临床试验
DOI：10.1371 / journal.pone.0081805。
eCollection 2013。
禽流感A（H5N1）病毒的嗜性间充质干细胞和CD34 +造血干细胞
从属关系
- PMID:24339969
- PMCID:PMC3858287
- DOI：10.1371 / journal.pone.0081805
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临床试验
禽流感A（H5N1）病毒的嗜性间充质干细胞和CD34 +造血干细胞
《公共科学图书馆•综合》。
。
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抽象
在甲型H5N1禽流感的严重病例中，发现异常的血液学表现，如淋巴细胞减少、血小板减少和全血细胞减少。病毒直接传播到骨髓(BM)细胞是否导致这一现象尚不清楚。我们探索了两种干细胞类型的易感性;从人骨髓细胞或脐带血中分离的造血干细胞(HSCs)和间充质基质细胞(MSCs)感染禽流感H5N1病毒。第一次，我们证明H5N1病毒可以有效地感染和诱导两种人类干细胞类型的细胞死亡。相比之下，在人流感病毒感染中没有观察到这些活性。我们还确定了感染是否会影响骨髓间充质干细胞的免疫调节功能。我们注意到，在H5N1感染的间充质干细胞和单核细胞共培养中，通过高细胞因子和趋化因子的产生，msc介导的免疫调节随之出现失调。这些发现提供了一个更好的理解H5N1的发病机制在广泛的组织趋向性和系统传播。
利益冲突声明
数据
CD34+造血干细胞，间充质干，CD14+单核细胞和MDCK细胞与SNA和MAA特异于α2,3和α2,6SA，分别与通过流式细胞术确定孵育。轮廓示出描绘了细胞数作为SAα2,3Gal的日志荧光强度和SAα2,6Gal特异性凝集素反应性寡糖在细胞表面上的功能。相对平均荧光强度（MFI）和平均通道荧光（MCF），其描述荧光参数的亮度被扣除MFI和阴性对照的MCF（灰色）来计算。数据代表三个独立的实验。
（一种) CD34+从CB造血干细胞被感染，以10 24小时的MOI现场和热灭活禽流感（H5N1）和人流感病毒（H1N1和H3N2）。MDCK感染H5N1以MOI 1 12小时被用作阳性对照。细胞固定并透化流感核蛋白的胞内染色（NP;绿色）。CD34+细胞用抗人CD34-PE（红色）被复，然后通过共聚焦显微镜检查并以×200放大倍数照相。通过在五个随机字段计数每总细胞NP +细胞的数量获得的NP-阳性（NP +）细胞的百分比。（乙) CD34+来自BM和CB源造血干细胞暴露于任一高（MOI 10）或低（MOI 1）H5N1病毒的剂量。通过流式细胞术分析的病毒抗原的表达。（C)感染CD34上清+以MOI 1和10的HSC在感染后的不同时间点收集，然后滴定在MDCK细胞上以测量通过噬斑测定病毒的产生。结果从三个不同的实验得到的，表示为平均值加标准误差。P值<0.05表示H5N1感染与人流感病毒比较显著
（一种禽流感H5N1感染间充质干细胞的能力与人流感病毒进行了比较。细胞被H5N1感染;活的或热灭活的，H1N1和H3N2 MOI为10。24小时后，细胞染色，用共聚焦显微镜观察病毒抗原的表达(绿色)，Evan’s蓝(红色)作为反染色。高、低MOIs感染间充质干细胞的百分比为(乙) H5N1病毒及(C）人流感病毒通过流式细胞术确定的。（d）MSC的百分比感染受感染的模拟，H1N1，H3N2，H5N1，和热灭活H5N1在MOI 10 24小时。MDCK感染H5N1以MOI 1 12小时被用作阳性对照。（Ë）感染H5N1以各种剂量12小时后H5N1 M基因在MSC的实时PCR。病毒RNA的量通过β肌动蛋白标准化。（F）从在不同时间点的MSCs感染H5N1病毒的生产，蚀斑法测定。结果代表平均值和三个独立实验的SD。P<0.05表示H5N1和人流感病毒感染差异有统计学意义。
（一种) CD34+造血干细胞感染了H5N1禽流感病毒在10的MOI，而（乙)骨髓间充质干细胞在与CD34相同的MOI位点感染禽流感病毒或人流感病毒+造血干细胞。平行样品用DNA酶I，其断裂双链DNA作为阳性对照。18小时后，将细胞固定，透化和多使用染色末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色（红），FITC标记的抗NP（绿色）和DAPI（蓝色）。在B.箭头表示同时细胞内病毒抗原和凋亡信号表达的细胞。将样品检查上的共聚焦显微镜并以×200放大倍数照相。
（一种) il - 6, (乙) MCP-1及(C）从感染CD14的上清液MIP-1β水平+单核细胞与骨髓间充质干细胞单培养，骨髓间充质干细胞/CD14比值为1∶5+以MOI 0.04单核细胞共培养物中通过使用的Bio-Plex细胞因子测定法测量。数据通过的Bio-Plex 5.0软件进行分析。在实验中使用的两种不同的细胞类型从不同的供体的。结果代表平均值和两个独立实验的SD。单星号表示模拟和感染细胞之间的统计学差异显著P的<0.05的值和双星号表示与共培养物和单作组之间有统计学差异显著P的<0.05的值。
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