吸收FK506激活BMPR2、救援内皮功能障碍和逆转肺动脉高压
从属关系
- PMID:23867624
- PMCID:PMC3726153
- DOI:10.1172 / JCI65592
项剪贴板
吸收FK506激活BMPR2、救援内皮功能障碍和逆转肺动脉高压
中国投资。
2013年8月。
免费的PMC的文章
文摘
不正常的骨形态形成蛋白受体2 (BMPR2)信号与肺动脉高血压的发病机制(PAH)。我们使用一个转录高通量测定荧光素酶记者筛选3756年fda批准的药物和生物活性化合物BMPR2信号的感应。最好的反应是通过吸收FK506(他克莫司),通过一个双重的作用机制作为钙调磷酸酶抑制剂,还结合FK-binding protein-12 (FKBP12), BMP信号的抑制因子。吸收FK506 FKBP12公布的I型受体的激活素受体激酶1 (ALK1) ALK2, ALK3和激活下游SMAD1/5和MAPK信号和ID1基因调控的方式优于钙调磷酸酶抑制剂环孢霉素和FKBP12配体雷帕霉素。在肺动脉内皮细胞(ECs)特发性肺动脉高压患者,低剂量的吸收FK506逆转功能失调的BMPR2信号。在小鼠条件Bmpr2删除ECs,低剂量的吸收FK506阻止夸张的慢性低氧多环芳烃与感应EC BMP信号的目标,如组织apelin。低剂量的吸收FK506也扭转严重的多环芳烃有野百合碱后内侧肥大的老鼠和老鼠neointima形成后VEGF受体封锁和慢性缺氧。我们的研究表明,低剂量的吸收FK506治疗多环芳烃可能是有用的。
数据
(一个)BRE-luciferase活动不同数量的BMP4的C2C12细胞在不同浓度。BMP4 EC-20浓度的250点1500细胞每60μl允许辅活化因子的识别。(BBMP4下午)百分比BRE-luc激活,与250年相比,在6个系列稀释吸收FK506和雷帕霉素。(C)在C2C12细胞比较吸收FK506 BRE-luciferase活动(颗;2μg /毫升),雷帕霉素(拉伯;4μg /毫升),环孢霉素(三轮车;2μg /毫升),Shield-1(1μg /毫升)(n= 8;* * *P< 0.001和案子,# # #
P< 0.001和吸收FK506,§§§
P< 0.001与环孢霉素,1路的方差分析,Bonferroni多重比较测试)。(D人类PAECs),ID1相对于表达B2M信使rna 24小时与车辆(CON)刺激后,吸收FK506 (15 ng / ml),或雷帕霉素(10 ng / ml) (n= 3;* *P< 0.01和车辆,1路的方差分析,Dunnett的测试)。(E和F)代表西方PAECs显示免疫印迹和相对光密度分析(E)pSMAD1/5/8和(F)ID1刺激后相对于β-actin BMP4 (10 ng / ml)或吸收FK506 (15 ng / ml) (n= 3;*P< 0.05;* *P< 0.01和欺诈,双向方差分析)。(G)细胞凋亡的评估与测量caspase-3/7发光后24小时血清饥饿和治疗BMP4 (10 ng / ml)或吸收FK506 (15 ng / ml)。(n= 5;*P< 0.05;* *P< 0.01和案子,1路的方差分析,Dunnett的文章测试)。(H从人工基底膜管的形成分析)代表图像。管数量和长度进行评估后8小时后如果细胞(CON)或刺激VEGF (20 ng / ml), BMP4 (10 ng / ml),或吸收FK506 (15 ng / ml)。(n= 6;*P< 0.05;* *P< 0.01和案子,1路的方差分析,Dunnett的文章测试)。酒吧规模:100μm。意味着±SEM。
(一个)Id1信使rna,规范化18岁信使rna,人类如果mvPAECs (CON)或1小时后的BMP4 (10 ng / ml)或吸收FK506 (0.2 ng / ml, 2.0 ng / ml)。(B)代表相对于β-actin ID1蛋白质免疫印迹和密度测量分析在时间点和剂量表示一个。(一个和B)(n= 3;*P< 0.05;* *P< 0.01和案子,1路的方差分析,Dunnett的文章测试)。(C)BRE-luciferase活动C2C12细胞刺激后BMPR2配体BMP6 (50 ng / ml)和吸收FK506为24小时(1μg /毫升),有或没有预培养30分钟与激酶抑制剂ldn - 193189(120海里)(n= 6;* * *P< 0.001和反对;§§§
