BangydF4y2Ba= 12)和白细胞迁移的总数(342.5±23.2×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞/老鼠;gydF4y2BaPgydF4y2Ba<。gydF4y2BangydF4y2Ba= 12),而在sham-operated动物(0.74±0.04毫升的渗出物和123.4±6.3×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),观察正常大鼠重合。罗在20和40毫克/公斤剂量依赖性渗出物的体积减少了38%(1.25±0.09毫升,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)和49%(1.00±0.11毫升,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别和迁移的白细胞总数的22% (229.3±11.5×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)和35% (222.5±3.1 x10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别。克拉霉素和红霉素40毫克/公斤明显渗出物的体积减少了45%(1.11±0.04毫升,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)和48%(1.05±0.02毫升,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别和白细胞迁移的数量29% (208.5±5.3×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)和31% (203.3±3.5×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞,gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别。阿奇霉素(40毫克/公斤)没有影响渗出物体积(2.31±0.10毫升),而它显著地抑制白细胞数量21% (233.4±7.5×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞,gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)。gydF4y2Ba
没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba,铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
控制老鼠的胸膜渗出物中检测到大量的没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba(1.51±0.06μg /鼠,gydF4y2BangydF4y2Ba= 35),铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba(0.428±0.01 ng /鼠,gydF4y2BangydF4y2Ba= 35),LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba(2.5±0.15 ng /鼠,gydF4y2BangydF4y2Ba= 35)。的数量都没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba和铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba几乎不受影响是大环内酯类在10毫克/公斤,而他们减少大剂量使用时(表吗gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。罗在20和40毫克/公斤导致剂量依赖性抑制gydF4y2BaxgydF4y2Ba降低了34% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和50% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 7),分别,而铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba下降了21% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和41% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 7),分别。克拉霉素和红霉素在20和40毫克/公斤没有减少gydF4y2BaxgydF4y2Ba22% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和42% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和30% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和44% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)分别,而铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba显著降低了23% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和43% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和39% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和53% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba分别= 8)。阿奇霉素20毫克/公斤并没有修改gydF4y2BaxgydF4y2Ba或铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,而在40毫克/公斤,它不显著降低gydF4y2BaxgydF4y2Ba30% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba26% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)。gydF4y2Ba
