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. 2010年7月23日；33(1):96-105.
doi: 10.1016 / j.immuni.2010.06.016。

I型干扰素调节呼吸道病毒攻击时记忆性CD8(+) T细胞的溶解活性

雅各E Kohlmeier1., 非常Cookenham, 艾伦·D·罗伯茨, 香农C米勒, 大卫L林地
从属关系
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I型干扰素调节呼吸道病毒攻击时记忆性CD8(+) T细胞的溶解活性

雅各E Kohlmeier等 免疫. .
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摘要

肺气道中的记忆性CD8(+) T细胞通过限制早期病毒复制提供对继发性呼吸道病毒挑战的保护。在这里，我们证明，尽管呼吸道驻留的记忆CD8(+) T细胞的溶细胞能力较差，但在回忆反应早期征募到呼吸道的记忆CD8(+) T细胞显示出明显增强的溶细胞能力。这种增强的溶解活性不需要同源抗原刺激，而是依赖于STAT1转录因子信号通过干扰素受体(Ifnar1)，导致颗粒酶B蛋白在小鼠和人类病毒特异性T细胞中不依赖抗原的表达。通过Ifnar1信号通路，增强肺气道中记忆性CD8(+) T细胞的溶解活性和控制早期病毒复制是必需的。这些发现表明先天炎症信号直接作用于记忆T细胞，使它们一旦进入感染组织就能迅速摧毁被感染的宿主细胞。