P< 0.001 vs BMP6, 1路的方差分析,Bonferroni多重比较测试)。(D)BRE-luciferase活动在C2C12细胞治疗小干扰rna (NTsi),不属预定目标的小干扰rna (BMPR2si) BMPR2 BMPR2si +小干扰rna (ActA2si) Activin2A, BMPR2si +小干扰rna (ActBsi)和受激吸收FK506 Activin2B(1μg /毫升)(n= 6;§§
P< 0.01 vs BMPR2si颗治疗;# #
P< 0.01 vs BMPR2si-Act2Asi, 1路的方差分析,Bonferroni多重比较测试)。(E)与抗体免疫沉淀反应,国旗和免疫印迹HA和旗293 t细胞转染质粒HA-ALK1, HA-ALK2, HA-ALK3 FKBP12-FLAG以及刺激与吸收FK506 (100 ng / ml 30分钟)。(F- - - - - -H)。BRE-luciferase活动与NTsi C2C12细胞治疗,小干扰rna (ALK1si) ALK1 ALK2si ALK3si和刺激(F)BMP4(250点),(G)吸收FK506(2μg /毫升),(H雷帕霉素(n= 8;# #
P< 0.01 vs NTsi + BMP4, NTsi +吸收FK506 NTsi +雷帕霉素,1路的方差分析,Bonferroni多重比较的测试)。意味着±SEM。
(一个)代表免疫印迹和微显示BMPR2 ID1 /人类PAECs刺激β-actin BMP4 (10 ng / ml)或吸收FK506后(15 ng / ml)击倒的BMPR2 BMPR2si相比NTsi控制(n= 3;*P< 0.05和欺诈,双向方差分析)。(B)代表免疫印迹和微mvPAECs IPAH患者从3显示ID1 /β-actin基线(CON)或在不同的时间点与BMP4刺激后(10 ng / ml)或吸收FK506 (15 ng / ml) (n= 3;*P< 0.05和欺诈,双向方差分析)。(C)ID1/18岁信使rna和组织apelin /后4小时18岁信使rna与BMP4刺激后8小时(10 ng / ml)和低剂量的吸收FK506 (0.2 ng / ml)在同一IPAH mvPAECs一样B(n= 3;*P< 0.05;* *P< 0.01,而案子,1路的方差分析,Dunnett的测试)。(D)代表图像和定量分析管的数量和长度的管子形成于基底膜基质与mvPAECs如果反对IPAH 4小时后,患者VEGF (10 ng / ml), BMP4 (10 ng / ml),和吸收FK506 (0.2 ng / ml) (n= 6;* * *P< 0.001;* *P< 0.01和案子,1路的方差分析,Dunnett发布测试;酒吧规模:100μm)。(E)模型激活BMPR2在存在subactivating剂量的最佳管理和激活剂bmp和突变或功能失调的BMPR2受体激活剂的最佳管理或subactivating剂量的bmp和吸收FK506。意味着±SEM。
(一个和B)LacZ染色记录BMPR2删除(一个)远端PAECs和(B)在EC -毛细管ECsBmpr2- / -老鼠。酒吧规模:100μm。(C)减少BMPR2在整个肺溶解产物由西方免疫印迹比较野生型老鼠和三苯氧胺(TAM)与液氧Bmpr2Cre-ERT老鼠有或没有它莫西芬。(D)缺乏Bmpr2信使rna的ECs收获EC -Bmpr2- / -(KO)与野生型小鼠(n= 3;* * *P< 0.001 WT与EC -Bmpr2- / -,1路的方差分析,Dunnett)。(E在野生型和EC - RVSPBmpr2- / -老鼠接受车辆或吸收FK506(0.05毫克/公斤/天)normoxia或缺氧(10%啊23周)(n每组= 8;* *P< 0.01 normoxia与车辆;§§
