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． 2009年7月2;5(1):54 - 63。
doi: 10.1016 / j.stem.2009.05.003。

静脉内HMSCs改善小鼠心肌梗塞，因为肺中的细胞被激活分泌抗炎蛋白Tsg-6

Ryang华李1， 安德烈是普林， Min Jeong Seo.， 丹尼尔·J哥打， 乔妮Ylostalo， 本杰明L拉森， 劳拉Semprun-Prieto， 帕特里士德拉菲诺州， 达尔文J Prockop
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静脉内HMSCs改善小鼠心肌梗塞，因为肺中的细胞被激活分泌抗炎蛋白Tsg-6

Ryang华李et al。 细胞干细胞． ．
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摘要

采用人DNA和mRNA的定量检测来检验静脉(iv)注入人多能基质细胞(hMSCs)可以增强组织修复而不进行显著移植的悖论。将2 × 10(6) hMSCs注入小鼠体内后，大部分细胞以栓子形式滞留在肺内。肺细胞消失，半衰期约为24小时，其他6个组织中出现小于1000个细胞。肺组织中hMSCs多基因表达上调，抗炎蛋白TSG-6大幅增加。心肌梗死后，静脉注射hMSCs，而不是经TSG-6 siRNA转导的hMSCs，可以减少炎症反应，缩小梗死面积，改善心功能。静脉注射重组TSG-6也能减少炎症反应和缩小梗死面积。结果表明，动物模型和患者静脉输注MSCs后的改善至少部分解释了MSCs分泌TSG-6的激活。

