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温度和相对湿度对SARS冠状病毒活力的影响
摘要
SARS冠状病毒感染的主要传播途径被认为是呼吸道飞沫。然而,在其他体液和排泄物中也可检测到该病毒。研究了病毒在光滑表面上不同温度和相对湿度下的稳定性。光滑表面上的干燥病毒在22–25°C的温度和40–50%的相对湿度(即典型的空调环境)下保持其生存能力超过5天。然而,病毒活性迅速丧失(>3 log)10)在较高的温度和较高的相对湿度(例如,38°C, >95%的相对湿度)。SARS冠状病毒在低温低湿环境中的稳定性较好,可能有利于其在春季亚热带地区(如香港)社区和空调环境中的传播。这也可以解释为什么一些亚洲热带地区(如马来西亚、印度尼西亚或泰国)的高温和相对湿度高的环境没有发生严重的社区SARS疫情。
1.导言
严重急性呼吸系统综合症(SARS)是一种与严重肺炎有关的新出现的疾病,2003年蔓延到五大洲的30多个国家。一种新型冠状病毒被确定为其病因[1.–3.]。SARS对受影响国家的医疗服务和经济产生了巨大影响,总体死亡率估计为9%,但60岁或以上的人的死亡率上升到50%[4.]。该病的一个显著特征是,它易于在医疗环境中传播,并与家人和社会密切接触。据推测,该病通过飞沫、密切直接或间接接触传播,但目前尚不清楚这些传播途径的相对重要性。一项研究表明,SARS患者可能产生病毒气溶胶,因此空气中的飞沫传播是一种可能的传播方式[5.然而,传染病和环境污染在感染传播中的作用目前还不清楚。在香港的高层公寓大楼(厦门花园),超过300名居民的疾病暴发无法通过感染患者的呼吸液滴传播来解释。6.].可在粪便中检测到传染性病毒[7.],而病毒在受污染的粪便中雾化,据信是这次爆发的传播方式[8.].
我们和其他人曾报道,SARS冠状病毒(SARS冠状病毒)在56°C加热15分钟后失去传染性,但在塑料上干燥后至少2天保持稳定。实验室使用的常用固定剂使其完全失活[9,10].另一项研究表明,它被紫外线、碱性和紫外线灭活(),或酸性()条件11].人类冠状病毒已被证明可以在PBS或含有5-10% FCS的培养基中存活数天[12–14]但它们在干燥后只能存活数小时[13,14].有一些研究报告说,SARS爆发、计量因素和空气污染之间存在关联[15–17].因此,SARS冠状病毒(SCoV)在不同温度和湿度条件下的生存信息对了解病毒传播具有重要意义。最近的一项研究使用了替代冠状病毒(传染性胃肠炎病毒(TGEV)和小鼠肝炎病毒(MHC)),研究了空气温度和相对湿度对冠状病毒在表面存活的影响[18].这些环境因素对SARS冠状病毒的生存影响尚不清楚。在本研究中,我们报道了SARS冠状病毒在不同温度和相对湿度下的稳定性。
2.材料和方法
2.1.病毒株和细胞系
本研究使用的SARS冠状病毒株为HKU39849。胎猴肾细胞(FRhK-4)在含有10%胎牛血清和青霉素链霉素(Gibco,美国)的最低必需培养基(MEM, Gibco,美国)中培养,37℃,5% CO2.用于培育家畜病毒和病毒传染性的滴定[1.,2.].
2.2.砧木病毒的制备
当感染病毒的烧瓶中约75%的细胞单层表现出细胞病变效应(CPE)时,收获储备病毒。感染的细胞在2000年进行一次冻融离心循环 rpm 20分钟以去除细胞碎片,并将培养上清液等分并储存在室温下−使用前温度为80℃。
2.3.组织培养感染剂量(50%)的测定(TCID50)
96孔微量滴定板含有100μ用100株FRhK-4混合菌感染L株μL从10开始,在含有1%FCS(维持培养基)的最低基本培养基中,连续10倍稀释库存病毒−1.到108..滴定分四次进行。感染细胞在37°C孵育4天。每天记录CPE的出现情况。TCID50根据Reed法和Muench法测定[19].
2.4.干燥、热量和相对湿度的影响
10微升含有107.TCID50将每毫升病毒置于24孔塑料板的单个孔中,并在室温(22~25°C)和40-50%的相对湿度下干燥(即,典型空调房间中普遍存在的条件)。使用100微升MM在0 人力资源,3 人力资源,7 人力资源部,11 人力资源部,13 人力资源部,24 每次包括封闭螺旋盖Ependorf管中的对照组,并进行类似处理,但不干燥。
该实验在不同温度(38℃、33℃、28℃)和相对湿度(>95%、80~89%)下重复3天 人力资源,7 人力资源部,11 人力资源部,13 人力资源部和24 在受控条件下使用雾化器产生高湿度和相对低湿度环境。上述所有实验均重复进行,并滴定残余病毒传染性。
2.5.传染性试验
在96孔微量滴定板上测定残留病毒的传染性,每4个重复μ1个融合的FRhK-4细胞。100 μ从10倍开始,在维持培养基中连续稀释10倍的病毒−1.到108.加入FRhK-4细胞。感染细胞37℃孵育4天。每天记录CPE的出现情况。TCID50根据Reed和Muench法测定[19].
