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。 2014年2月6日,9 (2):e88362。
doi: 10.1371 / journal.pone.0088362。 eCollection 2014。

体内纤维FIZZ1在肺纤维化中的作用

Tianju刘1, 宏峰余1, 马修Ullenbruch1, 香港金1, Toshihiro Ito1, 哲吴1, Jianhua刘1, Sem H表象1
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体内纤维FIZZ1在肺纤维化中的作用

Tianju刘et al。 《公共科学图书馆•综合》。 。
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文摘

饮料(炎症区)中1,cysteine-rich分泌蛋白家族的一员,是高度诱导肺过敏炎症和博来霉素诱导的肺纤维化和所表达的主要是气道和II型肺泡上皮细胞。众所周知,这部小说中介刺激α-smooth肌肉肌动蛋白在肺成纤维细胞和胶原蛋白的表达。本研究的目的是调查的体内效应FIZZ1对肺纤维化的发展通过评估bleomycin-induced FIZZ1缺陷小鼠肺纤维化。FIZZ1基因敲除小鼠表现出没有检测到异常。当这些老鼠博来霉素处理他们表现出明显受损相对于野生型小鼠肺纤维化,以及受损的促炎细胞因子/趋化因子表达。肺成纤维细胞活化不足还指出在FIZZ1基因敲除小鼠。此外,招聘骨骨髓来源的细胞受伤的肺缺乏FIZZ1基因敲除小鼠。有趣的是体外FIZZ1被证明对骨髓细胞化学引诱物活动,包括骨骨髓来源树突状细胞。最后,过度FIZZ1纤维化加重。这些发现表明FIZZ1展出profibrogenic属性对博来霉素诱导肺纤维化至关重要,作为其能力反映在诱导myofibroblast分化和招募骨骨髓来源的细胞。

利益冲突声明

利益冲突:作者宣称没有利益冲突存在。

数据

图1
图1所示。代FIZZ1 KO小鼠。
(A)基因打靶策略和限制地图FIZZ1基因。图表显示,野生型FIZZ1基因等位基因和基因目标等位基因。黑匣子E1-E4代表FIZZ1的四个外显子基因。所有四个FIZZ1基因的外显子取而代之的是一个新基因盒。(B)南部印迹分析同源重组的ES细胞克隆。3′探针(所示)是用于检测26 kb WT和10 kb KO等位基因。(C)使用从野生型老鼠尾巴DNA PCR基因型(WT) FIZZ1杂合子(Het)和纯合子基因敲除小鼠(KO)。PCR WT片段为525个基点,KO是351个基点。“小伙子”指100个基点。
图2
图2。AdFIZZ1建设。
AdCMVFIZZ1。dlE3被插入一个生成500 - loxp穿梭载体和cad 5-deltae3之间的重组。LoxP粘粒。老鼠FIZZ1 cDNA受到CMV启动子。“ITR”指的是Ad5ITR和包装信号。
图3
图3。FIZZ1缺乏对BLM-induced肺纤维化的影响。
WT控制或FIZZ1 KO小鼠接受PBS (CON)或BLM作为表示。术后21天,取出肺肺忧郁内容和分析(A)。各自的价值观表示为百分数PBS控制。数据显示为均值±SE,每组5只老鼠。* * * P < 0.05或P < 0.001相比,控制。I型胶原蛋白,α-SMA和肺部信使rna和蛋白质也分析了qPCR (B)和免疫印迹(C),分别。一个典型的污点从每组5只老鼠。肺RNA从7天PBS (CON)或BLM治疗后也分析细胞因子mRNA表达了qPCR (D)。结果表示为2−ΔΔCT。的值被表示为百分数各自的PBS控制。的总数量落下帷幕落下帷幕单核细胞/巨噬细胞细胞(E)和(F)数的第七天BLM或PBS WT或FIZZ1 KO小鼠治疗。数据显示为均值±SE (n = 7老鼠总BAL细胞,4小鼠巨噬细胞、单核细胞)。
图4
图4。对BM FIZZ1影响细胞的招募。
(A)新鲜孤立整体从第七天BLM BM细胞(“BLM-BM”)或PBS (“CON-BM”)治疗小鼠加载了荧光染料,然后镀成5µm-inserts 24-well transwell盘子。2小时后的孵化钱伯斯表示FIZZ1的剂量低,细胞迁移到低钱伯斯是量化通过测量荧光激发和发射波长的494和517海里,分别。结果规范化的控制和表示为百分数控制,和显示为±SE (n = 3)。(B)纯化BM-derived特区从7天BLM (“BLM-BMDC”)或PBS (“CON-BMDC”)治疗小鼠类似的分析(一)迁移到媒体只有(“没有”)或50 ng / ml FIZZ1低腔。结果表示为(A)。(C) BM GFP转基因小鼠移植到WT或FIZZ1 KO小鼠创建各自的GFP BM嵌合体小鼠接受压力。稳定的移植后小鼠接受BLM和7天后的GFP表达进行了分析通过流式细胞术肺细胞群。三个人群看见相应的细胞检测不到(R1)、低(R2)或高(R3) GFP荧光。一个代表从两个独立的实验数据显示,从两个老鼠和合并后的肺细胞用于流式细胞术在每组。循环FIZZ1蛋白质测定的血清(1∶50稀释)通过ELISA试验后21天BLM或PBS (D)治疗。结果显示为均值±SE,每组5 - 6只老鼠。(E) FIZZ1对原代培养的小鼠肺成纤维细胞的迁移也分析了传说中描述(A)。* P < 0.05相比,控制。
图5
图5。细胞因子在BMDC表达式。GM-CSF-induced BMDC分离通过mac anti-CD11c微。
IFNγ,FIZZ1 MCP-1被发现在两个不同的细胞群。* P < 0.05与各自的控制。
图6
图6。肺忧郁内容以GFP-FIZZ1嵌合体BLM或PBS治疗后肺样本。
数据显示为各自的百分比PBS控制。从2所示的平均值是每组小鼠。* P < 0.05与各自控制的价值观。
图7
图7。AdFIZZ1对肺纤维化的影响。
肺FIZZ1 mRNA (A)在指定的时间点和蛋白质后21天(B) AdFIZZ1气管单独管理,或与BLM qPCR注入(C)进行了分析。结果显示为均值±SE的一式三份样品或动物。分析了I型胶原蛋白的生产在肺部与200 ng表示治疗后第七天肺组织溶解产物ELISA (D)。数据显示为均值±SE和5在每组样本。肺α-SMA mRNA在第七天(E)和蛋白质(F)与BLM AdFIZZ1注入后或PBS被qPCR或免疫印迹分析,分别。污点是代表(F)所示。* P < 0.05相比各自的控制。* P < 0.05或__相比,P < 0.001。
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