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2003年10月1日出版GydF4y2Ba更多信息GydF4y2Ba
嗜酸性粒细胞衍生的TGF-β与哮喘的重塑事件有关。我们假设抗il -5的支气管黏膜嗜酸性粒细胞减少会减少气道重塑的标志物。在一项随机、双盲、安慰剂对照研究中,对24名特应性哮喘患者进行了三次人源化抗il -5单克隆抗体(mepolizumab)输注前后的支气管活检。免疫组织化学共聚焦显微镜定量网状基底膜(RBM)中腱素、lumican和III前胶原的厚度和密度。原位杂交法检测气道嗜酸性粒细胞TGF-β1 mRNA表达,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液TGF-β1蛋白表达。在基线时,与非哮喘对照组相比,哮喘患者RBM中气道嗜酸性粒细胞浸润和ECM蛋白沉积增加。与安慰剂相比,使用抗il -5抗体治疗哮喘患者,其特异性降低气道嗜酸性粒细胞数量,显著降低支气管黏膜RBM中tenascin、lumican和前胶原III的表达。此外,抗il -5治疗可显著降低BAL液中表达TGF-β1 mRNA的气道嗜酸性粒细胞的数量和百分比以及TGF-β1的浓度。因此,嗜酸性粒细胞可能通过调节ECM蛋白的沉积而参与哮喘组织重塑过程。GydF4y2Ba
过敏性哮喘的特征是嗜酸性气道炎症和气道壁的结构改变,称为气道重塑(GydF4y2Ba1GydF4y2Ba).这种重塑表型可能是重复气道损伤后过度修复过程的结果,包括网状基底膜(RBM)中ECM蛋白的沉积增加(GydF4y2Ba2GydF4y2Ba)及支气管粘膜下层(GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba).这些ECM蛋白包括前胶原蛋白III(胶原蛋白III的成熟前体)和蛋白多糖、tenascin和lumican (GydF4y2Ba2GydF4y2Ba那GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba-GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba).除了结构作用外,ECM蛋白还可以影响细胞功能,包括粘附,分化和生存(GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba).重塑的其他特征包括平滑肌质量的增加(GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba),脚杯细胞增生(GydF4y2Ba10GydF4y2Ba)和新的血管形成(GydF4y2Ba11GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
越来越多的证据表明,嗜酸性粒细胞可能在气道重塑的病理生理学中起重要作用。例如,在严重哮喘患者中,上皮下基底膜增厚与支气管黏膜嗜酸性粒细胞增多相关(GydF4y2Ba12GydF4y2Ba).组织嗜酸性粒细胞增多和嗜酸性粒细胞脱颗粒与几种纤维化综合征(GydF4y2Ba13GydF4y2Ba-GydF4y2Ba15GydF4y2Ba),细胞是参与组织重塑过程的几种分子的来源,如TGF-α (GydF4y2Ba16GydF4y2Ba), TGF -β(GydF4y2Ba17GydF4y2Ba), VEGF (GydF4y2Ba18GydF4y2Ba)、基质金属过氧化物酶-9 (GydF4y2Ba19GydF4y2Ba)、金属蛋白酶组织抑制因子1 (GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba)及IL-13 (GydF4y2Ba21GydF4y2Ba).TGF-β是一种有效的成纤维细胞/肌成纤维细胞功能调节剂,可产生多种ECM蛋白,包括胶原蛋白、蛋白多糖和腱蛋白(GydF4y2Ba22GydF4y2Ba那GydF4y2Ba23GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
我们的小组报告说,嗜酸性粒细胞衍生的TGF-β1在人体特征皮中的过敏性炎症中的成纤维细胞在肌纤维素形成和TenAscin和Procollagen-i的表达时在时间上与TenAscin和Procollagen-i的表达有关。GydF4y2Ba24GydF4y2Ba).通过体外培养嗜酸性粒细胞和成纤维细胞获得了这些修复标记物产生的直接证据。此外,嗜酸性粒细胞诱导的肌成纤维细胞的形成与肌腱蛋白转录本和蛋白产物的生成有关,这可被TGF-β中和抗体所抑制。白介素-5对于嗜酸性粒细胞前体的最终分化至关重要(GydF4y2Ba25GydF4y2Ba).它还参与嗜酸性粒细胞迁移和引物(GydF4y2Ba26GydF4y2Ba),并延长组织内细胞的存活时间(GydF4y2Ba27GydF4y2Ba).最近,IL-5单克隆抗体已经制备,并作为单次静脉输注给轻度特应性(GydF4y2Ba28GydF4y2Ba)慢性,严重的哮喘(GydF4y2Ba29GydF4y2Ba).这些抗体对晚期哮喘反应、气道高反应性或包括肺功能在内的其他临床结果没有产生明显的影响。然而,尽管抗il -5几乎完全消融了血液和痰中的嗜酸性粒细胞(GydF4y2Ba28GydF4y2Ba),减少组织嗜酸性粒细胞而不是耗尽(GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba),可能是气道嗜酸性粒细胞IL-5Rα表达下调(GydF4y2Ba31GydF4y2Ba那GydF4y2Ba32GydF4y2Ba).我们自己的团队已经能够部分和选择性地耗尽轻度特应性哮喘患者气道粘膜的嗜酸性粒细胞,使用的方法是每月三次静脉输注抗il -5单克隆抗体(GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba).在本研究中,我们使用这些活检样本表明,即使支气管黏膜嗜酸性粒细胞适度减少(中位数减少55%),这与网状基底膜内ECM蛋白沉积显著减少有关。GydF4y2Ba
