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． 2020年1月10日; 11（1）：222。
DOI：10.1038 / S41467-019-13940-6。

瑞德西韦与洛匹那韦、利托那韦和干扰素联合治疗mers冠状病毒的疗效比较

蒂莫西·P Sheahan1那 amy c sims.2那 莎拉罗斯2那 AlexandraSchäfer.2那 约翰赢得了2那 Ariane J Brown.2那 Stephanie一个蒙哥马利3.那 艾莉森·霍格4.那 大流士Babusis4.那 Michael O克拉克4.那 杰米·E Spahn4.那 劳拉·鲍尔4.那 斯科特卖家4.那 Danielle Porter.4.那 欢乐y冯4.那 托马斯Cihlar4.那 罗伯特约旦4.那 马克。R丹尼森5.那 拉尔夫年代气压的6.
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瑞德西韦与洛匹那韦、利托那韦和干扰素联合治疗mers冠状病毒的疗效比较

蒂莫西·P Sheahan等等。 NAT CANCE． ．
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中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)是一种严重呼吸道疾病的病原体，自2012年以来，在27个国家中有超过2468人感染和851人死亡。尽管沙特阿拉伯王国目前正在评估洛匹那韦、利托那韦和干扰素β (LPV/RTV-IFNb)的联合疗法，但目前还没有批准治疗中东呼吸综合征冠状病毒感染的疗法。在这里，我们证明瑞德西韦(RDV)和IFNb在体外对LPV和RTV具有更好的抗病毒活性。在小鼠中，预防和治疗RDV均可改善肺功能，减少肺病毒载量和严重的肺病理。相比之下，预防性LPV/RTV-IFNb在不影响其他疾病参数的情况下可略微降低病毒载量。治疗性LPV/RTV-IFNb可改善肺功能，但不减少病毒复制或严重的肺病理。因此，我们提供了RDV治疗中东呼吸综合征冠状病毒感染的潜在体内证据。

利益冲突陈述书

A.C.S.获得了吉利德科学公司的一份合同，支持本文报道的体外和体内疗效研究。这些作者是吉利德科学的雇员，持有吉利德科学的股票:艾莉森·Hogg, Darius Babusis, Michael O. Clarke, Jamie E. Spahn, Laura Bauer, Scott Sellers, Danielle Porter, Joy Y. Feng, Tomas Cihlar和Robert Jordan。

