doi: 10.1113 / jphysiol.2009.180372。
活化蛋白激酶抑制迷航频道
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- PMID:19840997
- PMCID:PMC2808542
- DOI:10.1113 / jphysiol.2009.180372
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活化蛋白激酶抑制迷航频道
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文摘
活化蛋白激酶(AMPK)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶激活条件,增加安保:ATP比例。在颈动脉体瘤细胞,AMPK动脉的变化被认为是联系O(2)激活的血管球细胞的抑制背景不明K(+)通道。AMPK调制的个人背景K(+)渠道没有被描述。在这里,我们描述的影响激活AMPK在重组任务1,task 3, TREK-1和TREK-2背景K(+)渠道在HEK293细胞中表达。我们发现TREK-1和TREK-2渠道而不是任务1或task 3通道由AMPK抑制。AMPK-mediated抑制迷航涉及关键丝氨酸残基糖基,也被认为是重要的PKA和PKC信道调制;抑制TREK-1需要ser - 300和ser - 333和抑制TREK-2需要ser - 326和ser - 359。代谢抑制通过叠氮化钠可以抑制迷航和任务通道。叠氮化的影响在长途跋涉挡住后续通道抑制AMPK和减毒的显性负催化亚基的表达AMPK (dnAMPK),这表明代谢压力调节迷航渠道的AMPK机制。相比之下,抑制任务通道dnAMPK叠氮化是影响表达式,提出一种AMPK-independent机制。 In addition, prolonged exposure (6-7 min) to hypoxia ( = 11 +/- 1 mmHg) inhibits TREK channels and this response was blocked by expression of dnAMPK. Our results identify a novel modulation of TREK channels by AMPK and indicate that select residues in the C-terminus of TREK are points of convergence for multiple signalling cascades including AMPK, PKA and PKC. To the extent that carotid body O(2) sensitivity is dependent on AMPK, our finding that TREK-1 and TREK-2 channels are inhibited by AMPK suggests that TREK channels may represent the AMPK-inhibited background K(+) channels that mediate activation of glomus cells by hypoxia.
数据
从HEK 293细胞全细胞电流记录瞬时转染后任务1和任务3。电导的痕迹(线性斜率−30至+ 5 mV)作为时间的函数显示特征反应任务1 (一个),task 3 (B)和heteromeric任务通道(C)浴pH值的变化;酸化从酸碱7.3到5.9抑制任务通道而碱性化pH值8.4激活通道。在pH值为7.3,3 - 5分钟的应用爱卡(2 m
米 对任务通道电导)没有明显的影响。Insets,电流电压(我- - - - - -V)关系特征的任务1和任务3得到的去极化电压斜坡命令(130−在0.2 V s + 20 mV−1在控制条件()一个)和暴露在爱卡(b)。酒吧图表显示平均电导(n= 5)相关任务的渠道在爱卡的缺失和存在的pH值7.3。这些结果表明,AICAR-mediated激活AMPK并不影响渠道重组活动任务。
一个,跟踪整个细胞的电导过程显示了一个典型的时间抑制TREK-1通过浴应用爱卡(2 m
米 )。插图,我- - - - - -V块完整的细胞TREK-1当前诱发斜坡命令(−130 + 20 mV在0.2 V−1在控制()一个)和在爱卡(b)。条形图的平均数据(n= 13)表明,2分钟暴露在爱卡减少TREK-1电导。B代表电导跟踪显示,TREK-2抑制的时间进程爱卡(2 m
米 )。插图,我- - - - - -V块完整的细胞TREK-2斜坡电流在控制(一个)和在爱卡(b)。条形图的平均数据(n= 7)表明,2分钟暴露在爱卡减少TREK-2电导。爱卡TREK-1和TREK-2的影响是可逆的大多数细胞检测。
一个,代表电导跟踪显示,阿拉巴马州替换在ser - 333 (S333A)阻碍AICAR-mediated TREK-1的抑制作用。插图,我- - - - - -V的情节S333A突变TREK-1目前在控制(一个)和暴露在爱卡(b)。平均数据(n= 6)显示,2分钟暴露在爱卡没有影响S333A变异TREK-1电导。B电导跟踪表明,阿拉巴马州替换在ser - 300 (S300A)也封锁AICAR-mediated TREK-1的抑制。插图,我- - - - - -V的情节S300A突变TREK-1目前在控制(一个)和暴露在爱卡(b)。平均数据(n= 9)表明,2分钟暴露在爱卡没有影响S300A变异TREK-1电导。C,代表电导跟踪显示,阿拉巴马州替换ser - 326和ser - 359 (S326A / S359A) AICAR-mediated抑制TREK-2 TREK-2通道块。插图,我- - - - - -V情节S326A / S359A突变TREK-2目前在控制(一个)和暴露在爱卡(b)。平均数据(n= 5)表明,3分钟暴露在爱卡没有影响S326A / S359A变异TREK-1电导。
