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随机对照试验
． 2016年9月1日;126(9):3207-18。
doi: 10.1172 / JCI86249。 Epub 2016年8月2日

达沙替尼诱发肺血管毒性，易导致肺动脉高压

克利斯朵夫Guignabert， 卡罗尔表象， 安德烈Seferian， 爱丽丝韦尔塔， Ly涂， 拉斐尔Thuillet， 卡洛琳解决， Morane Le Hiress， Yuichi Tamura， Etienne-Marie Jutant， Marie-Camille Chaumais， Stephane Bouchet， 本杰明Maneglier， 马修Molimard， 菲利普Rousselot， 奥利弗Sitbon， 杰拉尔德Simonneau， 大卫Montani， 马克·亨伯特
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随机对照试验

达沙替尼诱发肺血管毒性，易导致肺动脉高压

克利斯朵夫Guignabertet al。 J临床投资． ．
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摘要

肺动脉高压(PAH)是一种危及生命的疾病，可由达沙替尼诱导，一种双重Src和BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂，用于治疗慢性髓性白血病(CML)。今天，有关达沙替尼诱导的多环芳烃长期发展的机制的关键问题仍然存在。在这里，我们证明了慢性达沙替尼治疗会导致人类和啮齿动物的肺内皮损伤。我们发现达沙替尼治疗减弱了大鼠缺氧肺血管收缩反应并增加了实验性肺动脉高压(PH)的易感性，但这些影响在另一种BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼治疗的大鼠中不存在。此外，达沙替尼治疗以剂量依赖的方式诱导肺内皮细胞凋亡，而伊马替尼则没有。达沙替尼治疗通过增加ROS的产生介导内皮细胞功能障碍，而ROS不依赖于Src家族激酶。与这些发现一致的是，与伊马替尼治疗的CML患者相比，我们观察到使用达沙替尼治疗的CML患者血清中内皮功能障碍和血管损伤标志物的升高。综上所述，我们的研究结果表明达沙替尼可引起肺血管损伤、内质网应激诱导和线粒体ROS产生，从而增加对PH发展的易感性。

