文摘
当前作者以前确定BR22,甲状腺转录因子(TTF)量1蛋白26 (TAP26)有关,也与地理TTF 1增强人类表面活性剂蛋白B (SP)检测转染293细胞启动子活动。然而,TAP26在肺细胞的表达及其生物学与SP B生产并没有在生理条件下进行调查。
在这项研究中,内源性co-immunoprecipitation和原位免疫组织化学染色技术被用来探索TAP26和TTF 1复杂在肺上皮细胞。TAP26的相关性,TTF 1和SP B应承担的表达式在H441细胞检查地塞米松的存在,一个已知的SP的积极效应启动子。
单克隆抗体(mAb)对TAP26可以co-immunoprecipitate TAP26和TTF 1 H441细胞。使用该抗体在原位染色的人类肺部分,数据显示,TAP26存在于肺肺泡上皮细胞。反向transcriptase-polymerase连锁反应和免疫印迹分析ⅱ型细胞以及dexamethasone-treated H441细胞表明TAP26表达式是调制协调与SP B和TTF 1在这些细胞。
总之,目前的研究表明,甲状腺转录因子1应承担的相关蛋白26是甲状腺转录因子1应承担的相关蛋白在肺肺泡上皮细胞表面活性剂蛋白基因表达在活的有机体内。
这项工作是支持的格兰特R01 HL63525 Y的年代。杨,罗杰斯研究所和詹姆斯·m·柯林斯J.C. Weissler生物医学研究中心。
甲状腺转录因子(TTF)量1,NK2家庭成员homeodomain-containing脱氧核糖核酸(DNA)绑定蛋白的正常发展需要肺,甲状腺,垂体和前脑1。在研究老鼠破坏TTF 1,应承担的老鼠死在出生和缺乏肺实质1。这个结果建议TTF 1在肺应承担的发展的重要作用。适当的表达TTF 1也应承担必要的启动和维持肺形态发生和维持肺上皮细胞的分化谱系在胚胎发生2- - - - - -5。TTF 1表达降低近端支气管和细支气管上皮细胞胚胎的成熟。出生后,在成人肺,TTF 1表达仍应承担的克拉拉细胞位于远端气道上皮细胞,ⅱ型肺泡上皮细胞6,调节许多lung-specific基因的表达,即表面活性剂蛋白(SP)基因和克拉拉特异性蛋白(CCSP)7。除了TTF 1,应承担的其他许多转录因子,如有翼的螺旋dna结合域包含forkhead盒蛋白质(肝细胞的核因子(HNF)高3 (FoxA1和FoxA2) HNF 3 / forkhead应承担的相同器官(Foxj1a和Foxf1))和锌指蛋白Gli叫,还参与肺开发或lung-specific基因表达的调节4。
地理TTF 1是一个已知的控制基因表达的关键因素的SPs和CCSP7。TTF 1是主体应承担的活动来修改由多种潜在的监管机构。例如,改变的磷酸化TTF 18- - - - - -12以及氧化还原/ oligomerisation TTF 113,可以修改其dna结合活性。其他报告表明,形成蛋白复合物通过与各种蛋白质相互作用也可以调节TTF 1应承担的dna结合蛋白,以及其transactivation活动14- - - - - -17。TTF 1应承担的细胞位置可以调节它的另一个因素影响基因的表达。细胞的条件下接受佛波醇酯或者转化生长因子β,TTF 1应承担的留存在细胞质中,而不是成为核捆绑,导致堵塞TTF 1绑定到其DNA目标。缺乏TTF 1绑定目标应承担因此阻止这些TTF 1应承担的相关基因的激活18,19。
在先前的研究中,使用近端TTF 1应承担的结合位点位于人类SP量B在酵母启动子作为目标一个杂化的分析,当前作者确定了小说transfactor, BR22,这与SP的B启动子片段和transactivates报告基因在酵母。26 kDa蛋白质BR22,指定为TTF 1应承担的高相关蛋白(TAP26) 26日在形成蛋白质复合体与TTF 1在体外并能提高人类在转染293细胞SP B发起人应承担的活动14。然而,他们的在活的有机体内相互作用和生物相关性在生理条件下没有解决。这里,通过使用TAP26-specific mAb42, TAP26及其蛋白复合物的表达TTF 1可以被识别在活的有机体内肺的肺泡上皮细胞。此外,通过比较TAP26的表达模式和TTF 1与SP B dexamethasone-treated肺腺癌的细胞,TAP26的相关性和TTF 1复杂与SP B应承担的表达式可以检查在活的有机体内。
