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2012年3月,46(3):283 - 9。
doi: 10.1165 / rcmb.2011 - 0249摄氏度。 Epub 2011 9月15日。

肺切除术后血管生成过程中CD34+祖细胞向内皮细胞的转变

从属关系
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肺切除术后血管生成过程中CD34+祖细胞向内皮细胞的转变

吴克群Chamotoet al。 呼吸细胞摩尔生物学 2012年3月
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摘要

在许多物种中,肺切除术引发代偿性肺生长,不仅导致肺容量增加,而且肺泡数量增加。相关的肺泡血管生成是否涉及血源性祖细胞的贡献尚不清楚。为了鉴定和表征血源性祖细胞对小鼠肺切除术后肺生长的影响,我们研究了左侧肺切除术后野生型和野生型/绿色荧光蛋白(GFP)共生小鼠。在肺切除术后21天内,肺内皮细胞数量增加了3.2倍。总内皮细胞的增加与CD34(+)内皮细胞数量增加7.3倍有关。17%的CD34(+)内皮细胞活跃增殖,而CD34(-)内皮细胞只有4.2%。使用野生型/GFP共生小鼠,我们证明了73.4%的CD34(+)细胞来源于外周血。此外,凝集素灌注研究表明,来自外周血的CD34(+)细胞几乎均匀地纳入肺血管系统。最后,CD34(+)内皮细胞表现出类似的特征,但相对于CD34(-)内皮细胞具有增强的转录活性。我们得出结论,血源性CD34(+)内皮祖细胞具有活跃的细胞分裂和转录特征,在代偿性肺生长过程中转变为常驻内皮细胞。

数据

图1所示。
图1所示。
肺切除术后肺的细胞组成。经酶解后,肺消化细胞总数(一个开放的圆)及CD31+(CD45)内皮细胞(B固体圆)在肺切除术后0、7、14和21天(n= 4)。假手术小鼠肺消化细胞总数在肺切除术后7天测定(灰色的广场而且三角形n= 4)。误差线反映平均值±1标准差。(C)流式细胞仪门定义CD34蓝色的)及CD34+紫色的内皮细胞均为CD45和CD31+.(D而且E) CD34+基于同型对照,内皮细胞的统计置信水平为0.005。
图2。
图2。
频率(一个开放的圆)和绝对数字(B开放的圆)的CD34+在肺切除术后0、3、7、14和21天,用流式细胞术检测肺消化的内皮细胞(n= 4).假肺切除术对照(灰色的方块)。误差线反映平均值±1标准差。(C) CD31的细胞周期谱+肺切除术后第7天内皮细胞。酶切法获得细胞,流式细胞仪和细胞周期软件(ModFit;Verity软件屋)(P< 0.006;n= 3)。D而且E)通过光散射门控排除消解碎片后,通过Marquardt非线性最小二乘分析对ModFit模型组件进行自动分析,排除团聚体(Agg.;绿色)和识别的S相(S;灰色箭头)和G2期(G2;灰色箭头)细胞在第七天。
图3。
图3。
血源性CD34的共生证明+肺切除术后第7天内皮细胞。(一个)在野生型/GFP的野生型配对中进行左肺切除术的实验设计示意图+共生双胞胎(C57/B6)。在左肺切除术前28天建立异种共生。其余肺在肺切除术后7天进行研究。(B抗GFP亲和素-生物素复合物(ABC)免疫组化染色显示绿色荧光蛋白+肺泡间隔内的细胞。肺消化的流式细胞仪显示绿色荧光蛋白+CD45细胞C)及CD31+D).(E而且FCD31分析+肺内皮细胞显示大部分GFP的表达发生在CD34+内皮细胞群(P< 0.01;n= 5)。
图4。
图4。
CD34表型+和CD34肺内皮细胞,肺切除术后7天。门控后排除CD45+细胞CD31+内皮细胞分别分析为CD34一个CE,G)及CD34+BDF,H)的人口。用抗血管内皮生长因子受体- 1 (VEGFR1)单克隆抗体(mAb) (一个而且B)、抗vegfr2单抗(C而且D)、抗cxcr4单抗(E而且F)、抗lyve -1单抗(G而且H),如M . aterials和 治疗.VEGFR1和LYVE-1抗原表达显著(P< 0.0001)。图示单个小鼠的代表性直方图。
图5。
图5。
肺切除术后小鼠血管内膜细胞的血管内标记。第7天将生物素化凝集素注入去肺小鼠尾静脉,循环10分钟后冲洗和收获。消化后的肺细胞用抗cd45单抗、抗cd31单抗、抗cd34单抗和亲和素- pe - cy7染色。流式细胞术分析数据(见M aterials和 治疗).(得了) CD31+CD45用抗cd34研究内皮细胞群(紫色的)和avidin-PE-Cy7检测凝集素结合。(D-F)抗cd31和凝集素的双参数直方图Lycopersicon esculentum(曼哈顿)(D),Bandeiraea simplicifolia-1 (bs-1) (E),萝藦凝集素(F).(胃肠道)显示LEL、BS-1和RCA结合的单参数直方图,便于比较凝集素与内皮细胞的结合;灰色的表示凝集素控制样本(C).CD34+内皮细胞(紫色的)及CD34内皮细胞(蓝色的)与凝集素对照(灰色的).
图6。
图6。
血管生成相关基因的表达(一个)和干细胞信号基因(B)在CD31+肺切除术后的细胞(见M aterials和 治疗).CD34+和CD34内皮细胞基因转录与无关的肺切除术后CD31进行比较CD11b细胞群(假定为上皮细胞和平滑肌细胞)。通过细胞分选分离比较细胞群,定量RT-PCR鉴定转录谱。来自CD34的基因光棒)及CD34+黑暗的酒吧)内皮细胞表达有统计学意义(t测试中,P< 0.05)。每个数据点代表每个基因的3-5只小鼠的三倍或四倍阵列。