数据

图。1
图1所示。RDV和IFNb对LPV和RTV具有较好的抗病毒活性。
图中描述了中东呼吸综合征冠状病毒复制的平均%抑制(左)y-axis）和％细胞毒性（右y设在)的抗病毒药物。在药物的剂量反应下，在多重感染(MOI)为0.08的情况下，将6个副本的Calu-3细胞感染，48小时后，通过定量检测MERS-CoV表达的nLUC的复制情况。用细胞滴度- glo法测定处理相似但未感染的培养物的细胞毒性。有代表性的数据来自四个独立的实验。
图2
图2.预防性RDV降低了MERS-COV复制和疾病。
一种9-12周龄男性和女性的起始重量百分比Ces1c −−/ hDPP4在用5e + 04（载体）感染前的一天预防性施用皮下载体或雷代肽（RDV，25mg / kg）的雷德（RDV，25mg / kg）（载体）N = 14, RDVN= 14)或5E + 05(车辆N = 14, RDVN = 15) plaque-forming units (pfu) MERS M35C4. Asterisks indicate statistically significant differences (P.< 0.05)，通过双因素方差分析和Tukey的多重比较检验确定。B.每个队列的生存百分比和Mantel-Cox检验的生存分析(P. < 0.05,N注一种）。C肺出血在0-4的等级上得分，其中0是正常的粉红色健康肺，4个是完全深红色的肺部。在4 dpi，N = 4/group, and on 6 dpi the remaining animals are plotted. Asterisks indicate statistically significant differences (P.< 0.05)，通过双因素方差分析和Tukey的多重比较检验确定。D.mers-cov肺滴度4（N= 4)和6 dpi(所有剩余动物)。星号表示统计上显着的差异（P. < 0.05) as determined by two-way ANOVA and Sidek’s multiple comparison test. For一种那C那D.在美国，盒子包含第25到75个百分位数，线是中位数，而胡须代表范围。E.来自4 dPI的肺组织切片中MERS-COV抗原（棕色）的血毒素（核，蓝色）和免疫染料。所有照片均采用相同的放大倍数。黑条表示100μm刻度。显示了每个组代表性小鼠的图像。
图3.
图3所示。瑞德西韦预防可减少急性肺损伤。
采用美国胸科学会肺损伤评分系统对急性肺损伤的组织学特征进行盲目评分，该系统为以下表型创建了一个综合评分:肺泡和间质间隙中的中性粒细胞、透明膜、充满肺泡的蛋白碎片和肺泡间隔增厚。每只小鼠随机选择3个病变肺的高倍场(×60)进行评估。展示了模拟感染以及使用预防载体或RDV并感染5E + 04或5E + 05 pfu小鼠适应性mers冠状病毒的代表图像。每组得分的小鼠数量:Vehicle 5E + 04 pfu MERS-CoVN= 5，车辆5E + 05 pfu mers冠状病毒N = 3, RDV 5E + 04 pfu MERS-CoVN = 5, RDV 5E + 05 pfu MERS-CoVN= 5。识别疾病特征的符号如图所示。所有的图像都是在相同的放大倍数下拍摄的。黑色条表示100µm。在图中，方框包含第25到75个百分位数，直线是中位数，而胡须代表范围。Mann-Whitney检验具有统计学意义。
图4.
图4.预防性LPV / RTV + IFNB不会改善疾病结果。
一种12-14周龄女性的起始重量百分比（左）Ces1c −−/ hDPP4用5e + 04 pfu mers m35c4感染的小鼠并用任一载体处理繁殖（N = 9) or remdesivir (RDV, 25 mg/kg,N = 9) subcutaneously beginning −1 dpi. Asterisks indicate statistically significant differences (P.< 0.05)，通过双因素方差分析和Tukey的多重比较检验确定。(中)MERS-CoV肺效价为2 (N = 3) and 6 dpi (all remaining animals). Asterisks indicate statistically significant differences (P.< 0.05)，经Mann-Whitney检验。(右)WBP用于评估小鼠肺功能。PenH是气道阻力或支气管收缩的替代测量方法。星号表示双因素方差分析与sidk多重比较检验的统计差异。B.年龄和性别相近、感染mers冠状病毒的小鼠队列的起始体重百分比(左)、病毒肺滴度(中)和肺功能测定值PenH(右)B.但用车处理（N= 9)， LPV/RTV + IFNb低(1×人体当量)(N= 9)， LPV/RTV + IFNb高(25×人体当量)(N = 9), or IFNb high only (N= 9)。口服药物或洛匹那韦/利托那韦(160/40 mg/kg)每日口服一次，起始剂量为- 1 dpi。感染前2小时开始IFNb治疗，感染后每隔一天进行一次。为了控制给药效果，给药组小鼠同时接受LPV/RTV和皮下PBS，以模拟IFNb注射。同样，只有IFNb的组给予口服载体与口服剂量组相同。进行了类似的统计测试一种进行了B.．对于盒状图和须状图，盒状图包含第25到75个百分位数，直线位于中位数，而须状图则代表范围。
图5.
图5.治疗性RDV减少了复制和病理学。
10-12周龄女性的起始重量百分比Ces1c −−/ hDPP4小鼠感染5E + 04 pfu MERS M35C4后，用一种用于RDV的皮下载体（N = 13) or remdesivir (RDV, 25 mg/kg,N = 14) BID beginning 1 dpi orB.LPV/RTV-IFNb车辆(N = 15), LPV/RTV-IFNb low (N= 16)或LPV/RTV-IFNb高(N = 16) beginning 1 dpi. Oral vehicle or lopinavir/ritonavir (160/40 mg/kg) was administered orally once daily. IFNb low (1x human equivalent dose of 1.6 MIU/kg) and high (25x human equivalent dose of 40 MIU/kg) or PBS vehicle were administered via subcutaneous injection every other day. Asterisks indicate statistical differences by two-way ANOVA with Tukey’s multiple comparison test.C肺出血6 dpi一种那B.在0-4的等级上得分，其中0是正常的粉红色健康肺，4个是漫气变色的深红色肺。D.MERS-COV肺滴度6 DPI在小鼠中描述一种那B.．星号表示统计显著性(N组中描述的组一种和B.那P.< 0.05)，采用单因素方差分析，Kruskal-Wallis检验(C那D.）。数据一种-D.由两个独立的实验编制。对于盒状图和须状图，盒状图包含第25到75个百分位数，直线位于中位数，而须状图则代表范围。E.6 dpi小鼠肺组织切片上具有代表性的mers冠状病毒抗原(棕色)和苏木精染色细胞核(蓝色)的显微照片。黑色条为100µM。
图6.
图6.治疗性RDV和LPV / RTV-IFNB改善肺功能。
采用全身容积描记法(WBP)评价小鼠肺功能。如图5所示的两项研究中的一项的代表性WBP数据。所有组N=每天4次。EF50是50%泄漏量时的流量。PenH是气道阻力的替代测量方法。Rpef是呼气流量达到峰值前的呼气率。EF50、PenH和Rpef改变表明支气管收缩或气道阻塞。星号表示双因素方差分析与Sidek的多重比较检验的统计差异一种双向方差分析与Tukey的多重比较检验B.．盒子包含25至第75百分位数，线位于中位数，而晶须代表该范围。
图7.
图7.治疗性RDV但不是LPV / RTV-IFNB减少了ALI的迹象。
一种图5和图6所示为模拟感染小鼠与治疗组比较的急性肺损伤6 dpi组织学特征的代表性图像。识别疾病特征的符号如图所示。B.美国胸部社会肺损伤得分如图3所示。3.每组的动物数量定量：车辆RDVN = 7, RDVN = 7, vehicle LPV/RTV-IFNbN= 9, LPV/RTV-IFNb低N = 7, LPV/RTV-IFNb highN = 8.C弥漫性肺泡伤害评分定量屏障上皮和血管泄漏的细胞蜕皮，坏死和分解程度。对彼此而言B.和C，在病变肺组织切片的三个随机高倍场(×60)中进行盲评。D.从图1和2中描述的研究中的肺组织切片中切割的Caspase-3抗原染色的定量。5-7。切割的caspase-3是细胞死亡的标志物。为所有群体定量定量的动物数量是N = 5/group. For the box and whisker plots, the boxes encompass the 25th to 75th percentile, the line is at the median, while the whiskers represent the range. ForB.-D.，星号表示单向ANOVA和Kruskal-Wallis多比较测试的统计显着性。
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参考

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