材料和方法
反向transcriptase-polymerase连锁反应分析
一微克的核糖核酸(RNA)成人肺组织,胎儿肺部组织,孤立的ⅱ型细胞治疗dibutyryl环腺苷酸(Bt2营)5天(D5)(礼物C.R.M. Mendelson UT西南医学中心,达拉斯,得克萨斯州)和H441细胞(NCI-H441,人类肺细胞乳头状腺癌)是用于生成互补DNA(互补)通过使用智能(美国BD生物科学,帕洛阿尔托,CA)协议。合成cDNA毫微克之一是用于TAP26的聚合酶链反应(PCR)分析信息。中使用的引物PCR分析如图1所示⇓。TAP26消息与这些引物的PCR扩增跨越一个包含第二和第三外显子区域。这些引物选择补充TAP26消息,不是假基因。整除的放大样品收集每三个循环,然后装上1.5%的琼脂糖凝胶进行分析。控件使用甘油醛3磷酸脱氢酶应承担应承担(GADPH)或者SP B分别特定引物也被放大。整除从每个样本的收集周期放大。
单克隆抗体
纯化重组蛋白地理地理谷胱甘肽S转移酶(GST)量TAP26作为抗原免疫接种小鼠。两个由两部分构成的引物5′底漆TCTGACGGATCCATGGCGCCGGTGAGGCGGT和3′底漆ATGGTGGGATCCACATTTTTCTTGTATTTTTTGAAGAA(TAP26序列是粗体)被用于逆转录酶(RT)的pcr扩增全长TAP26 cDNA使用人类肺聚(RNA (BD生物科学)作为模板。利用双方的引物的T4 DNA聚合酶核酸外切酶衰退的方法20.,可以直接扩增TAP26菌进行基因片段在坐标系融合在向量pGEX-VH销售税21没有额外的不必要的氨基酸残基的引入。pGEX-VH向量包含一个six-histidine伸展,设计的融合蛋白,可净化同质性作为一个完整的蛋白质(GST-TAP26)通过执行顺序销售税,Ni-beads亲和色谱法。每个鼠标(雌性Balb / c, 6周的年龄,n = 10)收到0.1毫升GST-TAP26(250µg·毫升−1在生理盐水)RIBI辅助系统(MPL + TDM乳液,R量700;美国Corixa,汉密尔顿,MT)两个皮下网站每天0和21。小鼠血清抗体检测TAP26在酶联免疫吸附试验(ELISA)涂上MAL-TAP26,这是由向量pMAL TAP26插入TM-p2X(美国新英格兰生物学实验室,贝弗利,MA)。血清还测试了积极的内生TAP26对西方墨迹使用核提取物293(腺病毒5的DNA改变了人类胚胎肾细胞)或海拉细胞。只有那些老鼠显示强烈的免疫反应与一个乐队对应内生TAP26墨迹那么收到最后的免疫腹腔内。三天后,脾切除术进行这些老鼠和脾细胞融合与小鼠骨髓瘤细胞系(P3X63Ag8.653,写明ATCC crl - 1580) peg - 1500。成功融合杂种细胞被选在罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI) -1640中补充了帽子(10毫米次黄嘌呤,40µM氨喋呤,1.6毫米胸苷;美国GIBCOBRL,卡尔斯巴德,CA), 10%胎牛血清,24µMβ的巯基乙醇和Nutridoma-CS(罗氏,印第安纳波利斯,美国)。文化收集上层清液,通过ELISA筛选,反应和免疫印迹分析确认。阳性克隆无性系选择是通过限制稀释的两倍。文化是纯化使用蛋白的分泌抗体量一个琼脂糖CL-4B列或MABTrap工具包(美国新泽西州Amersham,皮斯卡塔韦)。
内源性co-immunoprecipitation
200µg H441或293细胞核提取孵化了16µg mAb42(免疫球蛋白G (Ig)2 bC亚型)缓冲区(20毫米N2 hydroxyethylpiperazine应承担的检测N量2列车ethanesulphonic酸(玫瑰),pH值7.5;150毫米氯化钠,µg antipain 1µg亮抑酶肽,1µg抑肽素和1毫米phenylmethylsulphonyl氟化物)一夜之间在4°C。蛋白质抗体和蛋白复合物被绑定到一个珠子,用绑定缓冲,筛选了和分馏10%钠dodecylsulphate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)免疫印迹分析。Anti-TTF 1马伯(免疫球蛋白1亚型;酶、南旧金山,美国CA)应用于检测存在TTF 1的复杂。山羊antimouse免疫球蛋白1标签与生物素被用作二级抗体,和streptavidin-conjugated辣根过氧化物酶合用于开发immunocomplex。免疫球蛋白的2 b同形像控制,antihaemaglutinin (HA)马伯12 c5使用。293年核提取物也被用来替代H441提取物是一种消极控制。
