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． 2013年8月15日; 8（8）：E71761。
内政部：10.1371/journal.pone.0071761。 eCollection 2013。

间充质基质（茎）细胞疗法未能改善实验严重流感的结果

ilyse darwish.1， 大卫横幅， 莎米拉Mubareka， 哈尼族金， Rickvinder贝斯拉， David J Kelvin.， 凯文·C·凯恩， W康拉德Liles
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间充质基质（茎）细胞疗法未能改善实验严重流感的结果

ilyse darwish.et al。 普罗斯一体． ．
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摘要

理论基础：严重流感仍然是一个主要的公共卫生威胁，每年造成数千人死亡。日益增加的抗病毒耐药性和目前治疗方法的有限效力突出了需要新的流感治疗方法。大量的临床前数据表明，间充质间质(stem)细胞(MSC)治疗可诱导抗炎作用，增强受损肺的修复。我们假设MSC治疗可以改善严重流感小鼠模型的生存，减轻肺炎症和减少急性肺损伤(ALI)。

方法：C57Bl/6小鼠感染甲型流感/PuertoRico/8/34(小鼠适应H1N1)或甲型流感/墨西哥/4108/2009(猪源H1N1大流行)，并在感染前或感染后通过尾静脉给药人或小鼠MSCs。MSC的疗效被评估为与抗病毒药物奥司他韦联合使用的独立和辅助治疗策略。监测体重减轻和生存情况。检测支气管肺泡灌洗液和肺实质中的炎症细胞、细胞因子/趋化因子(IFN-γ、CXCL10、CCL2和CCL5)和ALI标志物(总蛋白和IgM)。

结果:在流感病毒感染的小鼠中，以预防或治疗方案给予小鼠或人MSCs均不能提高生存率、减少肺部炎症/炎症细胞计数或预防ALI。MSCs与奥司他韦联合使用也未能改善预后。

