中性粒细胞细胞外陷阱是由脂多糖间接触发的，并有助于急性肺损伤

科学报告体积6，文章号:37252（2016）引用本文

主题

摘要

中性粒细胞细胞外陷阱(NETs)促进了病原体的细胞外杀伤。然而，过多的NETs形成和不良的降解与加剧的免疫反应和组织损伤有关。在本研究中，我们研究了NETs在脂多糖(LPS)介导的急性肺损伤(ALI)中的作用，并评估了DNase I在ALI治疗中的应用。此外，我们还关注了LPS是否直接诱导NETs释放这一有争议的问题在体外．在小鼠ALI组织中检测到NETs的形成在活的有机体内并与BALF中net标记物、瓜氨酸组蛋白H3组织水平和NET-DNA水平升高有关。使用DNase I治疗可显著降低NETs和瓜氨酸组蛋白H3水平，从而预防ALI并改善BALF中的肺水肿和总蛋白。此外，DNase I显著降低血浆和BALF中IL-6和TNF-α水平。在体外LPS激活的血小板而不是LPS单独有效地诱导NETs释放。综上所述，在lps诱导的ALI过程中形成NETs，引起器官损伤并引发炎症反应。DNase I降解NETs促进了net蛋白的清除，并对小鼠的ALI有保护作用;因此，DNase I可能是ALI治疗的一种新的潜在辅助药物。具体而言，LPS通过血小板活化间接诱导NETs的形成。

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简介

急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是一种复杂而严重的肺部疾病，在危重病人中死亡率高1，2．尽管采用了低潮气量的机械通气，但仍难以有效预防、减少和治疗ALI/ARDS3.．中性粒细胞是人类最重要的先天免疫细胞之一。中性粒细胞的活化、浸润和延迟清除被认为在ALI/ARDS的发病机制中起重要作用。在与ALI/ARDS相关的感染中，巨噬细胞、上皮细胞和中性粒细胞本身分泌的趋化因子诱导中性粒细胞招募到肺实质和肺泡间隙。吞噬作用和脱颗粒作用是中性粒细胞杀死病原体的常见机制。此外，还描述了一种新的抗菌策略，称为中性粒细胞细胞外陷阱(NETs)，可以定位并消除病原体4．

net是网状染色质纤维，装饰有中性粒细胞衍生的抗菌蛋白，由死亡的中性粒细胞通过称为NETosis的独特过程产生。NETs可以固定或捕获各种病原体，从而抑制感染的传播，最终促进病原体的杀灭4，5．然而，net，特别是net绑定组件的过度存在也会导致有害的影响。例如，组蛋白和髓过氧化物酶(MPO)对上皮细胞和内皮细胞具有细胞毒性6．同样，中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)通过切割内皮肌动蛋白细胞骨架、VE-cadherin和E-cadherin来增加肺泡-毛细血管屏障的渗透性。蛋白酶3 (PR3)和组织蛋白酶G (Cat G)通过激活促炎蛋白和降解抗炎蛋白来增强炎症反应7．LL-37，一种在NETs结构中检测到的抗菌蛋白，增加邻近巨噬细胞中NLRP3炎性小体的激活，导致炎症细胞因子的释放8．MPO产生的活性氧(Reactive oxygen species, ROS)会对上皮细胞产生有害的环境，导致上皮细胞凋亡或坏死7．此外，NETs是凝血级联的有效驱动因素，并破坏微循环，从而在败血症期间介导器官衰竭9．此外，NETs不仅参与随后的纤维化，还参与血管生成10，11，这可能有助于ALI/ARDS后期的组织重塑。总的来说，越来越多的证据支持NETs在ALI/ARDS发病机制中的生物学相关性。

脂多糖(lipopolaccharides, LPS)是革兰氏阴性菌外膜的重要成分，已被广泛应用于ALI模型的建立。目前尚不清楚LPS是否导致NETs释放，尽管有报道称LPS可诱导NETs形成4．相反，根据克拉克的说法9和他的同事发现，LPS在与中性粒细胞直接接触时不会引起NETs释放;否则，lps激活的血小板将有效诱导NETs的产生。此外，最近对net的研究主要局限于在体外实验，以及在活的有机体内NETs在ALI/ARDS中的作用尚不清楚。在这篇文章中，我们探讨了LPS是否能够诱导NETs释放在活的有机体内而且在体外，通过应用脱氧核糖核酸酶I (DNase I)鉴定NETs在ALI中的作用，制定了一种新的ALI/ARDS治疗策略。