免疫组织化学染色
Formaldehyde-fixed,石蜡包埋,成人肺部分被用来探索TAP26的表达在活的有机体内。组织部分被封锁与正常血清,然后用抗体孵化TAP26 (mAb42),地理TTF 1(酶),和/或SP B(美国Chemicon泰梅库拉,CA)磷酸盐0.5%牛血清白蛋白在一夜之间在4°C。免疫组织化学染色的亲和素与生物素化的大分子复杂(ABC)系统(美国向量实验室,伯林盖姆,CA)是用于检测antibody-antigen复杂遵循制造商的过程。检测antigen-bound抗体,辣根过氧化物酶(合)共轭ABC复杂的使用。的衬底peroxidase-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)是用于开发一个棕色的颜色antigen-present位置。显色后,细胞与迈耶的苏木精复染色细胞核。复染色细胞核被蓝色所示。SP B量检测,对比染色过程省略。
结果
基因组基因和假基因
使用酵母基因研究,TAP26被确认是一个因素,与TTF 1在体外,通过直接的蛋白质相互作用,激活SP 293年cotransfected B子细胞14。的基因,编码TAP26消息,位于人类染色体12问(加入#AC083811)。与传统intron-exon这个基因是由四个外显子剪接网站(图1⇓)。此外,假基因,> 95% TAP26 cDNA序列身份的(图1 b⇓),在人类基因组中被确认在6号染色体q(加入#AL031133)。它是一个加工假基因通过rt,这个假基因包含几个突变,使氨基酸替换、删除和过早终止密码子的位置212 (C→)。当前之前作者的分析,基因组已经测序基因和存入资源库,然而,既不被认定为一个基因转录。
内源性co-immunoprecipitation
免疫印迹分析,mAb42 H441和293年确定了34 kDa多肽细胞溶解产物(图2⇓)。基于互补脱氧核糖核酸序列,预期的蛋白质大小是小于26 kDa检测多肽的凝胶。目前作者认为34 kDa多肽是内生TAP26以来过表达的蛋白质也有类似的大小内生TAP26(图2⇓巷3);同样地,老鼠多克隆抗体TAP26也检测到一个34 kDa多肽在sds - page凝胶(数据未显示)。控制使用anti-HA马伯(12 c5) mAb42同形像一样,没有出现TAP26大小的一个信号。这一结果表明,信号探测到mAb42 TAP26具体。只有一个乐队出现在污点探测mAb42和加长不产生额外的信号。
在早期的研究中,当前作者利用重组蛋白证明TTF 1和TAP26应承担的蛋白质相互作用在体外和在活的有机体内。目前的报告显示,H441细胞内源性蛋白复合物可以确定通过co-immunoprecipitating复杂。如图2 b⇓,anti-TTF 1抗体检测到一个乐队从H441核提取物保留与TAP26珠子co-immunoprecipitated mAb42(巷4)。同形像控制抗体,12 c5,没有沉淀TTF 1(5道),应承担的其他控制,使用293细胞核提取的实验,也没有显示出相同大小乐队被anti-TTF检测1抗体(巷6)。这个内生co-immunoprecipitation TAP26和TTF 1强烈表明,他们是一个身体稳定化合物有关在活的有机体内。显然,绑定mAb42 TAP26并不妨碍TAP26地理TTF 1之间的交互。当293年核提取物应用于实验细胞蛋白质控制,没有检测到信号。这表明了co-immunoprecipitating乐队是一个特定信号的TTF 1。没有不相关的蛋白质聚合是非TAP26或抗体列。因此,目前的作者有信心在使用mAb42检测内生TAP26和TTF 1化合物在肺细胞(图2 b⇓)。
TAP26肺肺泡上皮细胞中表达