在这项研究中使用的所有大环内酯物抗生素对LTB的数量没有影响gydF4y2Ba4gydF4y2Ba在胸膜渗出。吲哚美辛(5毫克/公斤订单。)没有减少gydF4y2BaxgydF4y2Ba和铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba35% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和87% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)分别,而它没有修改LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba生产。gydF4y2Ba
TNF-α。gydF4y2Ba
控制动物的胸膜渗出物中含有2.14 ng TNF-α/鼠(gydF4y2BangydF4y2Ba= 35;表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。TNF-α未受影响的数量大环内酯类在10毫克/公斤,而他们减少大剂量使用时。罗在20和40毫克/公斤TNF-α导致剂量依赖性抑制作用,降低了38% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和47% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 7),分别。克拉霉素和红霉素在20和40毫克/公斤抑制TNF-α生产28% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和47% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)和29% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)和52% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba分别= 8)。阿奇霉素显著抑制TNF-α生产36% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 8)只有在最高剂量使用(40毫克/公斤)。gydF4y2Ba
J774小鼠巨噬细胞gydF4y2Ba
在初步实验中,我们证实细胞生存能力(> 95%)是不受任何影响的四个大环内酯类(80μM), 1μM消炎痛,或30μMgydF4y2Bal -gydF4y2BaNMMA(数据没有显示)。gydF4y2Ba
TNF-α。gydF4y2Ba
生产的TNF-α如果J774细胞< 15 pg / ml (gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)。培养这些细胞的有限合伙人(1μg /毫升)3 h导致TNF-α大幅增加生产(958±20 pg / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)。当J774巨噬细胞被刺激与相同数量的有限合伙人的大环内酯物抗生素μM(5 - 80),一个浓度抑制TNF-α生产观察(图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。罗,这是无效的在5和10μM, 20岁,40岁,和80年μM抑制TNF-α生产18、25和45%,分别为(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 3 - 6)。克拉霉素、红霉素和阿奇霉素20μM是无效的,而在40和80μM,他们抑制TNF-α生产19和35% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 3 - 6),13% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)和22% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 3),17岁和26% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba分别= 3 - 6)。gydF4y2Ba
il - 6的分泌。gydF4y2Ba
治疗J774巨噬细胞与LPS 8 h大大增加il - 6的生产(361±13 pg / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)相比,如果细胞的释放(< 15 pg / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)。所有的大环内酯类在5和10μM无效(无花果。gydF4y2Ba1gydF4y2BaB)。罗在20、40、80μM显著抑制il - 6生产21日30日和49% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6),分别。克拉霉素和阿奇霉素在20、40、80μM抑制il - 6生产16日22岁和29% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)和20,29岁,44% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6),分别。红霉素在20μM无效,而显著抑制il - 6生产40和80μM 25和31% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6),分别。gydF4y2Ba
IL-1β。gydF4y2Ba
J774巨噬细胞的刺激与LPS 24 h释放的增加引起IL-1β(247±16 pg / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)相比,如果细胞的释放(< 15 pg / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)。当J774与LPS刺激的大环内酯类(5 - 80μM),观察concentration-related抑制IL-1β生产(无花果。gydF4y2Ba1gydF4y2BaC)。在5和10μM,抗生素都是无效的。罗在20、40、80μM显著抑制IL-1β代22% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6),34%,45% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)分别。克拉霉素、红霉素和阿奇霉素20μM是无效的,而在40和80μM,显著降低IL-1β水平26和37% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6),18% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)和24% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)、26和35% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6),分别。gydF4y2Ba
