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。 2012年8月,11 (4):569 - 78。
doi: 10.1111 / j.1474-9726.2012.00818.x。 Epub 2012年4月17日。

糖皮质激素抑制所选组件的senescence-associated分泌表型

Remi-Martin Laberge1, 莉莉周, 梅丽莎·R Sarantos, 弗朗西斯Rodier, 亚当•弗洛伊德, Peter L de Keizer J, 苏刘, 马可Demaria, 宥晟琮, Pankaj Kapahi, 皮埃尔·Desprez, 罗伯特E休斯, Judith Campisi
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糖皮质激素抑制所选组件的senescence-associated分泌表型

Remi-Martin Labergeet al。 衰老细胞。 2012年8月。
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文摘

细胞衰老抑制癌症逮捕的增殖细胞恶性转化的风险。最近,衰老细胞分泌许多细胞因子,生长因子,蛋白酶,可以改变组织的微环境,促进与年龄相关的病理。确定小分子抑制senescence-associated分泌表型(SASP),我们开发了一个筛选协议使用正常的人类成纤维细胞和化合物库,是人类使用批准。有前途的图书馆中成分是糖皮质激素皮质甾酮。皮质甾酮和相关的生产和分泌糖皮质激素皮质醇减少选择SASP组件,包括多种促炎细胞因子。重要的是,糖皮质激素抑制SASP没有恢复肿瘤抑制增长逮捕,并有效的细胞是否受到电离辐射诱导开始衰老或强烈的促有丝分裂的信号由致癌RAS或MAP激酶激酶6超表达。抑制il - 6原型SASP组件所需的糖皮质激素受体,在配体的存在,抑制IL-1α信号和NF-κB transactivation活动。因此,co-treatments结合糖皮质激素和糖皮质激素拮抗剂ru - 486或重组IL-1α有效重建NF-κB转录活动和il - 6的分泌。我们的发现证明筛查的可行性化合物抑制衰老细胞的影响。他们进一步表明,糖皮质激素抑制所选组件的SASP表明皮质甾酮和皮质醇,两个fda批准的药物,可能施加的影响在一定程度上抑制senescence-associated炎症。

