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目的:检查随着时间的推移,肺内的细胞反应的婴儿通风与呼吸道合胞体病毒(RSV)细支气管炎和比较这种反应与早产出生婴儿足月出生的。
方法:Non-bronchoscopic支气管肺泡灌洗(BAL)采集标本来自47个婴儿(24足月出生的早产儿出生23日)他们通风RSV积极婴儿毛细支气管炎和10控制。BAL多孔性和微分单元数量计算使用标准技术。
结果:总细胞性BAL的前四天通风与RSV婴儿毛细支气管炎在足月婴儿更大(中位数2.2 (IQR 4.27)×106细胞/毫升)与早产儿(0.58 (1.28)×106细胞/毫升)。细胞反应的大小在早产婴儿毛细支气管炎是类似于对照组测量1(0.62(0.77)×10天6细胞/毫升)。BAL多孔性逐渐降低插管时的婴儿,但保持相对恒定的早产儿插管后7天。
结论:有不同的大小和类型的肺细胞反应在术语和早产儿通风与RSV细支气管炎。项毛细支气管炎患儿的细胞反应不同于对照组的婴儿。这些差异可能反映了变化在肺癌细胞招聘和/或呼吸道口径的变化。
- 细支气管炎
- 支气管肺泡灌洗
- 细胞计数
- 婴儿
- 不成熟的
- 落下帷幕,支气管肺泡灌洗
- CLD,早产的慢性肺病
- 差,四分位范围
- RSV,呼吸道合胞体病毒
来自Altmetric.com的统计
呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎是最重要的死亡原因之一,发病率在全世界婴儿。在城市人口0.8 -2%的婴儿有症状严重到足以住院治疗,1 -3和这些约2 - 3%发展呼吸衰竭,需要通风。1,3治疗RSV细支气管炎主要是支持,目前还没有有效的疫苗。1,4致使严重疾病的因素包括早产。1尽管早产儿只占新生儿总数的6%,他们代表24%的婴儿毛细支气管炎住院,63%的婴儿毛细支气管炎的通风。5,6早产儿可能会在特定的风险严重的RSV疾病的原因。有人建议,因为他们的不成熟的免疫反应和缺乏母亲般地派生RSV中和抗体,早产儿更容易获得RSV感染和根除病毒一旦感染的可能性较小。7他们也可能潜在的病变引起的逮捕了肺发展(所谓的“新桶”)或二次气压性创伤和氧化损伤。8日,9
虽然对RSV感染细胞和免疫反应在动物模型的肺已经有据可查的,10 -13很少有研究调查了这些反应与RSV婴儿毛细支气管炎。两项研究表明,中性粒细胞在航空公司的主要细胞渗透与RSV的婴儿毛细支气管炎。14日,15相比之下,肺标本取自婴儿呼吸道病毒感染在尸检描述一个淋巴细胞peribronchiolar渗透作为组织毛细支气管炎的特征。16在这些婴儿死于RSV疫苗增强疾病在1960年代,嗜酸性粒细胞的浸润肺中描述。17
我们希望研究婴儿的肺部细胞反应严重RSV细支气管炎和探讨如何改变随着时间的推移,随着复苏发生。因为疾病特征项之间的显著区别与早产儿相比,我们研究这些组分别比较两组对照组的婴儿没有呼吸道疾病。
方法
落下帷幕的样本集合
支气管肺泡灌洗(BAL)样本收集的术语(≥37周出生的)和早产(< 37周)婴儿出生通风RSV细支气管炎。RSV状态确定了酶联荧光(爱儿坊,Biomeriux)鼻咽吸入。对照组由婴儿通风non-infective和non-respiratory原因。根据最近的人落下帷幕了指导方针。18简单地说,一个抽吸导管通过气管内管。两个1毫升/公斤整除的无菌生理盐水分别被灌输下抽吸导管。灌洗液与不断的吸入压力恢复到粘液陷阱。RSV感染的婴儿,落下帷幕了在插管后的头四天,或直到孩子气管切开。控制婴儿,BAL执行一次在每个婴儿在插管后第一个24小时。本程序执行前例行支气管厕所由一个运营商,耐受性良好。BAL整除汇集,不停地“冰”,分析了在一个小时之内。所有样品都是积极“漩涡”,然后透过尼龙单丝纱(精密纺织有限公司、埋葬、英国)。