数据

图1
图1.内存CD8+在病毒感染后被招募到呼吸道的T细胞增强了溶解活性
C57Bl/6小鼠感染仙台病毒后休息45 d。然后用PBS或x31流感病毒和CD8攻击小鼠+3 d后用细胞分选法纯化T细胞。(一)CD8排序+来自BAL的T细胞与同源基因(CD45.1)孵育+)SenNP脉冲靶细胞324 - 332（CFSE）罗)或γHV p79524-531（CFSE）你好) 5小时。活靶细胞(CD45.1+碘化丙啶-)，采用流式细胞仪分析SenNP靶蛋白与γHV p79靶蛋白的比值，计算特异性裂解。每个处理的代表性流式细胞术图均已显示。(B)与CD8孵卵后sennp脉冲靶点特异性裂解百分率+来自pbs处理(圆形)或x31感染(方形)小鼠的BAL T细胞具有不同的效应靶比(E:T)。数据代表了5个独立实验，每组5-8个重复井。
图2
图2。Granzyme B蛋白在记忆CD8中表达上调+T细胞对炎症的反应
C57Bl/6小鼠感染仙台病毒后休息45天，再接种x31流感病毒。(A) x31攻毒后0-5天，BAL、肺和脾脏中具有代表性的同型(阴影直方图)或颗粒酶B(开放直方图)抗体染色。所有地块都由SenNP控制324 - 332Kb+细胞。(B) gzmB的频率+总SenNP中的细胞324 - 332Kb+BAL、肺和脾脏中的细胞。每个符号代表一个单独的鼠标，通过将每个时间点与第0天的值进行比较来确定显著性。（C） gzmB的频率+总SenNP中的细胞324 - 332Kb+Poly I:C(开放条形)或CpG(封闭条形)给药后BAL中的细胞。(D) CD8排序+流感刺激后第3天仙台记忆小鼠BAL的T细胞以4:1 E:T比值与同源靶细胞孵育，并使用细胞毒性途径的指示抑制剂。每个符号代表复制井特异性裂解的百分比。这些数据代表了每组至少5只老鼠的4个独立实验(A和B)，每组4只老鼠的3个独立实验(C)，或每处理5口井的2个独立实验(D)。
图3
图3。颗粒酶B蛋白表达和记忆T细胞溶解活性仅限于最近被招募到气道的细胞
（A） C57Bl/6小鼠感染仙台病毒，并在感染x31流感病毒前休息45天。地块在SenNP上设置门控324 - 332Kb+gzmB在气道滞留者(CD11a)中表达罗)和最近招募的(CD11a你好)仙台内存CD8+流感x31攻击后第0-5天的T细胞。根据同型染色设置象限门。（B） 流感激发后第0-5天，气道常驻（开放栏）和最近招募（阴影栏）仙台特异性细胞的频率以平均值±标准偏差表示。（C） CD8+流感刺激后第3天仙台记忆小鼠BAL中的T细胞根据CD11a表达被分为呼吸道常驻和近期招募的人群。sennp脉冲靶点特异性裂解的百分比用图表表示为每个种群在指示的E:T比值下的平均值±s.d.。这些数据代表了3个独立实验，每组4只小鼠(A和B)或每组5个重复孔(C)。
图4
图4。STAT1是gzmB蛋白在memory CD8中不依赖抗原表达所必需的+T细胞
混合BM嵌合体产生于WT同源基因(CD45.2)-),Stat1 -/-感染仙台病毒的献血者，在x31流感挑战前休息了45天。(A) gzmB蛋白在WT和Stat1 -/-Sendai-specific CD8记忆+在流感爆发前(第0天，上图)或第3天(下图)肺部的T细胞。阴影直方图为同型染色，而开放直方图为gzmB染色。(B) WT(开杆)的频率Stat1 -/-(阴影条)仙台专用内存CD8+在指定时间点表达gzmB的T细胞以平均值±s.d表示(* p<0.05;* * p < 0.005)。这些数据代表了3个独立的实验，每个时间点3-5只老鼠。
图5
图5。通过Ifnar1进行信号转导是gzmB蛋白表达和记忆CD8活性的必要条件+肺气道中的T细胞
WT和细胞因子受体缺陷的供体产生混合骨髓嵌合体(Ifnar1 -/-,Ifngr1 -/-,Il27ra -/-)感染仙台病毒，并在流感x31攻击前休息45-60天。（A） 细胞因子受体缺陷型（上图）和WT（下图）仙台特异性记忆CD8的代表性同型（阴影直方图）和gzmB（开放直方图）染色+x31激发后第3天各组嵌合体气道中的T细胞。直方图在SenNP上选通324 - 332Kb+细胞。(B-D) WT(开放条)和细胞因子受体缺陷(阴影条)gzmB的频率+不同组织中的仙台特异性记忆T细胞在x31挑战前或后3天(B)Ifnar1 -/-, (C)Ifngr1 -/-，及（D）Il27ra --/-混合型BM嵌合体(* p<0.01)。(E) WT表型分析(CD90.1)+、黑),Ifnar1 -/-(CD90.1-仙台特定的记忆CD8+x31攻毒后第3天混合型BM嵌合体气道内的T细胞。(F) WTIfnar1 -/-CD8+x31攻毒后第3天，从混合BM嵌合体仙台记忆小鼠气道中分离T细胞。sennp脉冲靶细胞特异性裂解百分率，与分选的WT(开放圈)孵育5小时或Ifnar1 -/-CD8(阴影圈)+T细胞以每一种群在指示的E:T比值下的平均值±s.d.表示。这些数据代表了3个独立实验，每个时间点至少5只小鼠。
图6
图6。I型干扰素足以诱导小鼠和人病毒特异性记忆CD8中gzmB蛋白的表达+T细胞
(A) C57BL/6小鼠感染仙台病毒，休息45 d。小鼠的脾细胞被孵育体外有或没有IFN-α或IFN-β (2×104.用流式细胞仪检测gzmB蛋白表达。SenNP上的同型(阴影直方图)或抗gzmb(开放直方图)门控具有代表性324 - 332Kb+细胞。(B)与对照组相比，IFN-α或IFN-β处理后gzmB表达的百分比变化。每个符号代表一个单独的小鼠，使用配对t检验确定统计学意义。(C)识别流感特异性记忆CD8的代表性染色和门控策略+从健康捐献者的外周血中提取T细胞(D)总CD8中A2 flum1特异性细胞的频率+T细胞和gzmB的频率+每个供体的fluum1特异性细胞在之前被绘制出来体外刺激。(E) A2 FluM1中gzmB蛋白的代表性染色+细胞跟随体外IFN-α或IFN-β的培养(2×104.单位/毫升)。(F)与对照样品相比，IFN-α或IFN-β处理后gzmB表达的百分比变化被绘制出来。每个符号代表一个个体供体，使用配对t检验确定统计学意义。这些数据代表了3个(A,B)或2个(C-F)独立实验。
图7
图7。当同源抗原存在时，Ifnar1信号需要最大限度的gzmB蛋白表达和T细胞介导的保护
WT×Ifnar1 -/-混合BM嵌合体感染PR8流感病毒，在x31流感攻击前45天休息。(A) gzmB的频率+细胞之间的WT(开放条)或Ifnar1 -/-（阴影条）FluNP特异性T细胞的平均值为±s.d.（*p<0.02）。（B） 用来自WT（C57BL/6）或BM的BM产生完整的BM嵌合体Ifnar1 -/-供体(BM未混合)，感染PR8流感或仙台病毒，休息60天。所有小鼠用x31型流感病毒攻击，并在第3天测定病毒滴度。每个符号代表一个单独的鼠标。这些数据代表了3个(A，每个时间点5只小鼠)或2个(B)独立实验。
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评论

  • 俗话说“有备无患”。
    La Gruta N, Turner SJ。 La Gruta N等。 豁免。2010年7月23日;33(1):5-6。doi: 10.1016 / j.immuni.2010.07.007。 免疫2010 PMID:20643333

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