利益冲突声明

作者报告任何财务或其他利益冲突与本文的主题相关。

数据

图1
图1所示。皮质甾酮和皮质醇SASP部分抑制
(A)衰老(X-irradiated 10 Gy (Sen (XRA)) HCA2成纤维细胞培养介质中加上10%血清含有指定的肾上腺酮的浓度或浓度最高的DMSO(车辆控制)。细胞照射后立刻有皮质甾酮或DMSO, 6 d后分析。细胞在无血清培养基清洗和孵化没有皮质甾酮生成的媒体。条件媒体presenescent(前)和控制或corticosterone-treated森(XRA)细胞ELISA分析的il - 6。(B)细胞治疗和媒体条件生成和分析中描述(A)除了使用皮质醇浓度表示。(C)的媒体收集presenescent(前)或衰老(XRA)细胞DMSO溶液处理,皮质甾酮(500海里)或皮质醇(100海里)如(A)所述。条件分析了媒体通过抗体阵列。我们使用了平均信号从PRE和XRA DMSO细胞作为基线。信号高于基线是黄色的;信号低于基线是蓝色的。颜色的强度代表日志2倍平均值的变化。层次聚类样本之间的关系显示为系统树图(左)。*,因素显著(p < 0.05),抑制皮质醇。‡因素显著(p < 0.05),由皮质甾酮抑制。(D)细胞被感染RAS -或MKK6-expressing慢病毒。选择后,细胞被给定的DMSO -, 500 nM皮质甾酮(C1)和100 nM皮质醇(C2) 6 d。条件媒体如上所述和分析生成的il - 6的ELISA。*,从DMSO-treated因素明显不同(p < 0.05)。(E)细胞处理指定的间隔500海里皮质甾酮(模拟,由粗线表示较低的面板)之前或之后X-irradiation (XRA,由箭头表示)。的媒体准备和分析ELISA对il - 6(上半部分)。*,从DMSO-treated因素明显不同(p < 0.05)。
图2
图2。糖皮质激素对SASP取决于糖皮质激素受体
(一)mRNA提取presenescent(模拟)或衰老X-irradiated HCA2细胞治疗DMSO, 500 nM皮质甾酮或100海里皮质醇传说与图1中描述。IL-5成绩单,il - 6,引发、MMP-3 IL-1α,MCP-2, MCP-3和gm - csf量化定量PCR(标准化的微管蛋白)。*,从DMSO-treated因素明显不同(p < 0.05)。(B)信使rna提取前,森(XRA)细胞治疗DMSO, 500 nM皮质甾酮(C1)或100海里皮质醇(C2)如上所述,和成绩单GR量化了PCR微管蛋白(归一化)。尽管GR mRNA水平略高在衰老细胞,增加并不显著。(C)和森(XRA)细胞治疗DMSO, 500 nM皮质甾酮或100海里皮质醇如上所述应用GR 1、4和7 d X-irradiation之后。(D)细胞被感染了慢病毒表达shrna GFP(控制)或GR,和选择。选择7天后,信使rna提取并记录了GR量化了PCR微管蛋白(归一化)。(E)总细胞溶解产物从shGFP准备shGR-expressing细胞(D)中所描述,并分析了通过免疫印迹GR和肌动蛋白(控制)。(F)细胞感染shGFP或shGR-expressing慢病毒X-irradiated和DMSO之后立即治疗,500 nM皮质甾酮或100海里的皮质醇。 Conditioned media were collected 7 d later and analyzed by ELISA for IL-6. (G) Cells were treated as described in (F) except for the addition of RU-486 at the indicated doses. Conditioned media were collected and analyzed by ELISA for IL-6 secretion.
图3
图3。糖皮质激素抑制IL-1α表达式
(A) Presenescent HCA2细胞治疗DMSO(前),500 nM皮质甾酮或100海里皮质醇24 h,或被诱导开始衰老X-irradiation (Sen (XRA))和DMSO,肾上腺酮和皮质醇之后立即。信使rna提取后指定的间隔和成绩单IL-1α量化了PCR微管蛋白(归一化)。(B)信使rna提取细胞(A)被用来量化描述的成绩单为il - 6微管蛋白(归一化)。(C)和森(XRA)细胞,准备如(A)所述,是IL-1α应用。森(XRA)照射后细胞应用7 d。
图4
图4。糖皮质激素影响IL-1α/ NF-κB通路和抑制的能力SASP诱导肿瘤细胞入侵
(A)总HCA2细胞溶解产物从presenescent准备(前)细胞,或衰老细胞(Sen (XRA))细胞治疗DMSO - 500 nM皮质甾酮(C1),或100海里皮质醇(C2)没有(左面板)或存在(右面板)的重组IL-1α蛋白质(rIL-1α)。由西方墨点法分析了溶菌产物IRAK1, IkBα,RelA和肌动蛋白(控制)。(B)辐照后,森(XRA)细胞有DMSO, 500 nM皮质甾酮或100海里的皮质醇。6 d后,细胞重组IL-1α蛋白质显示剂量的糖皮质激素的存在血清中媒体自由。条件媒体收集24 h后,ELISA分析il - 6。(C)核提取物是从细胞前准备和森(XRA)细胞治疗DMSO, 500 nM皮质甾酮或100海里皮质醇在没有(左面板)或存在(右面板)的重组IL-1α蛋白质(rIL-1α),并分析了对NF-κB DNA结合活性。(D)细胞被感染了慢病毒携带NF-κB-luciferase记者构造,辐照,允许开始衰老。辐照后,细胞治疗DMSO, 500 nM皮质甾酮或100海里皮质醇,+ 0.5μM ru - 486或2.5 ng / ml IL-1α,表示。7 d辐照后,细胞使胰蛋白酶化,计算在内,荧光素酶活性的细胞溶解和化验,标准化的手机号。(E)我们准备好的条件媒体presenescent(前)细胞或衰老细胞(Sen (XRA)被注入肾上腺酮(C1)或皮质醇(C2)中描述图1的传奇。 The conditioned media were then assayed for ability to stimulate T47D human breast cancer cells to invade a basement membrane, as described in the Experimental Procedures.
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