P< 0.01车辆缺氧野生型和EC -Bmpr2- / -双向方差分析,Dunnett)。(F)RVH(富尔顿指数、体重RV / LV和鼻中隔)在同一组E。(G)代表组织学barium-injected肺的野生型和EC -Bmpr2- / -老鼠normoxia /缺氧有或没有车辆或吸收FK506后。缺氧的船只数量的减少是由吸收FK506改善(箭头)。酒吧规模:100μm。(H)百分比muscularized肺泡壁和肺泡管动脉/总动脉在野生型和EC -Bmpr2- / -老鼠normoxia /缺氧有或没有车辆或吸收FK506后(n= 8老鼠;意味着每个鼠标5×20字段;* *P< 0.01;* * *P< 0.001 vs normoxia野生型和EC -Bmpr2- / -双向方差分析,Dunnett)。(我每100肺泡)动脉在动物一样H。(J)组织Apelin /18岁信使rna和(K)以挪士/18岁信使rna在mvPAECs EC -Bmpr2- / -预先处理老鼠,1%低氧和收获8小时后BMP4 (10 ng / ml)或吸收FK506 (0.2 ng / ml)和车辆(CON) (n= 3;*P< 0.05和案子,1路的方差分析,Dunnett)。意味着±SEM。
(一个)RVSP(毫米汞柱)在大鼠后21天野百合碱(MCT)治疗(60毫克南卡罗来纳州一次),有或没有抓捕非法车辆(阿明费)或低剂量的吸收FK506治疗(n= 6 - 8;* *P< 0.01相比VEH治疗;#
P< 0.05相比,21天野百合碱;§§§
P< 0.001与42天野百合碱车辆相比,1路的方差分析,Bonferroni后测试)。(B富尔顿)RVH(指数)在同一组高于(* * *P< 0.001与车辆处理;§
P< 0.05与42天野百合碱车辆相比,1路的方差分析,Bonferroni后测试)。(C)代表肺组织学(Movat污点)(比例尺:100μm)。(D)MTT测定扩散PASMCs PDGF的存在与否(20 ng / ml) 72小时与车辆(CON)刺激后,BMP4 (10 ng / ml),或吸收FK506(0.2和2.0 ng / ml) (n= 5;* *P< 0.01,* * *P< 0.001,BMP4和反对(PDGF的存在),1路的方差分析,Dunnett)。(E)细胞凋亡的评估与测量caspase-3/7发光在24小时血清饥饿或治疗BMP4 (10 ng / ml)或吸收FK506 (0.2, 1.0, 2.0, 15 ng / ml) (n= 5;*P< 0.05 1路的方差分析,Dunnett的测试)。(F)荧光素酶NFAT记者在PASMCs刺激激活检测PDGF (30 ng / ml)和剂量的吸收FK506 0.2至15 ng / ml。(# #
P< 0.01和# # #
P< 0.001,而仅靠PDGF刺激,1路的方差分析与Bonferroni多个双测试)。(G)Il2/Gapdh老鼠的mRNA表达整个肺野百合碱治疗后21天(60毫克南卡罗来纳州一次),有或没有抓捕非法车辆或低剂量的吸收FK506治疗(n= 6 - 8;无意义的,双向方差分析)。意味着±SEM。
(一个)时间的实验。(B)RVSP和RVH(富尔顿指数)在大鼠normoxia有或没有车辆(阿明费)或吸收FK506 SUGEN 3周后大鼠缺氧和5周normoxia,牺牲了8周和11周后用汽车或吸收FK506治疗(n= 8;*P< 0.05;* * *P< 0.001 normoxia vs .同等条件下,双向方差分析,Bonferroni后测试)。(C)代表图像(比例尺:100μm)和百分比船只与neointima缺氧/ SUGEN normoxia老鼠在8 - 11周处理车辆或吸收FK506 (n= 8;* *P< 0.01和车辆,1路的方差分析,Bonferroni发布测试)。(D)每毫米的肺泡数量2normoxia(有或没有车辆或吸收FK506)和在大鼠缺氧/ SUGEN / normoxia,牺牲在11周(有或没有抓捕治疗车辆或吸收FK506) (n= 8;*P< 0.05和未经处理的normoxia条件、双向方差分析、Dunnett的测试)。(E)意味着每100肺泡数量的动脉(5场×20)在同一组D(n= 8,#