研究人群和设计GydF4y2Ba
正常的非植物人志愿者被广告招募。哮喘是在其他地方详细描述的研究的一部分(GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba).简单地说,24名轻度特应性哮喘志愿者,仅用β治疗GydF4y2Ba2GydF4y2Ba受体激动剂,完成研究。其中11例随机接受美泊珠单抗治疗,11例接受安慰剂治疗。两组在年龄、性别、用力呼气量(FEV)方面均吻合良好GydF4y2Ba1GydF4y2Ba)、峰值呼气流速(PEFR)和组胺PCGydF4y2Ba20.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
筛选筛选后七至14天,进行纤维支气管镜,具有内核活检和支气管肺泡灌洗(BAL),2天后,给出了研究药物(安慰剂或活性药物)。将其以双盲方式为30分钟内施用静脉注射输注。在第一次输注后4和8周给出了研究药物的第二和第三输注。在最终药物输注后2周重复支气管镜检查。GydF4y2Ba
支气管粘膜活组织检查是从下叶节段和副蛹中取出。是否从右侧或左侧取出预处理活检是随机测定的。然后从另一侧取治疗后的活组织检查。支气管活组织检查也来自10个正常(非含量,无发血)受试者。GydF4y2Ba
该研究得到了皇家布朗普顿和哈里菲尔德NHS信托和伦敦胸科医院伦理委员会的批准,所有志愿者在参与前都给予了知情同意。GydF4y2Ba
组织加工,免疫组化,共聚焦显微镜GydF4y2Ba
支气管粘膜嗜酸性粒细胞。GydF4y2Ba支气管粘膜活检在4%多聚甲醛中固定(VWR,莱斯特,英国),然后在OCT(最佳切刀)温度下安装(拜耳英国有限公司,贝辛斯托克,英国),并在异戊烷中快速冷冻(BDH)与液氮预冷。简单地说,6 μm厚的切片与小鼠抗主要碱性蛋白(MBP)单克隆抗体(BMK 13;),并使用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(apap)技术(如前所述)的修改而开发(GydF4y2Ba33GydF4y2Ba).包括适当的同型对照(Dako Cytomation, Cambridge, United Kingdom)。使用Olympus BH-2显微镜(Olympus, New York, New York, USA)在×400放大下盲法计数整个切片,以确定每平方毫米的细胞数。GydF4y2Ba
网状基底膜:Tenascin,Procollagen III和Lumican。GydF4y2Ba将组织切片用PBS进行预处理30分钟,并在室温下在室温下在潮湿的室内孵育过夜,用针对Tenascin(Monosan,Uden,Netherlands),兔抗体(Chemicon International,Harrow,英国),兔抗体or lumican (a generous gift of Peter Roughley, Shriner’s Hospital for Crippled Children, McGill University, Montreal, Quebec, Canada). After extensive washing, sections were incubated with either a FITC-conjugated goat antimouse Ab (Dako Ltd.) or FITC-conjugated swine antirabbit Ab (Dako Ltd.) at a 1:30 dilution for 1 hour. Sections were then incubated with 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Sigma-Aldrich, Gillingham, United Kingdom) at 1 μg/mL for 5 minutes as a counterstain (to avoid measurement of intracellular protein) and mounted in fluorescent mounting medium (Dako Ltd.). Appropriate isotype controls were included (IgG1, Dako Ltd.). Images were acquired using a Leica TCS SP confocal microscope (Leica Microsystems Ltd., Heidelberg, Germany). The microscope settings were standardized to allow comparison of immunoreactivity intensity among different sections.