3.结果
10微升107.TCID50每毫升病毒置于24孔塑料板(代表无孔表面)的单个孔中并干燥。将干病毒在不同温度(38°C、33°C、28°C)、不同相对湿度(>95%、80~89%)下孵育3、7、11、13、24小时,滴定残余病毒侵染力。在室温、相对湿度约40-50%(空调房间)下进行了4周的类似试验。在22~25°C、相对湿度40~50%的条件下,在塑料上干燥的病毒仅用少量干燥剂即可存活5天滴定损失(图1.).在那之后,病毒的传染性逐渐消失。在这些环境条件下,溶液中病毒侵染性的损失一般与干燥病毒相似。这表明SARS冠状病毒是一种稳定的病毒,可能通过间接接触或污染物传播,特别是在空调环境中。
相对较低温度(28°C和33°C)下的高相对湿度(>95%)不会显著影响病毒的传染性(图2(a)).高温(38°C)在80-90%的相对湿度导致0.25~224时滴度损失 人力资源(图2(b)).然而,如果将干燥的病毒储存在高温(38℃)和高相对湿度(>95%)下,还会有~1.524小时内每个时间点的滴度损失 心率(0.38~3.38 )与相对湿度80–90%较低的高温(38°C)相比(图3.(a) –3.(c) )。
(一)
(b)
(一)
(b)
(c)
4.讨论
病毒不会在活细胞外复制,但感染病毒可能会持续在受污染的环境表面,活病毒的持续时间受温度和湿度的影响显著。已知受污染的表面是医院环境和医院环境中感染传播的重要载体寄生虫在RSV传播中的作用已得到明确证明[20.].已经研究了病毒在各种污染物上的存活情况,如流感病毒、副粘病毒、痘病毒和逆转录病毒[21]。据报道,与普通感冒有关的人类冠状病毒在干燥后仅在环境表面存活3小时,尽管它在液体悬浮液中存活了许多天[13].副流感病毒和RSV病毒分别在表面干燥2小时和6小时后存活[20.,22]。人类冠状病毒229E以气溶胶形式在高湿度下通常不太稳定[12]。SCoV的环境稳定性以前是未知的,这些信息对于理解该病毒在医院和社区环境中的传播机制显然很重要。
在目前的研究中,我们已经证明SARS冠状病毒在空调环境的温度和湿度条件下干燥后可以存活至少两周。病毒在室温液体环境中可以稳定3周,但在56°C的高温下15分钟很容易被杀死[9].这说明SARS冠状病毒是一种稳定的病毒,可能通过间接接触或污染物传播。这些结果可能表明,受污染的表面可能在医院和社区的感染传播中发挥重要作用。
我们的研究表明,SCoV相对而言比人类冠状病毒229E或OC43以及其他一些病毒性呼吸道病原体(如呼吸道合胞病毒)更稳定。这些研究结果表明,尽管飞沫直接传播是一种重要的传播途径[23],污染物和环境污染在病毒传播中的作用可能在病毒传播中起重要作用。特别是,尽管高度重视并采取严格的预防措施防止飞沫传播,但在医院环境中,污染物仍可能导致感染的持续传播。除了预防飞沫,还需要加强接触预防措施和洗手。
粪便污染的SCoV冠状病毒可能是一种有效的传播途径。在香港淘大花园爆发的禽流感,波及一幢单层公寓内超过三百名居民,怀疑是受污染污水传染。该病毒在环境表面的稳定性及其在粪便中的存在表明,生鲜食品生产中的粪便污染可能对病毒传播构成威胁;特别是在卫生和污水处理系统较差的国家,需要研究解决这一可能性。
在本研究中,我们发现高温和高相对湿度对SARS冠状病毒的灭活具有协同作用,而低温和低湿度支持延长病毒在污染表面的存活时间。因此,马来西亚、印度尼西亚和泰国等国的环境条件不利于病毒的长期生存。在新加坡和香港等大量使用空调的国家,传播主要发生在医院或酒店等空调良好的环境中。此外,另一项研究显示,在疫情期间,香港在气温较低的日子,每日发病率增加的风险比气温较高的日子高出18.18倍[24]和其他地区[15–17].综上所述,这些观察结果可以解释为什么马来西亚、印度尼西亚和泰国等亚洲热带地区(温度高、相对湿度高)的一些国家没有院内暴发SARS(见表)1.和2.(a) –2.(c) )。这也可以解释为什么新加坡也位于热带地区(表1)2.(d) ),大部分非典型肺炎爆发于医院(空调环境)。有趣的是,在广州SARS爆发期间,临床医生将病房的窗户打开并保持良好通风,这很可能降低了病毒存活率,从而减少了医院传播。SARS冠状病毒可在低温低湿度环境下保持其长达2周的感染力,这可能有助于在亚热带地区的香港(如位于亚热带地区)的病毒传播。2.(e))。其他环境因素,包括风速、每日日照和气压,已显示与SARS流行有关,也应予以考虑[16,17]SARS流行的动态涉及多种因素,包括病毒的物理特性、室外和室内环境、卫生、空间和遗传倾向[10,15–17,24,25]。了解病毒在不同温度和湿度条件下的稳定性对于了解新型传染源(包括最近的甲型H1N1流感2009)的传播非常重要。
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*资料可于英国广播公司天气网站(http://www.bbc.co.uk/weather/world/city_guides/results). |
利益冲突
作者声明不存在利益冲突。
工具书类
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