P< 0.05,1路的方差分析,选择对发布测试,汽车比吸收FK506)。(F)组织Apelin /β-actin mRNA表达肺总溶解产物在同一组D(n= 8;*P< 0.05,1路的方差分析,Dunnett的测试)。(G)Il2/GapdhmRNA表达整个肺的老鼠normoxia(有或没有车辆或吸收FK506)在大鼠缺氧/ SUGEN / normoxia之后,牺牲在11周(有或没有抓捕治疗车辆或吸收FK506) (n= 8;*P< 0.05和车辆normoxia,#
P< 0.05和颗normoxia,无意义的趋势与吸收FK506治疗,减少2双向方差分析,Bonferroni多重比较测试)。意味着±SEM。
类似的文章
-
Smad-dependent和smad-independent id1的感应环前列腺素类似物抑制肺动脉平滑肌细胞增殖在体外和体内。中国保监会研究》2010年7月23日,107 (2):252 - 62。doi: 10.1161 / CIRCRESAHA.109.209940。Epub 2010年6月3。 中国保监会研究》2010。 PMID:20522807
-
CCL5缺乏救助肺血管功能障碍,并通过caveolin-1-dependent逆转肺动脉高压BMPR2激活。J摩尔细胞心功能杂志。2018年3月,116:41-56。doi: 10.1016 / j.yjmcc.2018.01.016。Epub 2018年1月31日。 J摩尔细胞心功能杂志。2018。 PMID:29374556
-
西地那非强化骨形态形成蛋白信号在肺动脉平滑肌细胞和实验性肺动脉高压。Arterioscler Thromb Vasc杂志。2013年1月,33 (1):34-42。doi: 10.1161 / ATVBAHA.112.300121。Epub 2012年11月8日。 Arterioscler Thromb Vasc杂志》2013。 PMID:23139294
-
Endothelin-Bone形态蛋白2型受体相互作用诱导肺动脉平滑肌细胞增生肺动脉高血压。J心肺移植手术。2015年3月,34 (3):468 - 78。doi: 10.1016 / j.healun.2014.09.011。Epub 2014年9月28日。 J。2015年心肺移植手术。 PMID:25447587
-
BMP 2型受体肺动脉高血压治疗的目标。细胞摩尔生命科学。2017年8月,74 (16):2979 - 2995。doi: 10.1007 / s00018 - 017 - 2510 - 4。Epub 2017年4月26日。 细胞摩尔生命科学》2017。 PMID:28447104 免费的PMC的文章。 审查。
引用的179年文章
-
BMP信号的抑制肺动脉高血压PHD2不足。Pulm保监会。2022年3月23日,12 (1):e12056。doi: 10.1002 / pul2.12056。eCollection 2022年1月。 Pulm保监会》2022。 PMID:35506101 免费的PMC的文章。
-
最新的肺动脉高压和右心室衰竭的动物模型。中国保监会研究》2022年4月29日,130 (9):1466 - 1486。doi: 10.1161 / CIRCRESAHA.121.319971。Epub 2022年4月28日。 中国保监会研究》2022。 PMID:35482834 审查。
-
CRISPR-mediated Bmpr2点突变加剧肺血管病变,减少后期的生存在大鼠实验性肺动脉高压。和研究》2022年4月8日,23 (1):87。doi: 10.1186 / s12931 - 022 - 02005 - w。 和研究》2022。 PMID:35395852 免费的PMC的文章。
-
治疗方法治疗肺动脉高血压,纠正不平衡TGF-β总科信号。前面地中海(洛桑)。2022年1月24日,8:814222。doi: 10.3389 / fmed.2021.814222。eCollection 2021。 前面地中海(洛桑)。2022年。 PMID:35141256 免费的PMC的文章。 审查。
-
BMP信号通用性和悖论的内皮细胞行为和血管功能。细胞摩尔生命科学。2022年1月19日,79 (2):77。doi: 10.1007 / s00018 - 021 - 04033 - z。 细胞摩尔生命科学》2022。 PMID:35044529 免费的PMC的文章。 审查。