使用Scion图像分析软件包(Scion Corp., Frederick, Maryland, USA)对测量结果进行分析。RBM区域的免疫反应厚度和密度是通过对活检长度(40-90次)以20 μm间隔进行多次测量来计算的。每次测量时,都画一条垂直于RBM中免疫反应带的线。图像分析软件计算线的长度(厚度)和线的平均密度(像素每平方微米)。这些值在RBM的整个长度上取平均值,以给出免疫反应的平均厚度和密度。厚度与密度的乘积(GydF4y2BaT.GydF4y2Ba×GydF4y2BaD.GydF4y2Ba[以RBM中的基质蛋白表达的衡量标准。厚度×密度是等式的衍生物:质量=密度×体积。所以,GydF4y2BaT.GydF4y2Ba×GydF4y2BaD.GydF4y2Ba每种活组织检查中每单位长度的RBM的基质蛋白的质量(或替代,总表达)成比例。TenAscin厚度的血管内检测器误差为±8.7%,并且TenAscin密度为±7.3%。这与先前的研究一致,这些研究测量了RBM中的Tenascin免疫反应性厚度(GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba34GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
原位杂交和免疫组化。GydF4y2Ba将编码人TGF-β1的cDNA片段插入pGEM RNA表达载体(Promega UK Ltd., Southampton, United Kingdom)。GydF4y2Ba35GydF4y2Bas标记的核糖探针如前所述制备(GydF4y2Ba33GydF4y2Ba).TGF-β1 mRNA,双免疫组化/原位杂交(ISH),如前所述(GydF4y2Ba33GydF4y2Ba).首先使用apap技术对切片进行抗eg2染色(Pharmacia Biotech, Milton Keynes, Bucks, United Kingdom),然后进行ISH染色(GydF4y2Ba33GydF4y2Ba).为了进行自动放射照相,将载玻片浸入K-5乳剂(Ilford Ltd., Basildon, United Kingdom)中,在4°C完全黑暗的干燥环境下曝光3周,然后在D-19显影液(Eastman Kodak Co., Rochester, New York, USA)中显影。嗜酸性粒细胞呈红色,TGF-β 1mrna表达GydF4y2Ba+GydF4y2Ba信号以银颗粒(GydF4y2Ba33GydF4y2Ba).在不了解患者临床状况的情况下,研究人员使用前面描述的目镜分割线(GydF4y2Ba33GydF4y2Ba).结果表达为每平方米的活组织检查的阳性细胞总数。嗜酸性粒细胞的百分比为TGF-β1mRNAGydF4y2Ba+GydF4y2Ba还计算出来。GydF4y2Ba
支气管肺泡灌洗液TGF-β1。GydF4y2BaBAL液通过50 μm过滤器去除粘液,800离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba在4℃下,将上清液在80℃下储存直至使用。根据制造商的说明,使用厘米·YM-10集中器(Amicon Inc.,Beverly,Massachusetts,Massachusetts,Massachusetts,USA)在室温下浓缩5-30次的浓缩5-30次。然后使用商业ELISA试剂盒(R&D Systems Europs Ltd.,Abingdon,United Kingdom)测定浓缩BAL流体中的TGF-β1水平。GydF4y2Ba
统计分析。GydF4y2Ba非参数统计方法用于组内配对比较(Wilcoxon符号秩检验)和组间比较,以检验mepolizumab与安慰剂治疗或正常受试者的效果(Mann-Whitney)GydF4y2Ba你GydF4y2Ba测试)。相关性采用斯皮尔曼秩相关系数进行分析。一个GydF4y2BaP.GydF4y2Ba值≤0.05被认为是显着的。GydF4y2Ba