为了检查表达式模式TAP26 mAb42肺癌和测试能力的组织染色,原位免疫组织化学染色肺部分。如图3所示⇓,mAb42选择性沾一些肺肺泡上皮细胞的细胞核。并不是所有的细胞部分被染色。mAb42染色细胞间质地区缺席以及远端气道上皮细胞(a和b)。这些染色的细胞有一个圆形,从肺泡上皮表面凸起。当这些细胞位置在肺与地理分布格局的SP B表达细胞(c和d),他们是有相当的相似(图3所示⇓)。这个结果意味着TAP26可以表达SP B生产细胞。控制没有mAb42显示染色信号,消除了二次抗体对彩色信号的贡献的可能性。偶尔,一些细胞位于间质组织或血管也由DAB染色(图3 b⇓箭头)。这些细胞可以被巨噬细胞或白细胞也表达TAP26在活的有机体内,或者可能代表非特异性染色的存在引起的内源性过氧化物酶(见讨论)。
TAP26是协调与SP表达量B和TTF 1在活的有机体内
为了确定TAP26是生理上的表达与SP高B生产TAP26的模式,地理TTF 1, B和SP表达检测在活的有机体内。防止检测记录TAP26假基因或基因本身,引物选择TAP26记录被用于rt - pcr分析。如图1所示⇓,所选TAP26引物可以检测TAP26消息在成年人的肺,胎儿肺、孤立的ⅱ型细胞,H441细胞(图4所示⇓)。在成人肺和Bt2cAMP-inducedⅱ型细胞(D5) TAP26记录的数量明显高于胎儿肺组织和uninducedⅱ型细胞(D0)(正常化GAPDH控制)。同样,SP量B的数量记录在这些样本也显得丰富。这种协调表达表明TAP26水平可以调节SP的表达量B在活的有机体内。与这些引物扩增基因组基因的可能性不大可能因为这种分析使用的引物是位于不同的外显子(II和III;图1⇓)。基因组基因的扩增与这些引物将产生一个DNA片段> 2 kb大小不同的rt - pcr产品(186个碱基对)。因此,rt - pcr分析中的信号检测应该代表TAP26表达式在这些细胞的相对水平。
众所周知,SP的表达量B和TTF 1二型或H441细胞可以通过地塞米松诱导和/或环腺苷酸(营)22,23。为了检查是否upregulation SP量B可以贡献的增加TAP26表达式在活的有机体内的蛋白质水平TAP26地塞米松诱导的治疗下检查。如图5所示⇓地理,地塞米松可以诱导TAP26和TTF 1表达H441细胞平行和剂量依赖性的方式。其他效应,营地,还显示了一个温和的蛋白质25µM的感应。考虑到增加TAP26表达ⅱ型或者H441细胞SP伴随着升高B和/或者TTF 1表达,目前数据显示一个角色TAP26作为co-activator TTF 1在调节表面活性剂在肺肺泡细胞基因表达。
讨论
有两个基因在人类基因组中DNA序列同源性TAP26。一个是局部的染色体12问和其他染色体6 q25。考虑到6号染色体上的基因q25有多个突变,缺失,过早终止密码子,一段聚尾巴末端的基因和基因内区;怀疑是一个加工假基因的基因。这个基因的5′末端包含270个核苷酸Alu元素。这种合金元素的顺序是相同的人类内源性逆转录病毒家族(HERV)合金元素24,25位于的5′末端HERV-H / env60波尔基因24和对领袖的区域HERV K的家庭25。因此,很可能5′Alu段是一个功能元素,可以把假基因表达在成人组织或培养细胞,其他报告所示26。然而,当假基因转录,一个成熟的多肽不会产生,因为翻译会停在过早的终止密码子。
免疫印迹分析表明,内生TAP26比预期的更大尺寸推导出多肽。不太可能不完整的cDNA序列占的大小变化,因为以下原因:1)记录在两个不同的cDNA序列编码多肽的资源库有相同的长度和相同的氨基酸序列TAP26 cDNA;2)重组TAP26迁移在同一尺寸范围的内源性蛋白(图2⇓);3)多克隆抗体和兔或鼠标也识别相同的多肽。因此,当前作者怀疑一个不寻常的蛋白质结构或翻译后修饰的蛋白质可能有助于改变TAP26在sds - page凝胶迁移。