引用的19文章

  • 再生肺泡导管细胞的单细胞转录谱分析。
    Ysasi AB, Bennett RD, Wagner W, Valenzuela CD, Servais AB, Tsuda A, Pyne S, Li S, Grimsby J, Pokharel P, Livak KJ, Ackermann M, Blainey PC, Mentzer SJ。 Ysasi AB,等。 Front Med(洛桑)。2020年4月21日;7:112。doi: 10.3389 / fmed.2020.00112。eCollection 2020。 Front Med(洛桑)。2020. PMID:32373614 免费的PMC文章。
  • 保存血管生态位的肺上皮生物工程。
    Dorrello NV, Vunjak-Novakovic G。 Dorrello NV,等。 Front Bioeng生物技术,2020年4月15日;8:269。doi: 10.3389 / fbioe.2020.00269。eCollection 2020。 前线生物科技,2020。 PMID:32351946 免费的PMC文章。 审查。
  • 肺内血管生成。
    埃尔德里奇L,瓦格纳EM。 Eldridge L等人。 物理学报,2019年2月;597(4):1023-1032。doi: 10.1113 / JP275860。Epub 2018 8月18日。 物理学报,2019。 PMID:30022479 免费的PMC文章。 审查。
  • 令人困惑的代偿性肺生长机制。
    Mentzer SJ。 Mentzer SJ。 干细胞研究,2018年3月31日;5:8。doi: 10.21037 / sci.2018.03.01。eCollection 2018。 干细胞研究,2018。 PMID:29682515 免费的PMC文章。 没有摘要。
  • 代偿性肺生长过程中的肺泡间隔模式:第二部分实质压力梯度的影响。
    张志刚,张志刚,张志刚。 Haber S,等。 《理论生物学》2017年5月21日;421:168-178。doi: 10.1016 / j.jtbi.2017.03.019。Epub 2017 3月28日。 《理论生物学》,2017。 PMID:28363864 免费的PMC文章。

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