数据

图1
图1所示。大鼠用达沙替尼预处理后，对野花碱(MCT)和慢性缺氧(CHx)反应过度，这两种物质是体内实验性肺动脉高压的诱导物。
(一个研究达沙替尼对肺血流动力学参数和血管重塑的体内影响的啮齿动物模型:慢性治疗组(A组)和预处理组(B组)。B- - - - - -D)平均肺动脉压值(B)、富尔顿指数(C)和心输出量(D)在载液-、达沙替尼-和伊马替尼治疗大鼠中。(E) vehicle-、dasatinib-和imatinib治疗大鼠远端肺动脉H&E-和α-平滑肌(SM)肌动蛋白染色切片的代表性图像。(F而且G)肺动脉肌肉化百分比的量化(F)和壁厚(G)在vehicle-、达沙替尼-和伊马替尼治疗大鼠的肺中。横线显示平均值±SEM (n= 5 - 6)。**P< 0.01， ***P与载体处理大鼠相比< 0.001;# P< 0.05,# # P< 0.01,# # # P与暴露于MCT或CHx的载体处理大鼠相比< 0.001。比例尺:20 μm。
图2
图2。达沙替尼治疗在体内引起肺EC功能障碍。
(一个在室内空气通气(基线)和缺氧混合气体通气10分钟后(急性缺氧[Hx])，车载物-、达沙替尼-和伊马替尼治疗大鼠的平均肺动脉压(mPAP)值。灌胃剂、达沙替尼(1×)和伊马替尼组大鼠mPAP升高，而达沙替尼组大鼠mPAP升高(10×)。(B)在载液、达沙替尼和伊马替尼治疗的大鼠中，定量ICAM-1 (sICAM-1)、VCAM-1 (sVCAM-1)和e-选择素(sE-selectin)的可溶性形式循环水平。(C)共聚焦显微镜分析和ICAM-1、VCAM-1和e-选择素与内皮特异性标记物Tie2在vehicle-、达沙替尼-和伊马替尼治疗大鼠肺部的双重标记。(D而且E)代表性Western blot和葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)/β-肌动蛋白比值(D)、裂解活化转录因子6 (ATF6)/β-肌动蛋白比值、x -box结合蛋白1 (XBP1)/β-肌动蛋白比值、磷酸化真核起始因子2α (eIF2α)/eIF2α比值(E)在vehicle-、达沙替尼-和伊马替尼治疗大鼠的肺中。横线显示平均值±SEM (n= 4 - 9日)。*P< 0.05， **P< 0.01， ***P与载体处理大鼠或基线相比< 0.001;# P< 0.05,# # P与达沙替尼组比较< 0.01 (10×)。比例尺:20 μm。HPV，低氧性肺血管收缩;L,腔。
图3
图3。达沙替尼诱导体外人肺内皮细胞凋亡。
(一个)人肺EC单分子膜的代表性图像(传代<5)，治疗后2小时，vehicle, dasatinib，或伊马替尼。(B)凡斯、达沙替尼或伊马替尼治疗的人肺ec中caspase-3/7活性的测定。(C)用Hoechst 33342染色和代表性图像定量凋亡细胞百分比。(D)膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)双标记在人肺ECs治疗时的定量，达沙替尼，或伊马替尼和代表性的FACS点图。(E)人肺内皮细胞中tunel阳性细胞的定量，分别用凡陀罗、达沙替尼或伊马替尼治疗。横线显示平均值±SEM (n= 5). *P< 0.05， **P< 0.01， ****P< 0.0001与载体处理细胞相比;# # P< 0.01,# # # # P与400 nM达沙替尼治疗的人肺ec相比< 0.0001。比例尺:20 μm。
图4
图4。达沙替尼诱导培养的人肺内皮细胞凋亡与它对Src家族激酶的作用无关。
(一个直接定量人肺内皮细胞中Src的活性，用载药、达沙替尼、伊马替尼或Src抑制剂-1治疗。(B)在暴露于生长因子鸡尾酒并使用载体、达沙替尼、伊马替尼或Src抑制剂-1处理的人肺内皮细胞中，具有代表性的Western印迹和磷酸化-Src/Src比率和磷酸化- erk1 /2/ERK2比率的定量。(C- - - - - -EHoechst 33342定量肺EC凋亡(C)， caspase-3/7活性(D)，流式细胞术用膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)双染色(E)的肺ec治疗，达沙替尼，伊马替尼，或Src抑制剂-1。横线显示平均值±SEM (n= 4 - 6)。*P< 0.05， **P< 0.01， ***P< 0.001， ****P< 0.0001与载体处理细胞相比;# P< 0.05,# # P与400 nM达沙替尼治疗的人肺ECs < 0.01。FGF-2，成纤维细胞生长因子2(碱性);PDGF，血小板衍生生长因子;EGF，表皮生长因子。
图5
图5。达沙替尼在体内和体外都能刺激线粒体ROS的产生。
(一个)通过共聚焦显微镜分析和8-oxo-2′-脱氧鸟苷(8-oxo-dG)和血管内皮特异性标记物vWF在vehicle-、达沙替尼-和伊马替尼治疗大鼠肺中的双重标记获得的代表性图像。(B)分别对vehicle-、dasatinib-和imatinib处理大鼠的氧化谷胱甘肽/总谷胱甘肽比值和肺和血清中的蛋白质羰基产物进行量化。(C使用荧光探针(CellRox)和二氢乙二胺(DHE)在用载药、达沙替尼或伊马替尼治疗30分钟的肺ECs中细胞内ROS生成的代表性图像和定量。(D)前氧化酶(NADPH氧化酶4 [NOX4]、NO合成酶2 [NOS2]、血红素加氧酶1 [HMOX1]、ga结合蛋白α链[GABPA]、含黄素单加氧酶2 [FMO2])和抗氧化酶(过氧化氢酶[CAT]、谷胱甘肽过氧化物酶1 [GPX1]、超氧化物歧化酶1 [SOD1])在对照剂、达沙替尼和伊马替尼处理大鼠肺部的基因表达分析。(E线粒体用MitoTracker Green(绿色)标记，线粒体ROS用MitoSOX Red(红色)标记。(F- - - - - -G)用流式细胞仪定量分析膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)对预处理或未处理16小时肺ECs中caspase-3/7活性的双重标记和定量N-乙酰半胱氨酸(NAC)在5 mM和暴露或不400 nM达沙替尼。(H5 mM NAC预处理或未处理1小时，达沙替尼暴露或未处理400 nM的肺ec TUNEL染色的代表性图像和定量。横线显示平均值±SEM (n= 4 - 9日)。*P< 0.05， **P< 0.01， ***P与载体处理的细胞或处理的大鼠相比< 0.001;# P< 0.05,# # P< 0.01,# # # P与400 nM达沙替尼治疗或大鼠达沙替尼治疗的肺ECs (10×)相比< 0.001。比例尺:20 μm。
图6
图6。用达沙替尼治疗的CML患者血清中sICAM-1、sVCAM-1和se -选择素浓度升高。
sICAM-1的定量(一个)， sVCAM-1 (B)和se -选择素(C)在CML患者诊断时(n= 17)，在接受达沙替尼或伊马替尼治疗不足3个月的CML患者中(n分别为24和14)，健康受试者(n= 39)。横线表示平均值±SEM。**P< 0.01， ****P与健康受试者相比< 0.0001;# P< 0.05,# # P< 0.01,# # # # P与达沙替尼治疗的CML患者相比< 0.0001。
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