当前作者以前的报告,使用在体外生化检测和酵母2台混合动力分析,记录一个TAP26蛋白质相互作用和TTF 114。在这里,作者想确定这个复杂在活的有机体内在生理条件下。为此,内生TAP26的存在和TTF 1复杂H441细胞的特点是co-immunoprecipitation研究。结果从co-immunoprecipitation表明复杂生理浓度是稳定的。通过使用污点分析目前的数据表明,北部TAP26广泛表达于成人组织。然而,免疫组织化学染色结果显示染色模式局限于肺泡上皮细胞。染色细胞圆形细胞核,位于肺泡上皮表面,间质区域。此外,这些细胞的分布格局在很大程度上与anti-SP B抗体染色细胞(图。3⇓)。据报道,在成年人的肺肺泡上皮,TTF 1只表示在ⅱ型细胞。差异化的I型细胞和其他间质细胞表达TTF 127。因此,目前的rt - pcr和co-immunoprecipitation结果强烈建议TAP26 /地理TTF 1的存在复杂的ⅱ型细胞。事实上,并不是所有的肺泡上皮细胞被mAb42探索可能是由于TAP26表达式的限制在远端肺地区,或低表达在这些无污点的细胞。除了这些肺泡上皮细胞,细胞可以通过mAb42染色通常位于血管或间隙间充质区域。这可以代表一个真正的表达TAP26在肺泡巨噬细胞或白细胞或内源性过氧化物酶染色过程期间没有完全耗尽。特别是在巨噬细胞,染色的致密颗粒在细胞质中常常可以发现。很明显,这种类型的染色是内源性过氧化物酶的不完整造成的损耗在活的有机体内。然而,大多数的间质细胞,以及远端气道上皮细胞,没有mAb42探测到。
TTF 1应承担的主要表达在甲状腺、肺和某些成人脑组织。在甲状腺,TAP26也发现在滤泡细胞(数据未显示)表明它可能也扮演了一定的角色进入调制TTF 1基因表达量影响甲状腺。在肺泡上皮细胞、内皮细胞、血细胞和其他间质细胞在甲状腺均为阴性TAP26表达式。因此,co-expression TAP26连同TTF 1应承担的各种组织可以建议的一般作用TAP26 TTF 1调节其应承担的代数余子式的基因表达的影响在活的有机体内。
TAP26表达的变化是与地理TTF 1的变化相协调在活的有机体内在dexamethasone-treated H441细胞(图5所示⇓)。并行两TAP26感应的观察和TTF 1 H441细胞增强作者的选项,TAP26功能与TTF 1在活的有机体内。显然,交互促进地理TTF 1活动来调节基因表达的影响。另一条线的证据表明这种蛋白质之间的关系复杂,表面活性剂的更高层次的表达是基因表达TAP26成人肺和孤立II型细胞诱导Bt2营,SP量B表达也在很大程度上增加了在活的有机体内(图4⇓)。这种协调监管表明,复杂在调解中扮演一个重要的角色在生理条件下的基因表达。实际上,当TAP26 cotransfected TTF 1应承担和SP量B或者SP C promoter-driven记者进入293个细胞,TTF 1调制发起人应承担的应承担的活动被TAP26协同刺激剂量依赖性的方式14(数据未显示)。总的来说,很明显,TAP26是一个相关co-activator TTF 1肺。事实上,它的功能在TTF 1应承担的影响在其他组织基因表达需要进一步检查。
许多蛋白质已报告与甲状腺转录因子1和调节基因表达的影响。Calreticulin和视黄酸receptor-α是两个单独的蛋白质增加甲状腺转录因子1应承担的脱氧核糖核结合活动通过蛋白质-蛋白质之间的关系,随后促进其转录活性15,17。另一方面,蛋白质如甲状腺转录因子2和T: G mismatch-specific胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶可以抑制甲状腺转录因子1活动通过直接互动与甲状腺转录因子128,或者通过干扰所需的辅助因子是甲状腺转录因子1活动16。尽管当前作者的研究强烈表明,甲状腺转录因子1应承担的相关蛋白质26有直接接触甲状腺转录因子1应承担的肺细胞,这种交互的机制调节甲状腺转录因子1应承担的活动,如通过改变其脱氧核糖核结合活动或通过增强transactivation活动,需要进一步检查。
人类甲状腺转录因子1应承担相关的结构蛋白(TAP26)基因和脱氧核糖核酸(DNA)序列的相似性比较TAP26之间和一个假基因。人类TAP26)的基因组基因结构基因(序列信息从AC083811获得)。打开盒子表示外显子区域和范围对应的互补的DNA序列(互补)序列在面板b表示。b) TAP26 cDNA序列同源性的比对(AF213377)和假基因(从AL031133中提取序列信息)。聚合酶链反应引物序列,具体TAP26基因不是假基因,突出显示。
