文摘gydF4y2Ba
肿瘤坏死因子(TNF)检测已知αnoncaseating肉芽肿的形成中扮演了重要的角色,结节病的一个特点。主要的细胞来源gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba仍然是模棱两可的。gydF4y2Ba
串行的部分transbronchial活检患者从14和12没有结节病进行了研究,用免疫组织化学(包含IHC)、肿瘤坏死因子α应承担的,T细胞(CD3)应承担的巨噬细胞(CD68)和上皮细胞(MNF116)。肿瘤坏死因子α应承担的自发(sr-TNFα应承担)发布的新孤立支气管肺泡灌洗细胞,分离出相同的病人和培养没有任何刺激一个24 h段使用酶联免疫吸附试验测定。gydF4y2Ba
包含IHC显示colocalisation的肿瘤坏死因子α与CD68细胞。例肿瘤坏死因子α组织应承担的免疫反应性表现出更高的sr-TNF量α(1667±504 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)比情况下没有组织免疫反应性(211±60 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)。一亚组病人在一个探究的方法,可以发现和识别出肺泡巨噬细胞聚集的存在。发现sr-TNF量α是最高的在这群(2700±769 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)患者与正常组织学(221±61 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)或突出的肉芽肿(460±137 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),而在大多数临床参数这群中间。gydF4y2Ba
来自本研究的发现强烈证实认为肺泡巨噬细胞是主要的细胞来源的肿瘤坏死因子α在结节病的初始阶段。作者建议,在这些患者中,骨料的肺泡巨噬细胞可能代表至少前辈肉芽肿如果不是肉芽肿gydF4y2Ba在种gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
这项工作是支持的资助德意志Forschungsgemeinshaft (DFG Mu692/5还是6)和Bundesministerium毛皮陶冶和大幅减退(BMBF 01 zz5904)。gydF4y2Ba
Sarcoidosisis,系统性原因不明的肉芽肿性疾病,特点是其病理特点,noncaseating肉芽肿gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。因为胸肺和淋巴结几乎总是参与,大多数病人报告急性或阴险的呼吸问题。肉芽肿形成的特点是积累,核扩散和自发活动的巨噬细胞和T淋巴细胞炎症的网站。一旦单核炎症细胞积聚在肺部,巨噬细胞聚集并分化成类上皮和多核巨细胞。CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞分布在这些炎症细胞和CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和CD8gydF4y2Ba+gydF4y2Ba与一个小的贡献从B淋巴细胞,淋巴细胞,形成肉芽肿周围的边缘。gydF4y2Ba
介质中发布的支气管肺泡灌洗(BAL)细胞,肿瘤坏死因子(TNF)量α被认为发挥重要作用在肉芽肿的招聘和维护gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。一般来说,免疫细胞,gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba肺泡巨噬细胞,肺肿瘤坏死因子α应承担的主要来源gydF4y2Ba7gydF4y2Ba。自发释放肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba8gydF4y2Ba白介素(IL) 1gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,和IL 2gydF4y2Ba10gydF4y2Ba通过激活巨噬细胞和T细胞免疫肉芽肿的形成被认为是至关重要的。激活T细胞也可能导致应承担的促炎细胞因子的释放肿瘤坏死因子α成球流体gydF4y2Ba11gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。此外,肺上皮细胞,它们能够作为辅助细胞在T细胞活化,应承担的肺和免疫调节细胞gydF4y2Ba14gydF4y2Ba在一定条件下也可能释放肿瘤坏死因子α应承担的吗gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。此外,地理生物活性的肿瘤坏死因子α是另外规定的释放可溶性肿瘤坏死因子受体gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。大部分取得了这些数据从孤立的细胞或BAL细胞和流体分析。然而,这种情况所知甚少gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