全细胞电流记录从HEK细胞转染野生型和突变TREK-1 AICAR-resistant (S333A S300A)或TREK-2 (S326A / S359A)渠道接触代谢压力中叠氮化钠的形式。Aa、微量的野生型TREK-1电导和熔体温度显示加热24°C到30°C增加TREK-1活动。在30°C浴应用叠氮化钠(10μ
米 )引起的快速、可逆抑制TREK-1电导。插图,我- - - - - -V块TREK-1目前获得30°C在控制条件下(一个)和叠氮化的存在(b)。Ab和交流,熔体温度(上)和全细胞从S300A电导(Ab)和S333A (交流)突变TREK-1频道显示加热24°C到30°C增加完整的细胞突变通道电导的细胞表达。在30°C浴应用叠氮化钠(10μ
米 )没有影响S300A (Ab)或S333A (交流)电导。插图,我- - - - - -V关系S300A和S333A突变TREK-1渠道获得控制在30°C条件(一个)和叠氮化的存在(b)。英航、微量的野生型TREK-2电导和熔体温度显示加热24°C到30°C增加TREK-2活动。在30°C接触叠氮化钠(10μ
米 )引起的快速、可逆抑制TREK-2电导。插图,我- - - - - -V块TREK-2目前获得30°C在控制条件下(一个)和叠氮化的存在(b)。Bb、浴温度(上)和电导跟踪从细胞表达TREK-2 S326A / S359A突变通道(底部)表明,突变通道激活变暖接触叠氮化钠(10μ
米 在30°C)没有对电导的影响。插图,我- - - - - -V的关系TREK-2 S326A / S359A获得的突变体在30°C控制条件(一个)和叠氮化的存在(b)。C,平均数据总结叠氮化钠对野生型的影响(n= 6)和突变TREK-1频道(S333An= 6;S300A,n= 3)以及野生型(n= 3)和S326A / S359A突变(n= 4)TREK-2频道。
一个的野生型TREK-1电导、微量dnAMPK和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加TREK-1活动。在30°C浴应用叠氮化钠(10μ
米 对通道电导)没有明显的影响。插图,我- - - - - -V块TREK-1电流的存在dnAMP获得控制在30°C条件(一个)和叠氮化的存在(b)。条形图的平均数据(n= 4)显示抑制百分比TREK-1仅靠叠氮化和dnAMPK的存在。B的野生型TREK-2电导、微量dnAMPK和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加TREK-1活动。在30°C浴应用叠氮化钠(10μ
米 对通道电导)没有明显的影响。插图,我- - - - - -V块TREK-2电流的存在dnAMP获得控制在30°C条件(一个)和叠氮化的存在(b)。条形图的平均数据(n= 3)显示抑制百分比TREK-1仅靠叠氮化和dnAMPK的存在。
一个野生型的痕迹,TREK-1电导和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加TREK-1电导。在30°C接触叠氮化钠(10μ
米 )抑制TREK-1电导。继续存在的叠氮化钠、浴对TREK-1电导爱卡的应用没有影响。插图,我- - - - - -VTREK-1关系目前在控制条件下获得30°C (一个仅在接触叠氮化)和(b叠氮化)和在爱卡(c)。条形图总结了抑制百分比仅靠叠氮化和爱卡叠氮化物的存在。B野生型的痕迹,TREK-2电导和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加TREK-1电导。在30°C接触叠氮化钠(10μ
米 )抑制TREK-2电导。继续存在的叠氮化钠、浴对TREK-2电导爱卡的应用没有影响。插图,我- - - - - -VTREK-2关系目前在控制条件下获得30°C (一个仅在接触叠氮化)和(b叠氮化)和在爱卡(c)。条形图总结了抑制百分比仅靠叠氮化和爱卡叠氮化物的存在。
一个、微量的TASK1-TASK-3电导和熔体温度显示加热24°C到30°C增加渠道的活动任务。在30°C 3分钟接触叠氮化钠(10μ
米 )抑制通道电导。插图,我- - - - - -V块heteromeric任务目前获得30°C在控制条件下(一个)和叠氮化钠的存在(b)。B、微量的TASK1-TASK-3电导dnAMPK和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加渠道的活动任务。在30°C接触叠氮化钠(10μ
米 )抑制通道电导。插图,我- - - - - -V块heteromeric任务当前的dnAMP获得控制在30°C条件(一个)和叠氮化钠的存在(b)。C条形图的平均数据(n= 4)显示抑制百分比heteromeric任务单靠叠氮化钠通道和dnAMPK的存在。
一个、微量的野生型TREK-1电导和熔体温度显示加热24°C到30°C增加TREK-1活动。在30°C暴露于低氧(浴
= 11±1毫米汞柱)6分钟抑制通道电导。插图,我- - - - - -V块TREK-1目前获得30°C控制条件(一个),在暴露于低氧(b)。B的野生型TREK-1电导、微量dnAMPK和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加TREK-1活动。在30°C暴露于低氧(
= 11±1毫米汞柱)6分钟没有影响通道电导。插图,我- - - - - -V块TREK-1电流的存在dnAMP获得控制在30°C条件(一个),在暴露于低氧(b)。C条形图的平均数据(n= 4)显示抑制百分比TREK-1仅靠缺氧和dnAMPK的存在。
= 11±1毫米汞柱)6分钟抑制通道电导。插图,我- - - - - -V块TREK-1目前获得30°C控制条件(一个),在暴露于低氧(b)。B的野生型TREK-1电导、微量dnAMPK和熔体温度显示加热从24°C到30°C增加TREK-1活动。在30°C暴露于低氧(= 11±1毫米汞柱)6分钟没有影响通道电导。插图,我- - - - - -V块TREK-1电流的存在dnAMP获得控制在30°C条件(一个),在暴露于低氧(b)。C条形图的平均数据(n= 4)显示抑制百分比TREK-1仅靠缺氧和dnAMPK的存在。类似的文章
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