临床特点为每个婴儿收集。他们包括死亡率(PIM)的儿科指数得分提供信息在重症监护孩子死亡的可能性。19当地的儿科研究伦理委员会批准的研究获得了知情同意的父母。
细胞总数计算
标准技术被用来评估细胞生存能力和细胞浓度。简单地说,一个10μl BAL样本混合和沾10μl台盼蓝,使样本细胞生存和总细胞浓度使用纽鲍尔血球计进行评估。
微分细胞计数
10μl整除落下帷幕的抹到幻灯片,风干,固定和染色使用Diff-Quick染色(Gamidore技术服务有限公司,阿宾顿,英国)。微分细胞计数是通过计算获得300白细胞使用标准光学显微镜下油浸镜头。无法辨认的和坏死细胞没有统计。
统计数据
数据是正态分布,他们表示为代表(SD);组之间的差异与学生的检查t测试。数据不是正态分布,他们表示为中位数和四分位范围(差);组之间的差异使用Mann-Whitney等级测试和检查。图形数据的形式提出了盒子,晶须的情节。所有统计测试是正反和p值等于或小于0.05报告为显著。使用SPSS统计计算进行10.0.5统计软件包(SPSS Inc .,芝加哥,IL)。
结果
在120年2000/01和2001/02 RSV季节,BAL样本收集来自47个婴儿(术语,24;早产,23)、通风RSV细支气管炎在插管后的七天(表1)。十四23的早产儿在新生儿期所需的通风。早产的五早产儿慢性肺疾病(CLD)和两个随后死于并发症细支气管炎。十BAL样本收集从10婴儿(所有足月出生的)对照组。落下帷幕进行心脏手术前五婴儿腹部手术前和五个婴儿。研究中所有的婴儿获得被动免疫预防RSV的细支气管炎。
表1给出了病人的特点。术语和早产儿毛细支气管炎的意思是出生时胎龄不同(术语,38.7(标准差1.6)周;早产,30.1(标准差3.6)周)和平均时间通风(任期96 (IQR 32)小时;早产,151(130)小时)。通风在早产儿的平均持续时间大大延长,即使五婴儿CLD被排除在外(任期96 (IQR 32)小时;早产,136(125)小时,p = 0.03)。早产儿比足月婴儿老针对新生儿重症监护室医生在入学儿童重症监护室医生(平均16.0 (SD) 14.7周早产;项,6.2(4.9)周),虽然当他们的年龄被纠正胎龄,没有显著区别词和早产组(平均5.6(标准差13.1)周早产;项,4.8(5.5)周)。没有其他差异项和早产组或对照组对任何其他特性研究(表1)。
表2给出了球样品的特点。值表示为中值(差)。总细胞浓度中位数在插管后的七天内(图1)显著大于术语(2.2 (4.27)×106细胞/毫升)比早产(0.58 (1.28)×106细胞/毫升)与RSV婴儿毛细支气管炎或控件(0.62 (0.77)×106细胞/毫升))。中性粒细胞浓度大于术语(1.78 (3.33)×106细胞/毫升)比早产(0.42 (1.22)×106细胞/毫升)毛细支气管炎患儿或控件(0.37 (0.61)×106细胞/毫升)。肺泡巨噬细胞在术语更大(0.19 (0.48)×106细胞/毫升)比早产(0.06 (0.12)×106细胞/毫升)毛细支气管炎患儿或控件(0.09 (0.10)×106细胞/毫升)。淋巴细胞浓度没有显著不同术语(0.08 (0.22)×106细胞/毫升),早产(0.05 (0.08)×106细胞/毫升)和控制(0.05 (0.12)×106细胞/毫升)组(图1)。总没有相关性或特定白细胞细胞结构和年龄入学或重量。分析后被重复历史的五个婴儿CLD被排除在早产组;类似的差异观察(数据没有显示)。早产儿CLD的历史也相比早产出生但没有CLD。而历史的婴儿CLD通风了大大延长(早产儿和CLD, 321(324)小时;早产,136(125)小时:p = 0.03),在细胞反应没有区别插管后的头四天(数据没有显示)。
