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． 2016年1月4日;11(1):e0145961。
doi: 10.1371 / journal.pone.0145961。 eCollection 2016。

人肺先天淋巴细胞亚群的鉴定与定量

凯瑟琳·C·德·格鲁夫1， 莎兰Provoost1， Fien M Verhamme1， 肯·R·布兰克1， 盖伊·F·乔斯1， 塔尼亚梅斯1， Guy G Brusselle1
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人肺先天淋巴细胞亚群的鉴定与定量

凯瑟琳·C·德·格鲁夫et al。 《公共科学图书馆•综合》． ．
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摘要

背景:先天淋巴样细胞(ILC)是一种新的先天性免疫细胞家族，已成为组织稳态和炎症的重要调节因子。然而，有关人类肺中ILC的相对丰度和特征的数据有限。

方法:本研究的目的是通过多色流式细胞仪对人肺中ILC的不同亚群进行表征和计数。

结果:在CD45+ Lin- CD127+肺ILC人群中，我们使用特异性表面标记物(分别为IL12Rβ2、CRTH2和CD117)和关键转录因子(分别为T-bet、gatta -3和RORγT)鉴定了1组(ILC1)、2组(ILC2)和3组(ILC3)先天淋巴样细胞。基于NKp44的存在，ILC3在天然细胞毒性受体(NCR)+和NCR- ILC3中进一步细分。此外，我们还证实了肺ILC人群中标志性细胞因子IFN-γ、IL-5、IL-17A、IL-22和GM-CSF的产生。有趣的是，与对照组相比，我们观察到慢性阻塞性肺病(COPD)患者肺部NCR- ILC3频率较高的趋势。

结论:我们发现在人肺中存在三个主要的ILC亚群。重要的是，与对照组相比，COPD患者ILC亚群的相对丰度倾向于改变。

利益冲突声明

利益冲突:作者宣称不存在竞争利益。

数据

图1
图1所示。人肺先天淋巴样细胞亚群的特征。
用流式细胞术检测消化后人肺单细胞悬液中ILC亚群(n = 16)。荧光- 1对照用于设置门。一个肺ILC群体以CD45为特征+,林-(即CD3, CD19, CD11c, CD11b)和CD127+细胞。根据特定的表面标记进一步定义子集。BILC1为CD56-, IL12Rβ2+细胞。CILC2子集表达CRTH2。D,NCR+ILC3为CD117+, NKp44+，而NCR-ILC3的特征为CD117+, NKp44-细胞。
图2
图2所示。肺ILC亚群转录因子的细胞内染色。
在消化后的人肺单细胞悬液上测定了特异性ILC亚群中的发育转录因子。一个,在ILC1中T-bet(黑线)与同型对照(灰线)的表达(CD45+,林-CD127+、CD56-, CRTH2-, CD117-)， ilc2 (cd45+,林-, CD127+, CRTH2+)， ilc3 (cd45+,林-, CD127+, CD117+人口)。B,不同ILC子集中GATA-3表达(黑线)与同型对照(灰线)的比较。C,ILC1、ILC2和ILC3人群中RORγT(黑线)与同型对照(灰线)的表达。
图3
图3所示。肺ILC人群中细胞内细胞因子的产生。
肺ILC中的几个标志性细胞因子(门控为CD45)+,林-CD127+由于NK细胞可以污染无毒的ILC1亚群，CD56+细胞被排除以研究IFN-γ的产生。为了产生这些细胞因子，首先用PMA/离子霉素(+转运抑制剂)刺激肺细胞15小时。一个,ILC中IFN-γ的产生。B,肺ILC人群中IL-5的产生。C,ILC中IL-17的产生。D,ILC生产IL-22。E,GM-CSF在ILC人群中的产生。下图为特定细胞因子染色的同型对照。F,ILC内IFN-γ、IL-5、IL-17A、IL-22和GM-CSF阳性细胞的频率(CD45+,林-CD127+)人群(n = 8，均值±SEM)。
图4
图4所示。对照组与COPD患者的ILC亚群。
一个,ILC1 (CD45 .+,林-, CD127+、CD56-, IL12Rβ2+)， ilc2 (cd45+,林-, CD127+, CRTH2+), NCR+ILC3 (CD45+,林-, CD127+, CD117+, NKp44+)及NCR-ILC3 (CD45+,林-, CD127+, CD117+, NKp44-流式细胞术检测了正常人(n = 5)和慢性阻塞性肺病患者(n = 11)消化后肺组织中的蛋白含量。ILC数以CD45的百分比(%)表示+总体(均值±SEM)。B,ILC1, ILC2, NCR相对丰度的饼图+ILC3和NCR-对照组和COPD患者的ILC3亚群。
图5
图5所示。人类肺组织中先天淋巴样细胞亚群概述。
CD45的存在+,林-(即CD3, CD19, CD11c, CD11b)和CD127+肺组织可见ILC。这些ILC在CD56中进一步细分-IL12Rβ2+ILC1子集，CRTH2+ILC2子集，CD117+NKp44+(NCR+) ILC3子集和CD117+NKp44-(NCR-) ILC3子集。此外，在肺ILC群体中，签名转录因子(即T-bet, GATA-3和RORγT)在特定ILC亚群中的表达和细胞因子(即IFN-γ， IL-5, IL-17A, IL-22和GM-CSF)的产生被证实。
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参考文献

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该项目由大学间吸引极计划(IUAP) -比利时国家-比利时科学政策(P7/30)，根特大学协调研究行动(BOF/GOA, 01G02714)和科学研究基金-佛兰德斯(ffl - vlaanderen, G.0897.12)支持。SP是佛兰德斯科学研究基金的博士后研究员。资助者在研究设计、数据收集和分析、发表决定或手稿准备中没有任何作用。