因此,在这种探索性研究,作者研究了细胞类型可能被视为主要的细胞来源gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba肿瘤坏死因子α应承担的释放在患者的肺肺结节病。作者首先测量肿瘤坏死因子α应承担的自发的水平(sr检测肿瘤坏死因子α应承担)发布的新孤立BAL细胞结节病gydF4y2Ba与gydF4y2Banonsarcoidosis病人通过酶联immunoabsorbent试验(ELISA)在一项研究中描述gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。水平sr-TNF量α然后与肿瘤坏死因子α应承担的存在免疫反应性的细胞transbronchial活检相同的主题。在后面的阶段,串行部分通过免疫组织化学方法分析这些transbronchial活检(包含IHC) colocalisation肿瘤坏死因子α与标记的巨噬细胞(CD68), T细胞(CD3)应承担和上皮细胞(细胞角蛋白:MNF116),分别揭示细胞类型可能是肿瘤坏死因子α应承担的主要细胞来源gydF4y2Ba原位gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
材料和方法gydF4y2Ba
研究设计gydF4y2Ba
刚从14个患者和12例孤立BAL细胞没有结节病是培养没有任何刺激的24 h。水平sr-TNFα应承担的上层清液由ELISA测定gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。串行的部分transbronchial活检获得来自同一病人在诊断支气管镜检查分析,标准包含IHC肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。与包含IHC染色模式相关模式标记T细胞(CD3)应承担的巨噬细胞(CD68)和上皮细胞(细胞角蛋白:MNF116)。IHC协会模式的水平sr-TNF量α测试的意义。gydF4y2Ba
病人的特点gydF4y2Ba
肺结节病的诊断成立于14个人使用定义的标准,包括transbronchial活检gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。本研究的目的,患者分组为“临床积极结节病”或“临床不活跃的结节病”。临床标准使用新的或进展肺部症状gydF4y2Ba如。gydF4y2Ba咳嗽和呼吸困难,新发展或进步影像学异常,和/或系统性症状根据最近推荐的世界结节病和其他协会的肉芽肿性疾病gydF4y2Ba22gydF4y2Ba。对照组由12名患者进行诊断支气管镜检查的临床检查和回顾性发现没有任何炎症或恶性肺部疾病。只有患者被证明是免费的任何疾病,可能混淆免疫测试,进入对照组。功能、血清学和BAL参数评估如前所述gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。落下帷幕的过程中执行一个临床显示支气管镜检查诊断或炎症活动的重新评估。所有的患者接受抗炎或类固醇治疗的时候落下帷幕。表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba显示结节病的特点和人口统计学描述患者和对照组患者。gydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗和细胞培养gydF4y2Ba
落下帷幕进行支气管镜检查,如前所述gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。一卷200 - 300毫升无菌生理盐水(0.9%氯化钠)被灌输进海豆芽或中叶段25毫升整除。每个整除立即吸气。复苏(平均±sem) 68.9±9.9% nonsarcoidosis组gydF4y2Ba与gydF4y2Ba61.9±11.2% (ns)在结节病组。gydF4y2Ba
后立即落下帷幕,细胞在500×离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba与磷酸缓冲盐水洗了三次(PBS)在4°C。新孤立BAL免疫细胞培养,没有任何刺激,密度为10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞··毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba一段时间的24小时endotoxin-free罗斯威尔公园纪念医院(RPMI) 1640中(Seromed,柏林,德国)湿润有限公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba气氛在37°C。中补充2%人类AB血清(Blutbank Lutjensee, Lutjensee,德国),2毫米l谷氨酰胺应承担(GIBCO、威斯巴登、德国),100 U·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba青霉素(GIBCO),和100年µg链霉素(GIBCO)。的文化时期,上层的收获和储存在−70°C到化验肿瘤坏死因子α。细胞生存能力是由台盼蓝排斥和文化总是在24小时后超过95%。gydF4y2Ba
酶联immunoabsorbent试验对肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba
肿瘤坏死因子α应承担的测定细胞培养上清液中使用一个建立ELISA如前所述gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。重组体人肿瘤坏死因子α应承担的抗体(抗高rhTNF克隆195;请提供大肠重,Knoll AG)、路德维希港,德国),检测肿瘤坏死因子的生物有效的抗原决定基的α。因此,只有生物活性肿瘤坏死因子α应承担的测量;肿瘤坏死因子α应承担的绑定到可溶性受体不应该被检测到。这是支持的观察肿瘤坏死因子α应承担的浮层的内容,以ELISA,与L检测细胞的生物活性测定试验(rgydF4y2Ba年代gydF4y2Ba= 0.85,p < 0.001, n = 23日20 - 5000 pg·毫升范围gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;数据未显示)在一个广泛的肿瘤坏死因子α浓度肺泡巨噬细胞自发或之后公布的刺激gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba。12控制患者的肿瘤坏死因子α应承担的水平是231±76 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(范围0 - 746 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba中位数85 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba与之前报道的控制水平相比),这个数字为220±37 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
固定和免疫组织化学gydF4y2Ba
Transbronchial活检在缓冲4%福尔马林固定,石蜡和嵌入。石蜡切片是根据间接包含IHC染色如前所述gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。抗原后检索(表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),与过氧化氢脱蜡部分被孵化,孵化前50%胎牛血清在PBS与主抗体用于适当的稀释(表2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。与PBS洗涤后,主要由antimouse抗体检测设备根据avidin-biotin过氧化物酶复杂技术(Vectastain精英设备;向量实验室Burlinghame、钙、美国)。最后,部分与苏木精复染色。gydF4y2Ba
染色的串行部分transbronchial活检为以下分析:1)细胞的存在与否表现出对肿瘤坏死因子α应承担的免疫反应性;2)存在与否CD3细胞免疫反应性的;3)负,中度或CD68免疫反应性强;延长4)中度或强烈免疫反应性细胞角蛋白(116);和5)存在/缺乏正常的组织学,分别肉芽肿和肺泡巨噬细胞的聚集。对于每一个染色,sr-TNFα应承担的是策划的水平根据各自的组织学或包含IHC类别,然后检测显著差异。gydF4y2Ba
控制染色包括初级抗体的遗漏和不相关的单克隆抗体的使用。没有免疫反应性的标签控制实验(没有显示)。gydF4y2Ba
统计数据gydF4y2Ba
数据给出均值±sem,除非另有说明。临床参数差异nonsarcoidosis和结节病病人检测意义,Mann-Whitney U的测试。测试之间的显著差异组织学分类单向方差分析(方差分析)或克鲁斯卡尔-沃利斯在排名使用方差分析。根据图基进行多重比较的测试或邓恩的方法考虑到零假设被拒绝了。p = 0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
间接包含IHC肿瘤坏死因子α透露应承担的一个主要的细胞被免疫反应性的肿瘤坏死因子α在肺泡空间(图。1gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba)和中心noncaseating肉芽肿(图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。transbronchial活检的串行部分的分析间接包含IHC TNF高αCD3、CD68、和细胞角蛋白(MNF116),染色对肿瘤坏死因子α应承担colocalised和CD68免疫反应性只对巨噬细胞(无花果1和2gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)可以证明。没有对应的染色模式肿瘤坏死因子α和CD3或上皮标记MNF116,分别。CD3的免疫反应性的细胞主要是局部肉芽肿的皮质区,只有广泛分散在细胞肉芽肿的中心,而MNF116免疫反应性的细胞被完全局限于肉芽肿的周长(图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
sr-TNF的水平还是从培养BAL免疫细胞α如图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。根据先前的结果gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,结节病的患者表现出更高水平的肿瘤坏死因子α应承担(1226±404 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)比对照组患者(239±76 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p = 0.029)。值得注意的是,这种情况下,表现出组织肿瘤坏死因子α应承担的免疫反应性,为评估间接包含IHC(图。4gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)的特点是高水平的自发释放肿瘤坏死因子α应承担的由培养BAL免疫细胞(1667±504 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)与病例相比,缺乏组织的免疫反应性(211±60 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p = 0.002)。因此,水平没有明显差异的sr检测肿瘤坏死因子α当比较病例组与软弱gydF4y2Ba与gydF4y2Ba强有力的免疫反应性CD3 (p = 0.437),或与温和gydF4y2Ba与gydF4y2BaMNF116强烈免疫反应性(p = 0.308),分别。gydF4y2Ba