6-Keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba生产和cox - 2的表达。gydF4y2Ba
在24小时,如果J774 30±1 pg / ml 6-keto-PGF巨噬细胞生成gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba(gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)。刺激的细胞与细菌有限合伙人产生了显著(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施)的生产增加前列腺素类(350±10 pg / ml,gydF4y2BangydF4y2Ba= 6)。当细胞被刺激的大环内酯类(5 - 80μM), 6-keto-PGF浓度抑制gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba代观察(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在5μM)。所有的抗生素都是无效的。罗(10 - 80μM)显著抑制6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba一代14% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)、20% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4),37%和47% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)分别。克拉霉素和阿奇霉素(10 - 80μM)表现出类似的模式的行动,因为它们显著地抑制6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba一代13% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)、15% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 3),23岁和38% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)和22% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)、34%、40%和45% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba分别= 3 - 5)。红霉素是无效的20μM,而抑制6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba一代40和80μM 15% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)和34% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别。吲哚美辛(1μM)抑制6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba生产了85% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4;数据未显示)。有趣的是,当80年μM罗红霉素或添加到孵化中有限合伙人12 h后,对6-keto-PGF没有影响gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba一代(图。gydF4y2Ba2gydF4y2BaB)。此外,与LPS刺激的细胞导致增加cox - 2蛋白表达。作为免疫印迹实验证明,大大减少了LPS-induced cox - 2蛋白表达coincubation和罗红霉素(80μM)只有当抗生素管理与有限合伙人的挑战,而这是影响当大环内酯类管理12 h后(见图。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba一个)。gydF4y2Ba
没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba生产和伊诺表达式。gydF4y2Ba
没有生产的gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba,如果J774细胞无法检测(< 50 ng / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)。孵化的细胞与LPS引起的大量释放gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba(989±83 ng / ml;gydF4y2BangydF4y2Ba= 9)。当J774与LPS刺激的大环内酯类(5 - 80μM),没有concentration-related抑制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba代观察(图。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba在5和10μM)。所有抗生素都是无效的。罗在20、40、80μM显著抑制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba释放24% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4),36%和58% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4),分别。克拉霉素和阿奇霉素(20 - 80μM)抑制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba一代15% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)、24% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)和39% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)和25% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 3),37%和50% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别。