总体和个体白细胞浓度,与毛细支气管炎和对照组早产儿天1 - 4。嗜酸性粒细胞是只看到六个样品,他们构成了总数的不到1%。坏死和无法辨认的细胞没有统计。呼吸道上皮细胞看到的一切都是不可行的。
表2显示了个体细胞浓度表示为一个细胞总数的百分比。中性粒细胞的百分比在落下帷幕也显著大于术语(IQR 12.7%)(85.3%)相比,早产(16.0%)(78.0%)毛细支气管炎患儿,均大于对照组(27.7%)(52.3%)。只有6个样本中嗜酸性粒细胞观察婴儿通风与毛细支气管炎,占总量的不到1%。
当BAL多孔性和时间之间的关系在毛细支气管炎患儿检查,总细胞浓度下降在插管后四天足月婴儿(图2)。总细胞浓度也显著大于1(2.60天(IQR 8.62)×106细胞/毫升)比第四天(0.72 (2.66)×106细胞/毫升)插管后婴儿。总细胞浓度在早产儿类似的整个时期的通风,甚至到第七天(图2)。总细胞浓度之间的不同术语和早产儿与毛细支气管炎在插管后的前三天。中性粒细胞浓度的变化在毛细支气管炎患儿在此期间所观察到的类似总细胞浓度(图3)。
总细胞浓度在插管后的头四天,早产儿与RSV细支气管炎。数据也显示对照组婴儿(1天)和六个早产儿仍通风在7天。
中性粒细胞浓度在插管后的头四天,早产儿与RSV细支气管炎。数据也显示对照组婴儿(1天)和六个早产儿仍通风在7天。
讨论
这是第一个研究,我们意识到,系统地量化词的肺细胞反应和早产儿RSV细支气管炎。我们已经表明,总细胞浓度大于词相比,早产婴儿毛细支气管炎和减少婴儿从插管。我们还表明,中性粒细胞浓度变化占大多数的这些变化。细胞反应的大小在早产婴儿毛细支气管炎是类似于对照组的婴儿没有呼吸道疾病。与其他的研究一致,20.早产儿与RSV细支气管炎比足月婴儿通风时间。被排除在这些婴儿早产组与CLD并不影响这些发现的历史。
只是可能执行矿山通风婴儿。因此,虽然我们是特别感兴趣的细胞的婴儿患有严重疾病,我们无法比较这些婴儿与温和的疾病。尽管有这样的限制,我们的学习有很多的优势。首先,BAL样本中收集系统的方式,最小化的影响变量样本稀释固有的其他形式的样本收集来自下呼吸道。其次,我们可以比较这些发现合适的对照组的通风婴儿,类似在年龄、胎龄、体重的婴儿通风RSV细支气管炎。第三,我们在研究中包括婴儿早产。这群孩子常常被排除在临床研究,尽管高比例的早产儿与RSV细支气管炎发展关键的气道阻塞,导致呼吸衰竭和通风。3
最近,一个新的副粘病毒与呼吸道疾病被描述。21人类metapneumovirus (hMPV)引起临床症状,类似于RSV引起的疾病,从轻微上呼吸道问题严重咳嗽、细支气管炎和肺炎。21感染通常发生在冬季,是常见的儿童时期,大多数孩子有感染的血清学证据5年。我们最近表明,很大比例的婴儿严重RSV细支气管炎合并hMPV。22这种双重感染的影响目前还不甚了解。