数字

图1
图1.注入小鼠的HMSC的命运的测定
（a）I.V之后的血液中的人ALU序列清除。输注约2×106hMSCs成老鼠。值为平均值±SD;n = 6。(B) 7个器官中Alu序列实时PCR检测的标准曲线。值表明ΔΔCt在同一样本上寻找小鼠/人GAPDH基因和Alu序列引物。(C)静脉滴注约2 × 10的人Alu序列15min后的组织分布6hMSCs成老鼠。值为平均值±SD;n = 6.（d）用于GAPDH的人mRNA的实时RT-PCR测定的标准曲线。值表明ΔΔCt在同一样品上寻找小鼠/人GAPDH基因的引物和人类特异性GAPDH的cDNA。(E)静脉滴注约2 × 10的hMSCs后，肺和其他6个组织的动力学6hMSCs。值为平均值±SD;n = 6。(F)静脉滴注约1 × 10后心脏内hMSCs的外观6HMSCS在左前期下降冠状动脉永久连接后1天。
图2.
图2。静脉输注骨髓间充质干细胞后小鼠肺微阵列分析的热图
大约2 × 106将hMSCs注入静脉，10小时后回收肺RNA，用于小鼠特异性和人类特异性微阵列(Affymetrix, Santa Clara, CA)检测。数据过滤后进行杂交(CV > 0.5和call > 33%)，用Microarray Suite 5.0程序进行分析，归一化后值为1，方差为3 SD(+3，红色;3、蓝色)。指出了基因的本体论分类。有表达差异的基因数量显示在方框中。(A)小鼠特异性芯片检测。(B)在人类特异性芯片上检测相同的RNA。符号:con，来自对照小鼠的肺;hMSCs con，提取RNA前添加到对照小鼠肺中的hMSCs样本;骨髓间充质干细胞静脉滴注，输注骨髓间充质干细胞10小时后小鼠肺标本。
图3.
图3。激活hMSCs表达TSG-6
(A)静脉滴注2 × 10蛋白10小时后，实时RT-PCR检测肺内的人特异性mrna6hMSCs。值是折叠的培养的HMSC的值增加，由ΔΔC归一化t对于HGAPDH。符号：HMSCS Con，在提取RNA之前从对照鼠中添加到肺中的HMSC样品;HMSCs I.v.1和2，在i.v之后，来自两只小鼠的肺的样品10小时。输注HMSCs。（b）小鼠肺中人TSG-6的实时RT-PCR测定。大约2 × 106在MI后1小时(IV-MI)将hMSCs注入幼稚小鼠(IV-nor)或小鼠(IV-MI)，灌注后0.25-24小时肺恢复。值为±SD;N = 2或3对正常小鼠;MI小鼠的n = 6。(C) Real-time RT-PCR检测来自同一供体的hMSCs和人成纤维细胞中TSG-6的含量，在含有10 ng/ml TNF-α的无血清培养基中培养24或48小时。结果显示了同一细胞的两次传代。值为±SD;n = 3。(D) ELISA检测TSG-6在含10 ng/ml TNF-α的无血清培养基中培养48小时的hMSCs和人成纤维细胞。值为±SD; n = 3. (E) Real-time RT-PCR assays TSG-6 of control hMSCs (Con), hMSCs treated with transfection reagents only (no siRNA), hMSCs transfected with a scrambled siRNA (scr siRNA), or hMSCs transduced with TSG-6 siRNA (TSG-6 siRNA). Cells were incubated with or without 10 ng/ml TNF-α for 6 hr. Values are ± SD; n = 3. (F) ELISA assays for TSG-6 in medium after incubation of cells with or without TNF-α for 48 hr. Symbols are as in (E). Values are ± SD; n = 3.
图4.
图4。血清和心脏的测定
(A)心肌梗死后48小时血清肌钙蛋白I测定，值为±SD;**p < 0.01，各组n = 3只(正常)或6只(MI)小鼠。(B)心肌梗死后48小时血清纤溶酶活性。符号:正常，幼稚小鼠;−MI只;hMSCs, 2 × 106HMSCS注入I.v.MI后1小时;SCR siRNA，2×106心肌梗死后1小时静脉注入扰乱siRNA转导的hMSCs;TSG-6 siRNA, 2 × 106心肌梗死后1小时静脉注射TSG-6 siRNA转导的hMSCs;心肌梗死后1小时和24小时静脉滴注30 μg rhTSG-6蛋白，值为±SD;**p < 0.01，每组n = 3只。n,不重要。(C)心肌梗死48小时后，明胶酶原凝胶检测心肌前基质MMP9和活性基质MMP9。图像相反。符号如(B)。(D和E)心肌梗死后48小时内心脏的粒细胞和单核细胞浸润。符号如(B)所示，但心肌梗死后1小时和24小时分别静脉滴注100 μg rhTSG-6蛋白。放大×4。比例尺，250 μm。值为±SD;每组N = 3或4。 **p < 0.001; N.S., not significant.
图5.
图5.梗塞大小的测定
将每种心脏从顶点切割到超过400个序贯5μm的部分中，并用Masson richrome染色。显示了每一个第二部分。额外的心脏样品如图S3所示。（A-E）符号如图4B所示，除了100μgRHTSG-6蛋白注入I.v.MI后1小时和24小时。（f）梗塞大小测量（％）通过中线长度测量从梗塞区域的第十段测量获得，总共每心脏20个部分（Takagawa等，2007）。值为±SD;每组n = 3或4只小鼠;***与MI控制相比，P <0.0001;与MI控制相比，N.S.不显着; *p < 0.05 for MI + MSCs versus MI + rhTSG-6.
图6.
图6.超声心动图测定MI后3周
(A)具有代表性的m型超声心动图。符号如图4B所示。(B)超声心动图数据的左室短缩分数(LVFS)和左室射血分数(LVEF)。值为±SD;每组N = 5或6;*p < 0.05 vs MI;n,不重要。
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  • 通过MSCS旋转再生来源。
    Pittenger M。 Pittenger M。 细胞干细胞。2009 7月2;5(1):8-10。doi: 10.1016 / j.stem.2009.06.013。 细胞干细胞。2009年。 PMID:19570508

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