Tenascin, lumican和前胶原III在正常人和轻度哮喘中的应用。GydF4y2Ba首先,我们试图证实支气管粘膜在哮喘中的嗜酸性粒细胞浸润与ECM蛋白的沉积增加有关。Tenascin的总表情(厚度×密度)(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.03)和lumican (GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.002)在轻度哮喘患者中明显高于正常人,但前胶原的变化更为多变,未达到显著性(图GydF4y2Ba1GydF4y2Baa).哮喘患者的嗜酸性粒细胞数量也明显高于正常人(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.0006;数字GydF4y2Ba1GydF4y2Bab)。Tenascin和Lumican的免疫反应性主要是局部局限于RBM内的耻骨区域。在哮喘学,在基线时,厚度之间存在正相关(图GydF4y2Ba1GydF4y2BaC)、筋蛋白的密度和总表达量以及支气管黏膜嗜酸性粒细胞的数量(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.0007,GydF4y2BaR.GydF4y2Ba= 0.617;GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.039,GydF4y2BaR.GydF4y2Ba= 0.3661;GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.02,GydF4y2BaR.GydF4y2Ba分别= 0.42)。用康明曼没有观察到这些关联。Tenascin或Lumican和基线PEFR,FEV的厚度,密度或总表达之间也没有显着的相关性GydF4y2Ba1GydF4y2Ba,或组胺PCGydF4y2Ba20.GydF4y2Ba.GydF4y2Ba
(GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba)正常对照组网状基底膜中tenascin、lumican和前胶原III表达的比较(GydF4y2BaN.GydF4y2Ba= 10)和哮喘患者(GydF4y2BaN.GydF4y2Ba= 11)抗il -5前后。N表示正常受试者。横杆代表中值。(GydF4y2BaB.GydF4y2Ba) MBP数量的比较GydF4y2Ba+GydF4y2Ba基线时正常对照和哮喘受试者支气管粘膜中的嗜酸性粒细胞。(GydF4y2BaCGydF4y2Ba)基线时网状基底膜中嗜酸性粒细胞数量与腱蛋白厚度的相关性。GydF4y2Ba
抗IL-5(Mepolizumab)对支气管粘膜嗜酸性粒细胞和腺苷,汉昔宫及其哮喘肝癌III表达的影响。GydF4y2Ba如前所述(GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba)与安慰剂相比,用抗IL-5抗体(Mepolizumab)处理的哮喘患者的支气管粘膜嗜酸性粒细胞的数量显着降低(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.009;表格GydF4y2Ba1GydF4y2Ba).这与厚度的显著减少(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.008)和密度(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.003);GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.05)和ⅲ型前胶原(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.05)与安慰剂相比,RBM的免疫反应性(表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba).总表达式(厚度×密度)如图所示GydF4y2Ba2GydF4y2Ba.