)免疫印迹分析甲状腺转录因子(TTF)量1相关蛋白(TAP26)。从不同的样本总数的30µg蛋白质分离在12%钠dodecylsulphate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page),转移到聚偏二氟乙烯膜和探测单克隆抗体(mAb) 42。293巷1:核提取物;293巷2:完整的细胞溶解产物;巷3:核提取物haemaglutinin (HA) -TAP26;巷4:核提取物Flag-TTF量1必经转染293细胞;巷5:H441核提取物。b)内源性TTF 1是co-immunoprecipitated与TAP26 H441核提取的细胞。总共16µg mAb42或antiHA单克隆抗体与200年孵化µg核提取物H441(通道1、2、4、5、7、8)或293个细胞(车道3、6和9)。车道1 - 3是抗体的混合物和核提取之前绑定蛋白一个珠子。车道4 - 6是蛋白质筛选了蛋白质的珠子。 Lanes 7–9 are proteins left in supernatant after incubating with the protein A beads. Reaction mixtures containing antibodies are as labelled. Protein samples were fractionated on 10% SDS-PAGE gel and then subjected to Western blot analysis for TTF‐1 by using anti-TTF‐1 mAb as described in the Materials and methods section.
原位染色甲状腺转录因子1应承担的相关蛋白质(TAP26)在人类肺肺泡上皮细胞。Formalin-fixed和石蜡包埋的人类肺部分探索了单克隆抗体(mAb) 42或者多克隆antisurfactant蛋白(SP) B抗体。细胞抗原与抗体的开发与交互diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)中描述的材料和方法部分。与mAb42)和b)探测对TAP26 (mAb)。c和d)被连续肺部分来自同一组织块;探讨了anti-SP B抗体。箭头标记抗体和细胞染色的箭头显示了DAB染色。酒吧规模:75μm);b) 30μm;c) 15μm;15μm d)。
甲状腺转录因子1应承担的相关蛋白(TAP26)消息肺细胞中表达。从成人肺总核糖核酸,胚胎肺组织,II型细胞分离胎儿肺外植体在第0天(D0)和培养dibutyryl环磷酸腺苷5天(D5)和H441细胞被利用来产生互补脱氧核糖核酸(互补)的智能协议(美国Clontech,帕洛阿尔托,CA)。一个毫微克的cDNA申请使用特定的引物聚合酶链反应分析集TAP26,甘油醛3磷酸脱氢酶(GAPDH)应承担的应承担的和表面活性剂蛋白B (SP B)应承担的消息。从各种放大整除周期收集和分析在琼脂糖凝胶。周期放大每个样本的数量标签。
甲状腺转录因子(TTF)量1相关蛋白(TAP26)可以诱导与TTF 1×地塞米松(Dex)和环磷酸腺苷(营)H441细胞。指数增长H441细胞治疗,10日,25日,50和100 nM敏捷(通道1 - 5),或与25岁,50岁,100年、200年和500年µM阵营(车道7 - 11)的24小时前在文化核提取物的准备收获的。样品在右面板(13 - 16车道)收集从100年细胞接受50 nM敏捷和µM营(D + A), 50 nM敏捷(D)或100µM营地为大麻收获前48 h (A)单独进行分析。共有20µg核提取蛋白质被加载在每个车道和分数在10% dodecylsulphate-polyacrylamide钠凝胶电泳,西方转移,然后对TTF 1和TAP26 (mAb42)抗体。TTF 1和TAP26应承担的信号都显示。较低的面板是相同的蛋白质印迹从上面被剥夺和reprobed肌动蛋白抗体显示每车道加载大量的蛋白质。
确认
作者希望感谢c·门德尔松慷慨地提供核醣核酸酸ⅱ型细胞。
脚注
↵社论评论见6页。
- 收到了2002年12月18日。
- 接受2003年3月14日。
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