很少有研究调查了细胞反应与RSV婴儿毛细支气管炎。埃弗拉德和他的同事们14发现细胞渗透在婴儿的鼻咽分泌物和BAL样本与RSV细支气管炎,主要由中性粒细胞。最近,史密斯和他的同事们15显示从上呼吸道分泌物总细胞数明显高于从毛细支气管炎患儿外周血中获得的。他们的研究还表明,中性粒细胞在RSV的主要细胞类型积极和RSV -毛细支气管炎。最近的一项随机,双盲,安慰剂对照试验地塞米松治疗监测肺细胞结构随着时间的推移,在41个婴儿通风严重RSV细支气管炎。20.总细胞浓度在气管插管的时候吸入物明显减少。用地塞米松治疗没有影响总细胞浓度在此期间治疗或安慰剂组。同样的研究还指出,早产儿通风时间比足月出生的婴儿。
大多数信息关于婴儿的肺部病变早产来自后期研究与建立CLD婴儿。最重要的变化是终端细支气管和肺泡导管。23支气管旁纤维化和闭塞的fibroproliferative细支气管炎发生在慢性气道炎症反应。平滑肌肥大和关联也会出现支气管痉挛,会导致小气道阻塞。婴儿早产,不开发CLD,可能也有类似的肺部病变但不明显。这些变化可能不会变得明显,直到孩子变得RSV感染。
在我们的研究中,术语之间的区别和早产儿RSV细支气管炎总细胞和嗜中性粒细胞浓度BAL尤为引人注目。有许多可能的解释。BAL细胞结构的差异可能反映了生产总值(gdp)在早产儿肺结构异常。在早产儿中,航空公司可能会越来越不兼容,因此灌输BAL流体的分布可能不同于婴儿。落下帷幕的体积流体恢复的比例,灌输在早产儿比足月婴儿毛细支气管炎或控制婴儿没有呼吸道疾病(表2)。可能在早产儿中,灌输BAL流体举行更多的集中在更大的近端航空和吸入应用时,相对恢复更多的液体。如果这是这样,少的液体灌输将达到细支气管,网站的主要病理学,和更少的细胞就会恢复。
异常细胞从血液中招聘到呼吸道感染也可能解释术语之间落下帷幕多孔性的差异和早产儿。中性粒细胞招募到RSV感染肺组织是一个动态的过程。24在RSV细支气管炎,中性粒细胞迁移对病毒感染呼吸道上皮细胞和肺泡巨噬细胞趋化因子梯度。25与RSV早产婴儿毛细支气管炎,肺部病变继发于早熟会阻碍细胞的迁移从肺血管进入气道腔。
BAL多孔性的差异的另一个原因与所需的炎症导致阻塞。在婴儿毛细支气管炎,小航空公司被炎症细胞、脱落上皮细胞和粘液分泌过多。3因为早产儿的航空公司已经缩小,23减少炎症涌入可能需要比足月婴儿产生重要的气道阻塞。从本质上讲,足月婴儿有更大的生理储备在一集RSV细支气管炎。这一概念将有助于解释更高比例的早产儿较之足月婴儿期间需要通风一集RSV细支气管炎。它还地址肺部免疫之间的相互作用事件及其生理后果。
与毛细支气管炎足月婴儿通风,减少插管落下帷幕后细胞结构也可能是由于很多因素。细胞内浓度RSV感染呼吸道可能峰值插管前后,当婴儿无法明确自己的阻塞气道。气管插管后,细胞结构会降低细胞和粘液分泌物经常吸下呼吸道和气管导管。此外,随着婴儿的复苏,气道内的细胞渗透可能会减少。
中性粒细胞放大RSV感染的细胞反应,分泌更多的趋化因子,25最近这个响应的价值受到质疑。中性粒细胞诱导损伤呼吸道上皮细胞感染RSV,26和Hussell和他的同事们27表明,他们也可能导致“旁观者”损害肺部的感染地区。在足月婴儿通风RSV细支气管炎,中性粒细胞浓度随时间随着孩子的临床状况的好转。在早产儿中,细胞反应的相对稳定整个通风时间,疾病的临床过程可能涉及更多潜在的肺部疾病的严重程度比活力的中性粒细胞反应。
总之,有不同的大小和类型的肺细胞反应在术语和早产儿通风RSV细支气管炎。项毛细支气管炎患儿的细胞反应也不同于对照组的婴儿。这些差异可能反映了细胞的变化,气道的招聘和/或呼吸道口径的变化。进一步的工作将调查是否有差异这些团体的婴儿之间的免疫反应。
确认
这项工作是支持的资助从行动研究(批准ref SP3814)。