只在40和80μM抑制没有红霉素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba一代17% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 05,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)和27% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施,gydF4y2BangydF4y2Ba= 5),分别。gydF4y2Bal -gydF4y2BaNMMA(30μM)显著地抑制gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba一代49% (gydF4y2BaPgydF4y2Ba< . 01,gydF4y2BangydF4y2Ba= 4;数据未显示)。80年除了μM罗或红霉素后细胞12 h有限合伙人的挑战并没有显着影响的gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba生产(图。gydF4y2Ba3gydF4y2BaB),刺激细胞的有限合伙人导致增加伊诺蛋白表达,免疫印迹实验(图。gydF4y2Ba4gydF4y2BaB)。LPS-induced伊诺蛋白表达被coincubation预防和罗红霉素(80μM)只有当这些大环内酯类管理与有限合伙人,而当管理12 h后他们没有影响。gydF4y2Ba
β-Actin表达式。gydF4y2Ba
的一个主要的表达细胞骨架灯丝,β-actin,被西方墨点法,进行对比分析。如果或LPS-stimulated J774细胞,这种蛋白质的表达保持不变。此外,β-actin表达不受coincubation和罗红霉素(80μM)管理与此同时或12 h后,有限合伙人的挑战。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
在这项研究中,四个大环内酯物的抗炎活性抗生素、罗红霉素、阿奇霉素、克拉霉素,和他们的能力,减少炎性介质和细胞因子的生产研究体内和体外。大鼠角叉菜胶胸膜炎被用作模型的急性炎症,炎症反应是导致在正常或肾上腺切除的动物。前的大环内酯类管理订单。1 h角叉菜胶的挑战。罗、克拉霉素和红霉素(10、20和40毫克/公斤)剂量依赖性减少渗出物体积和白细胞在正常大鼠积累。大鼠角叉菜胶胸膜炎是由内源性类固醇,因为在肾上腺切除老鼠,炎症反应是发生在正常或价格相比更大sham-operated动物。的剂量罗(20和40毫克/公斤)、克拉霉素(40毫克/公斤),和红霉素(40毫克/公斤),大大减少渗出物体积和白细胞在正常大鼠,积累在肾上腺切除大鼠表现出同样的抑制效果,表明抗炎活性的大环内酯类不依赖于内源性皮质激素的刺激生产。此外,在正常大鼠,铂族元素的含量gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba,TNF-α胸膜渗出液明显减少了这些大环内酯类。罗似乎比红霉素、克拉霉素更有效,而阿奇霉素稍微影响了炎症反应。没有一个大环内酯类可以修改LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba生产,这表明非特异性炎症介质的影响可以被排除。大环内酯物抗生素的抗炎活性的机理尚不清楚。虽然已经表明,大环内酯类展览membrane-stabilizing效应在人类中性粒细胞和抑制超氧化物阴离子生成通过这些细胞刺激formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine或钙离子载体A23187,应该进行进一步的研究来阐明这些抗生素是否能够影响一些早期的事件(例如,形状修改,钙动员、细胞内的pH值变化)发生在白细胞激活。然而,抑制前列腺素类路径可能贡献,至少在某种程度上,大环内酯类的抗炎效果,虽然它已经表明这些药物抑制炎症通过不同机制与传统的非甾体类抗炎药物(gydF4y2BaTarayre et al ., 1987gydF4y2Ba;gydF4y2Ba再次et al ., 1993gydF4y2Ba)。其中一个可能的抑制机制gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸:没有通路,减少没有如图所示gydF4y2BaxgydF4y2Ba、稳定代谢物的胸膜渗出物。没有参与几种类型的急性和慢性炎症(gydF4y2BaIalenti et al ., 1992gydF4y2Ba,gydF4y2Ba1993年gydF4y2Ba),包括大鼠角叉菜胶胸膜炎(gydF4y2BaSautebin et al ., 1998gydF4y2Ba)和小鼠zymosan-induced腹膜炎(gydF4y2BaAjuebor et al ., 1998gydF4y2Ba),有趣的是,抑制了红霉素(gydF4y2BaMikasa et al ., 1992gydF4y2Ba)。TNF-α减少大鼠胸膜渗出物与先前的报道显示,在协议的系统性管理的大环内酯类动物和人类下调促炎细胞因子的生产,包括TNF-α和IL-1β(gydF4y2BaKonno et al ., 1994gydF4y2Ba;gydF4y2BaKadota et al ., 1996gydF4y2Ba)。我们的体外实验表明,四大环内酯类(5 - 80μM)浓度的方式降低生产TNF-α,IL-1β,il - 6, 6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba,没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba生产LPS-stimulated J774巨噬细胞。这些数据与体内实验的结果一致,进一步支持的能力,大环内酯类抑制炎症介质和细胞因子的生产。大环内酯类的抑制效应等促炎细胞因子的生产TNF-α,il - 6, IL-1β已被广泛研究了体外。罗已表现出抑制生产IL-1β和TNF-α剂量依赖性的方式在人类外周血单核细胞(gydF4y2BaYoshimura et al ., 1995gydF4y2Ba)。克拉霉素生产细胞因子有抑制作用(il - 6和IL-1β)滑膜纤维母细胞(gydF4y2Ba松岗et al ., 1996gydF4y2Ba)和红霉素抑制TNF-α释放由人类单核细胞与LPS刺激(gydF4y2BaIino et al ., 1992gydF4y2Ba)。