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。 2010年4月,34(4):474 - 9。
DOI：10.1016 / j.dci.2009.12.008。 电子出版2009年12月28日。

分离和鸡肺间质基质细胞的特性及其易感性禽流感病毒

马赫什·卡特里1， 蒂莫西·d·奥布莱恩， Sagar M Goyal， Jagdev中号夏尔马
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分离和鸡肺间质基质细胞的特性及其易感性禽流感病毒

马赫什·卡特里等。 Dev Comp Immunol。 。
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摘要

在本研究中，我们从1 ~ 2周大的鸡肺中分离并鉴定了间充质基质细胞(MSCs)。显微镜下，培养的细胞呈成纤维细胞样形态。这些细胞表达CD44、CD90、CD105和转录因子PouV，后者已被证明是干细胞自我更新和多能性的关键。鸡间充质干细胞的多能性表现在其能进行成脂和成骨分化。与鸡骨髓间充质干细胞和哺乳动物骨髓间充质干细胞一样，鸡肺间充质干细胞具有免疫调节活性，并在响应有丝分裂刺激时显著抑制T细胞的增殖能力。接下来，我们检查了这些细胞对H1N1和H9N5禽流感(AI)病毒的易感性。肺间充质干细胞被证明表达已知的流感病毒-2,3和-2,6唾液酸受体，并支持禽流感H1N1和禽流感H9N5病毒株的复制。病毒感染骨髓间充质干细胞导致细胞裂解、细胞因子和趋化因子的产生。进一步研究鸡和其他哺乳动物肺间充质干细胞的特性，有助于了解传染性和非感染性肺部疾病的发病机制以及肺损伤修复机制。

数据

图1
图1
鸡肺间充质干细胞的研究。（A）的MSC的形态从肺的。（B）油红O染色后从肺来源的MSC的成脂分化21天充满脂质的囊泡（红色）。（C）冯Kossa染色为钙化矿物结节（黑色）之后从肺来源的MSC的成骨分化的21天。鸡肺MSC的（d）表型。逆转录 - 聚合酶链式反应使用来自肺的MSC与特异性引物提取的总RNA进行的。中心列显示与来自肺的MSC的总RNA的结果。总RNA从用作CD44，CD90和CD105的表达和用于PouV阳性对照正常鸡脾细胞制备的，从骨髓的MSC分离的总RNA用作阳性对照（左柱）。（对于这个图例颜色的引用解释，读者可以参考文章的网页版。）
图2
图2
的MSC抑制T细胞增殖。脾细胞（2×10五)，在MSCs(2×10)存在的情况下，用ConA(5°g/ml)或PMA/ionomycin刺激4)从BM和肺部。培养48h，最后培养6h [3将TdR添加到孔中。结果以增殖百分比表示，阳性对照(无间充质干细胞时)为100%。值为三次测定的平均值±标准差。这些数据代表了三个独立的实验。
图3
图3
AI病毒在肺间充质干细胞中的复制。（A）的MSC表达α-2,3-和α-2,6-连接的唾液酸受体。在盖玻片上培养的MSC固定，并用生物素化的染色怀槐外源凝集素II（MAA）为特定的α-2,3-连接的唾液酸受体和Sambucus尼亚加拉凝集素(SNA)，特异性的，针对的是1 -2,6连接唾液酸受体，随后添加ABC试剂。棕色表示正反应。(B) MSCs感染H1N1或H9N5, MOI为1。用滴定法在MDCK细胞中测定感染培养上清中的病毒产量。(C)采用台盼蓝染色排除法计数活细胞和死细胞，评估病毒诱导的细胞死亡。数值为重复测定的平均值±标准差。这些数据代表了三个独立的实验。(D)在24 hpi时，用IFA检测AI病毒蛋白。（对于这个图例颜色的引用解释，读者可以参考文章的网页版。）
图4
图4
病毒诱导骨髓间充质干细胞凋亡。MSCs感染H1N1或H9N5病毒，MOI为1。用TUNEL法检测24hpi病毒诱导的细胞凋亡。箭头表示凋亡细胞(棕色)。（对于这个图例颜色的引用解释，读者可以参考文章的网页版。）
图5
图5
AI病毒感染可诱导鸡肺间充质干细胞的炎性细胞因子。MSCs感染H1N1或H9N5。在指定的时间后，提取细胞总RNA，用IL-6、IL-8或28S rRNA的特异性引物进行qrt - pcr。比较周期阈值(CT)法测定IL-6和IL-8 mRNA的定量。从未感染的对照培养物中分离出的RNA作为每个时间点的参考样本(校准器)。信使rna浓度的相对变化(ΔCT)为每一个感染病毒的样本然后从区别决定的校准器CT及CT感染病毒的样本。2计算出IL-6和IL-8转录本表达比未感染对照增加了2倍ΔΔCT方法。这些数据代表了两个独立的实验。
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参考文献

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