美泊珠单抗治疗组的tenascin和lumican显著下降,在治疗组(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.01和0.05),与安慰剂(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.004 tenascin和0.008 lumican)。在接受抗il -5治疗的患者中,前胶原III的表达没有显著降低,但与安慰剂相比有显著降低(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.007),而安慰剂组有升高的趋势。在哮喘患者中,美泊珠单抗治疗后tenascin的表达与非哮喘患者中该ECM蛋白的表达无显著差异。nonatopic控制(图GydF4y2Ba1GydF4y2Ba一个)。GydF4y2Ba
数字GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba显示受试者在美泊珠单抗治疗前后支气管粘膜中肌腱霉素和lumican免疫反应的代表性显微照片。还展示了前胶原III免疫反应性的例子。在使用适当的肌腱素、氟米康和前胶原同型对照的切片中未观察到免疫反应。GydF4y2Ba
正常人网状基底膜中腱蛋白免疫反应的代表性显微照片(GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba)和哮喘患者的预处理(GydF4y2BaB.GydF4y2Ba)和后期(GydF4y2BaCGydF4y2Ba与anti-IL-5)。正常人的Lumican免疫反应性(GydF4y2BaD.GydF4y2Ba)和从预处理(GydF4y2BaE.GydF4y2Ba)和后期(GydF4y2BaFGydF4y2Ba)与抗il -5也显示。III型前胶原免疫反应性预处理的例子(GydF4y2BaGGydF4y2Ba)和后期(GydF4y2BaHGydF4y2Ba),但这种下降并非所有受试者的典型表现。GydF4y2Ba一世GydF4y2Ba显示同型对照免疫反应性的一个例子。ECM蛋白的免疫反应性用绿色表示。切片DAPI复染(蓝色)。GydF4y2Ba
抗il -5治疗对嗜酸性粒细胞表达TGFβ1的影响。GydF4y2Ba在基线,中位数占TGFβ1MRNA的86%GydF4y2Ba+GydF4y2Ba哮喘受试者的支气管粘膜中的细胞被鉴定为嗜酸性粒细胞。术后莫博提姆接受治疗,TGFβ1的数量GydF4y2Ba+GydF4y2Ba嗜酸性粒细胞显著减少(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.03),与安慰剂(图GydF4y2Ba4.GydF4y2Baa).同样,中位数76%的嗜酸性粒细胞为TGF-β1mRNAGydF4y2Ba+GydF4y2Ba与安慰剂相比,美泊珠单抗治疗组显著降低(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba=(图0.04)GydF4y2Ba4.GydF4y2Bab).与安慰剂相比,美泊珠单抗治疗组BAL液中TGFβ1的浓度也显著降低(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.042,图GydF4y2Ba4.GydF4y2Bac)。GydF4y2Ba
抗IL-5对(GydF4y2Ba一种GydF4y2BaTGF-β1mRNAGydF4y2Ba+GydF4y2Ba支气管粘膜中的嗜酸性粒细胞(GydF4y2BaB.GydF4y2Ba)支气管粘膜中表达TGF-β1mRNA的嗜酸性粒细胞百分比(GydF4y2BaCGydF4y2Ba)支气管肺泡灌洗液中TGF-β1的浓度。横梁代表中值值。GydF4y2Ba
我们已经证明,在轻度哮喘患者中,使用抗il -5单克隆抗体(mepolizumab)特异性减少支气管粘膜中的嗜酸性粒细胞数量,与气道粘膜网状基底膜中ECM蛋白tenascin和lumican的表达显著减少相关。此外,这些变化与气道嗜酸性粒细胞TGF-β1表达的显著减少有关。这些数据支持嗜酸性粒细胞的新作用,并提示嗜酸性粒细胞浸润和哮喘气道重塑之间的联系。GydF4y2Ba