结论：尽管ALI和严重流感的临床表现和病理生物学相似，但我们的研究结果表明MSC治疗可能对急性严重流感的预防和/或治疗无效。

利益冲突陈述书

竞争利益：作者声明不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1.既不是预防性也不治疗MMSCs的治疗体重损失或改善两种实验性严重流感模型中的存活。
7-10周龄雄性C57BL / 6只小鼠（A、B)感染了425例EID50.流感A / PR / 8病毒并管理2.5×105MMSC（第6-9段），静脉注射，预防性（感染前4小时和感染后第2天（P.I.））或治疗性（第2天或第5天P.I.）。体重减轻动力学无显著差异（双向方差分析，n = 21–46/组，3个混合实验）或生存率（对数秩检验，n = 21–46/组，3个合并实验）进行观察。误差条代表标准偏差(C）在第6天收获肺部。通过MDCK细胞中通过斑块测定量化病毒载量。没有观察到显着差异（单向ANOVA，N = 5 /组）。误差柱代表四分位范围(IQR)。PFU =斑块形成单元。（D、E）小鼠感染了1000 eid50.流感A/Mex/4108，预防性（感染前4小时和第2天）或治疗性（第2天）服用MMSC。失重动力学无显著差异（双向方差分析，n = 10/组）或存活率（对数秩检验，n = 10例/组）。误差条表示标准偏差。
图2
图2.在实验性严重流感中，MMSC的治疗性给药未能减少肺部炎症或改变BAL炎症细胞计数。
7-10周龄雄性C57Bl/6小鼠感染EID 425例50.流感A / PR / 8病毒并管理2.5×105MMSCS（第6-9段）或第2天P.I.在第7天牺牲了第7天。收获了BAL液体和肺部。（广告)给予MMSC的小鼠的BAL液、肺匀浆细胞因子和趋化因子（IFN-γ、CXCL10、CCL2或CCL5）与给予PBS的感染对照小鼠相比无显著差异（单向方差分析，n = 4-6/组，代表2个独立实验）。(E) mmsc处理小鼠和感染对照组小鼠经PBS处理后BAL炎症细胞总数相似(单因素方差分析，n = 6/组)。BAL的总百分比差异无统计学意义(F)单核/巨噬细胞及(G)给予mMCS的小鼠与给予PBS的感染对照组小鼠之间的中性粒细胞(单因素方差分析，n = 6/组)。误差柱代表四分位范围(IQR)。ND =无法探测。
图3.
图3。治疗给药mscs未能改善实验性重症流感的肺部炎症或改变急性肺损伤。
8周龄雄性C57Bl/6小鼠感染了425只EID50.流感A / PR / 8病毒并管理2.5×105mMSCs（第6代），在第2天通过尾静脉，在第7天处死小鼠(一个)苏木精和伊红染色的肺切片的代表性图像显示，与感染对照组相比，mMSC处理小鼠的细胞和肺损伤相似。（B, C)在给予mscs的小鼠和给予PBS的感染对照组小鼠之间，观察到ALI的BAL液体标志物(总蛋白或IgM)无显著差异(单因素方差分析，n = 6/组，代表2个独立实验)。误差柱代表四分位范围(IQR)。ND =无法探测。
图4.
图4。在实验性严重或非致命性流感中，无论是预防性还是治疗性给药hMSCs都不能改变体重减轻或提高生存率。
8周龄雄性C57Bl/6小鼠感染了425只EID50.（致命模式）或150 EID50.流感A / PR / 8病毒（亚麻致死模型）和给药2.5×105HMSCs（通道3）或PBS，通过尾静脉，预防性（在感染前2天或4小时（第0天））或治疗（第2天或第5天）。每天记录重量。没有显着差异（一个)减重动力学(双向方差分析，n = 18-20 /组，2个联合实验)或(B)在致命流感模型中观察到存活（Logrank测试，N = 18-20 /组，2个合并实验）。（C)在亚致死性流感模型中未观察到体重下降动力学的显著差异（双向方差分析，n = 误差条表示标准偏差。
图5.
图5. HMSCs的治疗施用未能降低肺炎炎症或改变实验性严重流感的BAL炎症细胞计数。
感染425 EID的8周龄雄性C57Bl/6小鼠50.流感A / PR / 8病毒并管理2.5×105HMSCS（第3段）在第2天或第5天5 P.I.在第7天牺牲了第7天。鲍尔的表演。（广告第2天和第5天注射hMSCs的小鼠与对照组注射PBS的小鼠之间的BAL液细胞因子和趋化因子(IFN-γ、CXCL10、CCL2或CCL5)没有显著差异(单因素方差分析，n = 5/组，代表2个独立实验)。（E)hMSC处理的小鼠和感染的对照小鼠给予PBS后BAL炎症细胞总数相似（单向方差分析，n = 6/组）。BAL的总百分比没有显著差异(F)单核/巨噬细胞及(G)给予hMCS的小鼠与给予PBS的感染对照组小鼠之间的中性粒细胞(单因素方差分析，n = 6/组)。误差柱代表四分位范围(IQR)。ND =无法探测。
图6.
图6. HMSCs的治疗施用未能在实验严重流感中改变肺炎炎症或改变急性肺损伤。
8周龄雄性C57Bl/6小鼠感染了425只EID50.流感A/PR/8病毒，给药5×105于P.I.第2天和第5天处死hmsc(第3代)，于P.I.第7天处死BAL。一个）苏木精和曙红染色肺切片的代表性图像在HMSC处理的小鼠中表现出类似的细胞性和肺损伤与感染的对照相比。（B, C)在第2天和第5天注射hMSCs的小鼠与对照组注射PBS的小鼠之间，ALI(总蛋白或IgM)标记物没有显著差异(单因素方差分析，n = 5/组，代表2个独立实验)。误差柱代表四分位范围(IQR)。ND =无法探测。
图7.
图7。在实验性重症流感中，与单独抗病毒治疗相比，hMSC辅助治疗未能改变体重减轻或提高生存率。
8周龄雄性C57Bl/6小鼠感染EID 425例50.通过Gavage在100μlDDH2O中施用甲型流感A / PR / 8病毒，每日1次，每天1倍，开始第2天P.I.，有或没有HMSC管理（5×105细胞）在第2天P.I(一个)测量感染过程中的体重下降动力学，以评估小鼠的发病率。与对照组小鼠相比，奥司他韦治疗的小鼠在第6天和第7天P.I.的体重减轻显著减少（Bonferroni后测的双向方差分析，***P<0.001，**P<0.01，n = 18-20/组；2个混合实验）。与单独服用奥司他韦的小鼠相比，联合服用奥司他韦和hMSCs的小鼠在体重减轻方面没有差异。误差条表示标准偏差。(B存活曲线。与给予ddH的对照组相比，给予奥司他韦的小鼠存活率有增加的趋势2O;然而，奥司他韦和hMSCs联合给药小鼠与奥司他韦单独给药小鼠之间没有观察到差异(洛格兰克试验，n = 18-20 /组;2汇集实验)。操作系统=奥司他韦。
图8.
图8。在实验性重症流感中，与单独抗病毒治疗相比，hMSC辅助治疗未能减少肺部炎症或预防ALI。
8周龄雄性C57Bl/6小鼠感染EID 425例50.通过Gavage在100μlDDH2O中施用甲型流感A / PR / 8病毒，每日1次，每天1倍，开始第2天P.I.，有或没有HMSC管理（5×105第2天处死，第7天处死(一个)苏木精和伊红染色肺切片的代表性图像。奥司他韦治疗的小鼠与未治疗的对照组小鼠相比，肺部炎症细胞浸润减少。然而，联合给予hMSCs和奥司他韦的小鼠与单独给予奥司他韦的小鼠表现出相似的细胞和肺损伤。（是)奥司他韦和hMSCs联合给药小鼠与单独给药小鼠相比，BAL液中细胞因子和趋化因子(IFN-γ、CXCL10、CCL2或CCL5)水平没有显著差异(单因素方差分析，n = 8-10 /组，代表2个独立实验)。（F, G)与单独给予奥司他韦的小鼠相比，奥司他韦与hMSCs联合给予小鼠的ALI(总蛋白或IgM)标记物没有显著差异(单因素方差分析，n = 8-10 /组，代表2个独立实验)。误差柱代表四分位范围(IQR)。ND =无法探测;操作系统=奥司他韦。
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参考文献

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