因为在大鼠角叉菜胶胸膜炎和LPS-stimulated J774巨噬细胞的诱导亚型表达cox - 2和伊诺(gydF4y2BaTomlison et al ., 1994gydF4y2Ba;gydF4y2Ba途中et al ., 1995gydF4y2Ba;gydF4y2BaD 'Acquisto et al ., 1997gydF4y2Ba,gydF4y2Ba1998年gydF4y2Ba),减少前列腺素类的可能性和代谢物水平不可能依靠大环内酯类的能力来防止cox - 2的表达和伊诺被调查。我们已经表明,在J774细胞,6-keto-PGF的抑制gydF4y2Ba1αgydF4y2Ba也没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba生产和罗红霉素不依赖直接抑制cox - 2和伊诺活动因为大环内酯类,当添加到细胞12 h有限合伙人的挑战后,不影响酶的催化活性。此外,减少6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba也没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba−gydF4y2Ba相关生产似乎抑制cox - 2和伊诺被这些大环内酯类蛋白表达。因此,这两种抗生素,当添加到细胞与有限合伙人,大大降低cox - 2的水平和伊诺蛋白表达,而他们并不影响β-actin的表达,一个主要的细胞骨架纤维(即。蛋白质与炎症无关)。这是第一个演示中,据我们所知,罗红霉素抑制酶的表达参与炎症。这个属性,这可能是共享的其他大环内酯类,代表一个相关机制这些抗生素的抗炎效果。众所周知,一些基因的表达在免疫和炎症反应(例如,进气阀打开,cox - 2, TNF-α,il - 1、il - 6)在转录水平的调节核factor-κB (NF-κB) (gydF4y2Ba穆勒et al ., 1993gydF4y2Ba;gydF4y2Ba谢et al ., 1994gydF4y2Ba;gydF4y2Ba山本et al ., 1995gydF4y2Ba)。它最近表明抗氧化剂pyrrolidinedithiocarbamate能够降低cox - 2表达和前列腺素生产LPS-stimulated J774巨噬细胞,暗示感应的NF-κB参与cox - 2 (gydF4y2BaD 'Acquisto et al ., 1997gydF4y2Ba)。我们最近发现,在鼠carrageenin-induced胸膜炎NF-κB被激活,它的激活是由抗氧化剂抑制代理,导致减少炎症反应(gydF4y2BaD 'Acquisto et al ., 1999gydF4y2Ba)。红霉素罗表现出抗氧化性能(gydF4y2BaMiyachi et al ., 1986gydF4y2Ba;gydF4y2BaLabro et al ., 1989gydF4y2Ba;gydF4y2Ba手et al ., 1990gydF4y2Ba);因此,可想而知,这些,也许其他大环内酯类,可以作为抗炎剂通过防止NF-κB的激活。虽然这个假设需要进一步的实验工作,支持似乎特别感兴趣的最新发现表明不稳定性心绞痛患者接受罗显示显著减少重大缺血性事件与安慰剂组相比gydF4y2BaGurfinkel et al ., 1997gydF4y2Ba)。因为有血清学证据之间的关联gydF4y2Ba衣原体肺炎gydF4y2Ba和冠心病,罗的有益作用可能与其antichlamydial相关活动。然而,由于其抗炎活性,罗可能会减弱通过减少动脉粥样硬化斑块的炎症的持续释放促炎介质和细胞因子通过NF-κB激活的抑制作用,这已被证明发挥相关作用在动脉粥样硬化病变的发病机理(gydF4y2Ba林德纳和柯林斯,1996gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
总之,目前的研究表明,大环内酯物抗生素具有抗炎活性,这可能取决于他们的能力阻止炎性介质和细胞因子的产生,表明这些制剂,特别是罗,可以起到治疗作用独立于他们的抗菌活性。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
再版请求发送到:gydF4y2Ba马西莫·迪教授罗莎,实验药理学、那不勒斯大学“费德里科•二世”,通过d·蒙特沙诺49岁,80131年,意大利那不勒斯。电子邮件:gydF4y2Badirosa在{}unina.itgydF4y2Ba
- 缩写:gydF4y2Ba
- 有限合伙人gydF4y2Ba
- 脂多糖gydF4y2Ba
- LTBgydF4y2Ba4gydF4y2Ba
- 白三烯BgydF4y2Ba4gydF4y2Ba
- 铂族元素gydF4y2Ba2gydF4y2Ba
- 前列腺素EgydF4y2Ba2gydF4y2Ba
- ELISAgydF4y2Ba
- 酶联免疫吸附试验gydF4y2Ba
- 6-keto-PGFgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba
- 6-keto-prostaglandin FgydF4y2Ba1αgydF4y2Ba
- cox - 2gydF4y2Ba
- cyclooxygenase-2gydF4y2Ba
- 没有gydF4y2Ba
- 一氧化氮gydF4y2Ba
- 伊诺gydF4y2Ba
- 诱导一氧化氮合酶gydF4y2Ba
- IL-1βgydF4y2Ba
- interleukin-1βgydF4y2Ba
- il - 6gydF4y2Ba
- 白细胞介素- 6gydF4y2Ba
- NF-κBgydF4y2Ba
- 核factor-κBgydF4y2Ba
- TNF-αgydF4y2Ba
- 肿瘤坏死factor-αgydF4y2Ba
- 没有gydF4y2Ba3gydF4y2Ba −gydF4y2Ba
- 硝酸gydF4y2Ba
- 没有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba −gydF4y2Ba
- 亚硝酸盐gydF4y2Ba
- 没有gydF4y2BaxgydF4y2Ba
- 硝酸盐和亚硝酸盐gydF4y2Ba
- lgydF4y2Ba-NMMAgydF4y2Ba
- NgydF4y2BaGgydF4y2Ba单甲-gydF4y2BalgydF4y2Ba精氨酸gydF4y2Ba
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- 收到了gydF4y2Ba1999年5月10日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba1999年9月6日。gydF4y2Ba
- 美国社会的药理学和实验性疗法gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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