虽然水平的差异sr-TNF量α亚组之间的特点是弱(189±72 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),中等(374±118 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba),或者强烈染色CD68 (1242±439 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)没有达到统计学意义(图5所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba),有一个明确的优势高水平的肿瘤坏死因子α在子群的情况下表现出强烈CD68免疫反应性,gydF4y2Ba即。gydF4y2Ba密度高的CD68免疫反应性的细胞。gydF4y2Ba
进一步描述病例组与高水平的sr-TNF高α在相应的transbronchial活检为额外的独特的组织学特性进行分析。通过这种探究的方法,五个病人可以被识别的子群的特征是骨料的肺泡巨噬细胞(图。6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)而不是成熟的肉芽肿。值得注意的是,这个小组由四个患者(> 1500 pg·mL最高水平gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba肿瘤坏死因子α应承担(图7)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。克鲁斯卡尔-沃利斯方差分析在排名表明这群明显不同的水平sr-TNF量α(2700±769 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba从子群表现出正常的组织学(221±61 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;p < 0.05)。病人的子群的特点是肉芽肿的存在表现出一个中间水平的肿瘤坏死因子α等460±137 pg·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
确定小组的特点是总量的肺泡巨噬细胞表现出独特的临床特征,进行单向方差分析(表3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。落下帷幕的这组病人的特征是分数的肺泡巨噬细胞,淋巴细胞,淋巴细胞亚群大多是介于正常组织学和肉芽肿患者。然而,这些差异没有达到显著性水准。没有相关疾病活动的状态。然而,值得注意的是,患者的特点是总量的肺泡巨噬细胞活检的存在至关重要的能力最低(78.9±10.2%预测)和肺活量(73.8±10.4% pred)显著降低(p < 0.05),与其他群体相比。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
结节病的特点是noncaseating肉芽肿的形成,特点是积累,巨噬细胞和T淋巴细胞的增殖和自发活动网站的炎症gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。在介质参与肉芽肿形成,肿瘤坏死因子α应承担的被认为扮演了重要的角色gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba。在目前的探索性研究,肺泡巨噬细胞被证明代表最重要的细胞来源的释放肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba原位gydF4y2Ba在结节病的发病机制。生物活性肿瘤坏死因子α应承担的最高水平,免疫细胞自发释放的孤立的落下帷幕,与聚合物的存在有关因此可能代表前辈的肺泡巨噬细胞肉芽肿如果不是肉芽肿gydF4y2Ba在种gydF4y2Ba。在最近的一篇论文中,作者曾表明,增加肿瘤坏死因子α版本将与疾病进展的风险增加gydF4y2Ba19gydF4y2Ba。目前的发现强烈印证了视图对肺泡巨噬细胞的主要作用和肿瘤坏死因子α应承担的初始阶段的结节病的发病机理。gydF4y2Ba
全面讨论了其他人gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,肺泡巨噬细胞是主要球员pathogenenesis结节病。培养肺泡巨噬细胞结节病的患者显示自发释放高水平的肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba和IL 1gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,这表明这些细胞被激活gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。这些研究结果支持研究肿瘤坏死因子α基因表达应承担的动力学,这表明,肿瘤坏死因子α应承担的信使核糖核酸是最大限度地表达检索后立即从肺细胞gydF4y2Ba8gydF4y2Ba。此外,提出了一个自分泌机制的肺泡巨噬细胞生物活性的调节池释放肿瘤坏死因子α应承担的可溶性肿瘤坏死因子受体gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。找到一个强大的协会组织免疫反应性的肿瘤坏死因子α在transbronchial活检与水平的生物活性肿瘤坏死因子α应承担的自发BAL免疫细胞释放的强烈支持的观点研究BAL细胞和流体确实反映了肉芽肿的细胞环境中发展,就像最近强调gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。尽管存在肿瘤坏死因子α肽和记录在类上皮和肉质的巨细胞肉芽肿之前gydF4y2Ba25gydF4y2Ba的细胞内免疫反应性,目前的研究结果肿瘤坏死因子α应承担的肺泡巨噬细胞的聚集显示肺泡巨噬细胞可能会发挥重要作用在肉芽肿形成的早期阶段。gydF4y2Ba
