跳转到主要内容页
访问键 NCBI主页 MyNCBI首页 主要内容 主导航
。 2008年7月,295 (1):l178 - 85。
doi: 10.1152 / ajplung.00009.2008。 Epub 2008年4月25日

血管紧张素转化酶2是保护性但在人类和实验性肺纤维化下调

李小鹏1， 玛丽亚·莫利纳，莫利纳， 阿迈勒·阿卜杜勒 - 哈菲兹， 维克多Uhal， 安东尼奥Xaubet， 布鲁斯·D Uhal
从属关系
免费PMC文章

血管紧张素转化酶2是保护性但在人类和实验性肺纤维化下调

李小鹏等。 肺细胞是物理的吗。 。
免费PMC文章
最爱

抽象

该实验室的早期工作表明，实验性肺纤维化的发病机制需要血管紧张素(ANG) II的局部生成，而ANG肽在特发性肺纤维化(IPF)患者的肺中表达较强。血管紧张素转换酶-2 (ACE-2)降解八肽ANG II形成七肽ANG1-7，从而限制ANG II积累。在此基础上，我们推测ACE-2对实验性肺纤维化具有保护作用，并可能在人类和实验性肺纤维化中下调。IPF患者肺活检标本中，ACE-2 mRNA和酶活性分别下降92% (P<0.01)和74% (P<0.05)。在经博莱霉素处理的大鼠和C57-BL6小鼠的肺中，ACE-2的mRNA和活性也同样降低。在暴露于低剂量博莱霉素的小鼠中，气管内给予ACE-2特异性小干扰rna (siRNAs)或竞争性的ACE-2抑制剂肽DX(600)可增强肺胶原积累(P<0.05)。无论是ACE-2 siRNA还是DX(600)均能显著提高小鼠肺组织中ANG II的含量，使其高于仅用博莱霉素诱导的水平。联合使用ANG II受体拮抗剂萨拉辛阻断了DX(600)诱导的肺胶原蛋白的增加。此外，通过渗透微泵将纯化的重组人ACE-2系统传递给小鼠，减弱了博莱霉素诱导的肺胶原积累。总之，这些数据表明，在人类和实验肺纤维化中，ACE-2的mRNA和活性都被严重下调，这表明ACE-2通过限制促纤维化肽ANG II的局部积累来预防肺纤维化。