我们证实了之前的报道,哮喘患者的RBM中tenascin和lumican的厚度明显大于正常受试者(GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba34GydF4y2Ba).通过tenascin, mepolizumab将RBM表达降低到非哮喘、非特应性个体的水平。我们还发现腱蛋白的厚度、密度和总表达与支气管黏膜嗜酸性粒细胞的数量相关。我们的发现与之前在动物研究中报道的结果一致。在IL-5基因敲除小鼠气道重塑模型中,反复过敏原刺激后嗜酸性粒细胞浸润的消除与结构改变的缺失有关,包括WT对照组中观察到的纤维连接蛋白的产生和黏液腺增生(GydF4y2Ba35GydF4y2Ba).在一个单独的特应性哮喘动物模型中,用抗il -5预防治疗卵白蛋白致敏BALB/c小鼠可显著减少重复变应原激发产生的上皮下纤维化(GydF4y2Ba36GydF4y2Ba).然而,这些作者没有报道抗il -5治疗对既定纤维化的作用。GydF4y2Ba
与lumican或前胶原III相比,基线嗜酸性粒细胞和腱蛋白表达之间的相关性特别密切,抗il -5治疗后腱蛋白表达的降低更为明显。在III型前胶原中,mepolizumab并没有显著降低这种ECM蛋白的表达,尽管观察到的变化与安慰剂有显著差异。这表明嗜酸性粒细胞和腱膜蛋白沉积之间有特别强的联系,正如之前在特应性皮肤中过敏原诱导的腱膜蛋白形成(GydF4y2Ba24GydF4y2Ba).有可能需要更长的治疗时间来逆转前胶原和lumican表达,达到与tenascin观察到的相同程度。研究吸入皮质激素对RBM厚度影响的证据表明,尽管短期治疗与RBM中肌腱素厚度的显著降低有关(GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba),需要长期研究表明胶原III厚度的降低(GydF4y2Ba37GydF4y2Ba那GydF4y2Ba38GydF4y2Ba).在安慰剂组中,在研究期间,嗜酸性粒细胞、腱素和前胶原蛋白无显著增加,进一步提出了这些变化反映了未经治疗的轻度特应性哮喘的自然史,抗il -5可能阻止了这种增加的可能性。GydF4y2Ba
安慰剂前tenascin表达低于mepolizumab前,但没有显著降低。因为治疗组在临床和组织病理学特征方面都很匹配,而且是随机选择的,所以这种差异最有可能是由于肌腱霉素的基线值相对较少和标准差较大造成的。GydF4y2Ba
TGF-β1是肌成纤维细胞在体内和体外形成的有效分化因子(GydF4y2Ba39GydF4y2Ba那GydF4y2Ba40GydF4y2Ba),并被证明可上调成纤维细胞的一系列ECM蛋白的表达,包括腱蛋白(GydF4y2Ba41GydF4y2Ba).与以前的研究一致(GydF4y2Ba42GydF4y2Ba那GydF4y2Ba43GydF4y2Ba),我们已经证明大部分TGF-β1 mRNAGydF4y2Ba+GydF4y2Ba轻度特应性哮喘患者的粘膜下层细胞为嗜酸性细胞。抗il -5选择性清除嗜酸性粒细胞显著减少TGF-β1 mRNA的数量GydF4y2Ba+GydF4y2Ba支气管粘膜中的嗜酸性粒细胞和血液中的TGF-β1浓度降低。此外,在甲醇嗪治疗组中表达TGF-β1mRNA的细胞的比例显着下降。这表明抗IL-5治疗不仅降低了产生TGF-β1的嗜酸性粒细胞的数量,而且还降低了对于TGF-β1表达的这些细胞的活化程度。大多数TGF-β1mRNA的事实GydF4y2Ba+GydF4y2BaBALF中TGF-β1的水平也降低,支持我们的假设,嗜酸性粒细胞是哮喘支气管粘膜中TGF-β1的重要来源。GydF4y2Ba
在本研究中,我们没有量化支气管黏膜肌成纤维细胞。肌成纤维细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白也在支气管粘膜的大量其他细胞中表达,Gizycki和合作者使用的电子显微镜对肌成纤维细胞进行超微结构鉴定(GydF4y2Ba44GydF4y2Ba)超出了本研究的范围。然而,我们之前的体外研究表明,嗜酸性粒细胞和成纤维细胞的共培养与肌成纤维细胞的分化和肌腱蛋白转录本和蛋白质的生成有关,这种作用被针对TGF-β的抗体抑制(GydF4y2Ba24GydF4y2Ba).因此,我们认为,嗜酸性粒细胞衍生的TGF - β1可能通过激活肌成纤维细胞来影响肌腱素和其他ECM蛋白的表达。GydF4y2Ba