更高水平的肿瘤坏死因子α应承担的生产,观察病人的特点是总量的肺泡巨噬细胞与成熟的肉芽肿患者相比,进一步支持了这种观点,即肿瘤坏死因子α应承担在肉芽肿形成的初始阶段是很重要的gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。最近的数据表明,只有一个族群的肺泡巨噬细胞负责分泌肿瘤坏死因子α应承担的患者的肺结节病gydF4y2Ba24gydF4y2Ba。值得注意的是,在目前的研究中,这些患者的特点是这个(探究的不是诊断)组织病理学特征,表现出临床参数介于正常组织学和肉芽肿患者。这是除了体积限制,这是最突出的患者巨噬细胞聚集。因此,巨噬细胞聚集可能代表至少前辈肉芽肿如果不是肉芽肿gydF4y2Ba在种gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
肺泡巨噬细胞结节病的患者表现出多种分泌细胞功能,他们释放IL-15等细胞因子,生长因子,和趋化因子如单核细胞趋化蛋白1,应承担的咆哮(监管,激活T细胞表达和分泌)和巨噬细胞炎症蛋白1α1βgydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba。因此,肺泡巨噬细胞可能强烈影响T细胞招聘和T细胞反应gydF4y2Ba28gydF4y2Ba。反过来,T细胞也应承担的已知自发释放增加水平的一些细胞因子和趋化因子,gydF4y2Ba如。gydF4y2BaIL 2和高γ干扰素在结节病gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba。量T细胞细胞因子的模式生产指示性结节病的一个T辅助细胞量1介导的疾病gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba。虽然没有明显的检测T细胞免疫反应性对肿瘤坏死因子α应承担的观察,最近的一项研究报道,增加分数的T细胞,应承担哪些细胞肿瘤坏死因子α应承担的表达,观察到荧光激活细胞分类(流式细胞仪)落下帷幕,但不是在外周血结节病的患者与对照组相比gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。相反,另一项研究使用流式细胞仪未能发现任何显著差异结节病的患者和健康对照组之间的频率T细胞表达细胞肿瘤坏死因子α应承担的gydF4y2Ba13gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
肺泡上皮细胞是另一个潜在的肺实质细胞类型可能导致肿瘤坏死因子α应承担的生产。McRitchiegydF4y2Baet al。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba表明,脂多糖(LPS)还可以诱发肿瘤坏死因子α在肺泡上皮ⅱ型细胞的主要文化生产的老鼠gydF4y2Ba17gydF4y2Ba。LPS-induced肿瘤坏死因子α应承担的生产证明是主要在转录水平调节,这是不同于巨噬细胞和中性粒细胞。同样,鼠标的主要文化bronchiolar-alveolar上皮细胞,肺泡上皮ⅱ型细胞和克拉拉细胞组成的,由北部的分析显示,核糖核酸酶保护试验,免疫细胞化学合成肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba33gydF4y2Ba。此外,免疫反应性肿瘤坏死因子α应承担的报道对肺泡上皮ⅱ型细胞急性呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化患者而没有染色观察到组织的控制gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba。在目前的研究中,没有任何迹象上皮的肿瘤坏死因子α在结节病和应承担的本地化控制病人。gydF4y2Ba
从这个研究transbronchial活检,作者不能绝对排除,T细胞或上皮细胞产生应承担的低水平的肿瘤坏死因子α在结节病。然而,数据表明,肺泡巨噬细胞是肿瘤坏死因子α应承担的主要网站的主要来源生产和自发释放的细胞因子进入支气管肺泡灌洗在结节病的病人。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者要感谢以下的技术援助:i . Peterson和s·兰格(免疫组织化学)、h·库尔(组织学),亚当和d s Bubritzky(酶联immunoasorbent试验)。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2002年9月4日。gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2002年11月25日。gydF4y2Ba
- ©人期刊有限公司gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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