数据

图。1。
图。1。
肽DX测定血管紧张素转换酶-2 (ACE-2)的活性及抑制作用600。一种：纯化的重组人ACE-2于Tris·HCl缓冲液系统（19）与所述荧光底物MCA-YVADAPK在10μM中测定（见 方法)。在相同的实验条件下评估了相同数量的纯化的ACE-2和白介素-1转化酶(ICE);注:在使用的缓冲系统中，测定未能检测到冰。横杠是均值±SE。乙：用合成肽抑制剂小鼠肺ACE-2的封锁。在小鼠肺匀浆ACE-2活性的合成肽DX的存在或不存在进行测定600(7)、ACE-2的竞争性抑制剂(见 方法)。注意在10基本上完全抑制-6M DX600。条是2次重复的手段。
图2中。
图2中。
ACE-2的mRNA，蛋白质的下调，以及在纤维化人肺的酶活性。一种：ACE-2和β-actin的mRNA，通过实时RT-PCR在活检标本进行定量从nonfibrotic（CTL）和特发性肺纤维化（IPF）的患者（参见 方法)。条是平均值±SE的ñ为IPF = 8和ñCTL = 6;*P<0.01，相对于CTL由学生Ť以及。乙：在正常（CTL）ACE-2蛋白的Western印迹和IPF肺活检。密度IPF样品与对照比较在显示少71％的蛋白质（ACE-2 /β肌动蛋白）（P<0.05，通过Student的Ť-测试）。C：ACE-2从nonfibrotic（CTL）在活检标本酶活性和IPF患者（参见 方法)。条是平均值±SE的ñ为IPF = 8和ñCTL = 6;*P<0.05，与CTL由学生Ť以及。
图3。
图3。
在实验性肺纤维化ACE-2的酶活性的下调。一种的：如在图1描述的从给定的博来霉素（BLEO）或无菌盐水的气管内instillates Wistar大鼠获得的全肺匀浆测定ACE-2的酶活性。注意ACE-2 BLEO给药后的时间逐渐减少。酒吧的手段ñ= 2。乙：博来霉素或盐水的气管内滴注后14天获得的从C57 / BL6小鼠全肺匀浆ACE-2的酶活性。条是平均值±SE的ñ= 4;*P<0.01，相对于CTL由学生Ť以及。看到 方法了解详情。
图4。
图4。
ACE-2 mRNA的下调和在实验性肺纤维化免疫活性蛋白。一种：ACE-2和β-actin的mRNA，通过实时RT-PCR在前面给出14天BLEO的气管内instillates或盐水，如在图从C57 / BL6小鼠中获得的总RNA提取物进行定量3.条是平均值±。东南ñ= 4，*P<0.01，相对于CTL由学生Ť以及。乙：ACE-2免疫反应性蛋白是通过在从同一小鼠得到的全肺匀浆Western印迹测定描述于一种。密度测定显示BLEO样品中的蛋白(ac -2/ actin)较对照组少64% (ñ= 2);见图3乙对于ACE-2活性的测量。
图5。
图5。
ACE-2的RNA介导的基因沉默降低了小鼠肺总ACE-2酶的活性和免疫反应性蛋白。一种：C57 / BL6小鼠接受特定的siRNA的气管内instillates小鼠ACE-2（siRNA）或加扰序列的RNA（CTL，见 方法)。二十四小时或7天后，全肺匀浆免疫印迹法对ACE-2进行分析和β-actin免疫反应的蛋白质。乙：ACE-2的酶活性是在测得的7天中使用的小鼠肺匀浆一种，如图1所示。条是平均值±SE的ñ= 4，*P<0.01，相对于CTL由学生Ť以及。
图6。
图6。
在肺ACE-2的用肽DX体内抑制600增强了依赖于血管紧张素II受体的机制实验性肺胶原积累和纤维化。一种：肽DX600（DX）或ANG II受体阻断剂沙拉新（SAR）与BLEO或无菌盐水溶媒（CTL）的低剂量气管内滴注到小鼠中一起;DX和SAR也reinstilled隔日其后。14天后，肺羟脯氨酸（HP）含量在整个肺匀浆进行测定。注意低剂量BLEO未能单独增加HP，而相比之下，在DX的存在被阻止由特区显著上升。条是平均值±至少3只动物的SE;*P<0.05，相对于CTL通过ANOVA和Student-Newman-Keuls检验。是：如上述处理小鼠一种用博来霉素，盐水载体，ACE-2抑制剂，或沙拉新，所有气管内给药。14天后，如所述进行组织学 方法。乙:小鼠肺正常。C：低剂量的博来霉素单独，气管内给药。d：博莱霉素+ DX600抑制剂。Ë：博莱霉素+ DX600+沙拉新。
图7所示。
图7所示。
在用siRNA肺ACE-2的体内沉默增强实验性肺胶原积累和纤维化。一种：针对ACE-2（siACE2）或加扰序列的RNA控制（siCTL）特异性siRNA溶解于纯化的小鼠肺表面活性剂，并用BLEO或盐水气管内灌输到小鼠肺在一起。该siACE2和siCTL 7天后reinstilled。BLEO给药后14天，小鼠经siACE2但不siCTL杀死肺癌HP的测量如图6注BLEO引起的肺部积聚HP的增强。条是平均值±至少5只动物的SE;*P<0.05和**P<0.01，相对于CTL通过ANOVA和Student-Newman-Keuls检验。是：如上述处理小鼠一种与博莱霉素、vehicle或ACE-2抑制剂一起，均以表面活性剂在气管内给药(见 方法)。14天后，如所述进行组织学 方法。乙:小鼠肺正常。C：低剂量的博来霉素，在表面活性剂经气管内递送。d：博来霉素+ ACE-2的siRNA。Ë：博来霉素+对照siRNA。
图8所示。
图8所示。
抑制或在体外或体内的ACE-2的增加沉默稳态ANG II。一种：大鼠类型的原代培养物II肺泡上皮细胞暴露于BLEO（25 MU / ml）或DX600（DX）在1μM在无血清培养基中。二十四小时后，ANG II中通过特异性ELISA（20）中的细胞培养基进行测定。注意ANG II的DX-诱导增加，是由单独BLEO造成的。条是平均值±至少3个培养物的SE;*P经ANOVA和Student-Newman-Keuls检验，BLEO值< 0.05。乙: C57/BL6小鼠气管内灌注BLEO、siACE2或siCTL，如图7所示。14天后，特异性ELISA测定全肺匀浆ANG II(见 方法)。条是平均值±至少5只动物的SE;*P经ANOVA和Student-Newman-Keuls检验，BLEO值< 0.05。
图9所示。
图9所示。
全身给予纯化的ACE-2抑制实验性肺纤维化。C57 / BL6小鼠接受BLEO的单一气管内滴注（2 U / kg）或盐水载体（CTL）。两天前，所有小鼠用含有任一无菌盐水或纯化的重组人ACE-2（见A皮下植入微型泵 方法)。BLEO给药后14天，杀死小鼠，通过HP检测肺胶原蛋白的测量。条是平均值±至少4只动物的SE;*P<0.01，相对于CTL;N.S.，无统计学显著与CTL或BLEO通过ANOVA和Tukey-Kramer多重比较检验。
请在PMC中查看此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用的66用品

参见所有文章“引用”

发布类型

主题词

反馈