抗IL-5对基质蛋白表达的观察结果也可能通过药物对IL-5本身的影响来介导的,而不是通过降低嗜酸性粒细胞数。虽然IL-5已被证明会影响气道平滑肌收缩(GydF4y2Ba45GydF4y2Ba),从平滑肌或其他与所研究的重塑变化相适应的细胞中直接释放生长因子尚不清楚。此外,在美泊珠单抗治疗前后,嗜酸性粒细胞数量和tenascin厚度之间的一致相关性使得IL-5的直接作用不太可能——至少对tenascin来说是这样。同样,ECM蛋白表达的变化也不可能由抗il -5对支气管粘膜中其他类型细胞的作用来解释。在抗il -5反应中,其他细胞的数量没有显著变化。虽然嗜碱性粒细胞数量有减少的趋势,但这与ECM蛋白表达的变化无关。GydF4y2Ba
我们的发现在哮喘病理生理学方面的相关性还不清楚,因为气道重塑对哮喘肺功能的影响还不确定。ECM蛋白在气道壁的沉积可能具有机械作用,放大与给定平滑肌收缩程度相关的狭窄程度(GydF4y2Ba46GydF4y2Ba).许多研究报道了RBM的厚度与气道高反应性(AHR)、FEV之间的相关性GydF4y2Ba1GydF4y2Ba,以及哮喘严重程度的其他标志(GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba34GydF4y2Ba那GydF4y2Ba42GydF4y2Ba那GydF4y2Ba47GydF4y2Ba).我们发现基线PC之间没有显著相关性GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba,FEV.GydF4y2Ba1GydF4y2Ba,以及tenascin、lumican或前胶原III的厚度、密度和表达。我们的研究对象是轻度哮喘患者,该研究没有能力检测FEV等临床变量之间的显著相关性GydF4y2Ba1GydF4y2Ba气道高反应性或。此外,尽管我们观察到RBM中tenascin、lumican和前胶原III的表达显著减少,但我们没有在这些活检中测量RBM的总体厚度,而嗜酸性粒细胞的减少可能与其他基质蛋白(如纤维连接蛋白、I型和V型胶原蛋白)表达的如此显著的减少无关。GydF4y2Ba
虽然抗IL-5给药显着降低了支气管粘膜下的组织嗜酸性粒细胞的数量,但它不会在与之前报道的相同程度上耗尽它们在痰和血液中的相同程度(GydF4y2Ba28GydF4y2Ba).GM-CSF,IL-3和Eotaxin也涉及嗜酸性粒细胞稳态,有证据表明,与IL-5封闭式相结合的证据表明这些抑制可能与来自支气管粘膜的更完整的嗜酸性粒细胞耗竭(GydF4y2Ba48GydF4y2Ba那GydF4y2Ba49GydF4y2Ba).同样,研究显示,皮质激素对RBM厚度最显著的影响往往持续时间更长,因此可能需要持续的嗜酸性粒细胞耗竭才能达到最大的效果(GydF4y2Ba50GydF4y2Ba-GydF4y2Ba52GydF4y2Ba).GydF4y2Ba
总之,我们已经证明,通过抗il -5治疗,轻度哮喘患者中嗜酸性粒细胞的选择性减少与气道RBM中ECM蛋白表达的显著减少相关。此外,这种减少伴随着气道嗜酸性粒细胞TGF-β1表达的减少。这些数据为嗜酸性粒细胞与轻度特应性哮喘气道重塑之间的因果关系提供了强有力的证据。GydF4y2Ba
我们要感谢Julia Barkans和Farid Benyahia的出色技术支持。这项研究得到了葛兰素史克(GlaxoSmithKline)和威康基金会(Wellcome Trust)的资助。GydF4y2Ba
利益冲突:GydF4y2Ba作者宣称不存在利益冲突。GydF4y2Ba
使用非标准缩写:GydF4y2Ba网状基底膜(RBM);Bronchoalveolar灌洗(BAL);强制呼气量(FEV);峰值呼气流量(PEFR);主要碱性蛋白质(MBP);碱性磷酸酶抗真碱磷酸酶(APAAP);原位杂交(ISH);气道过度反应性(AHR)。GydF4y2Ba