结果

lps诱导ALI中NETs的形成

为了研究迁移中性粒细胞在lps诱导的ALI中是否形成NETs，我们首先对石蜡包埋的小鼠肺切片进行免疫荧光染色。在LPS给药后，在小鼠肺组织中检测到NETs形成，但在磷酸盐缓冲盐水(PBS)对照小鼠中未观察到NETs形成。值得注意的是，少量的NETs存在于经DNase I预处理的lps暴露动物的组织中(图1一个)．我们基于与瓜氨酸化组蛋白H3 (Cit-H3)共定位的细胞外纤维和网状结构以及中性粒细胞来源的NE的出现来鉴定NETs。重要的是，NETs检测与DNA/组蛋白抗体密切相关，而不是去凝染色质，后者被DAPI染色较弱。然而，在肺组织中检测到的NETs缺乏网状状细胞外染色质结构，这可能是由于肺实质的空间限制和气道中dna -蛋白质复合物的短片段的存在12．在下一组实验中，我们通过western blotting分析了Cit-H3(NETs形成的另一种特异性标记物)水平，并观察到lps处理小鼠肺组织中的Cit-H3水平明显高于假手术组小鼠肺组织中的Cit-H3水平。此外，DNase i处理小鼠的肺组织中Cit-H3水平明显低于LPS处理小鼠;然而，DNase I并没有完全消除Cit-H3 (图1 b, C)．为了进一步确认肺内net的形成，我们还测量了BALF中的NET-DNA水平;NET-DNA是net形成的另一个标记。ALI组小鼠BALF中NET-DNA水平明显高于假手术组。用DNase I处理可显著降低LPS小鼠BALF中NET-DNA的数量(图1 d)．

图1
图1

在lps诱导的ALI小鼠模型中形成NETs。

（一个)气管内LPS治疗24小时后，与假手术组和DNase I加LPS组相比，对小鼠(n = 6)肺切片进行共聚焦显微镜观察获得的代表性免疫荧光图像;染色显示Cit-H3(绿色)，NE(红色)和DAPI(蓝色)。插图(1-6)中的高倍放大视图显示了NETs的形成，由Cit-H3(绿色)、NE(红色)和DNA(蓝色)的共定位所证明。（B，C) Western blot检测sham-、LPS-或DNase I + LPS处理小鼠肺部Cit-H3蛋白水平。全长印迹/凝胶显示在补充图S1．（D)使用PicoGreen检测试剂盒测定BALF NET-DNA水平。*P < 0.05 vs。假手术组;＃P < 0.05 vs。LPS组。所显示的结果至少代表了三个独立的实验。

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DNase I降解NETs可减弱lps介导的小鼠ALI

我们接下来评估了NETs的形成是否在lps介导的ALI中具有致病性。为了降解NETs，我们用DNase I处理小鼠，它有效地催化了NETs主干结构的水解。肺组织的组织病理学分析显示，LPS给药24小时后，肺结构严重破坏，典型表现为炎症细胞浸润、出血和间质水肿。外源性DNaseI显著减少出血和水肿(图2一个)．肺损伤评分(图2 b)、肺湿/干(W/D)重量(图2 c)和BALF中的总蛋白质(图2 d)明显高于假手术组。通过肺损伤评分、肺W/D重量和BALF中总蛋白的测定，DNase I治疗显著降低了lps引起的肺损伤，这与BALF中NET-DNA水平和肺组织中Cit-H3水平的降低一致。然而，值得注意的是，DNase I的施用并没有改变中性粒细胞对BALF的浸润(图2 e)，表明中性粒细胞向损伤部位的募集几乎没有受到干扰，尽管NETs降解减少了器官损伤。

图2
figure2

NETs调节ALI过程中的组织损伤。

LPS灌注后0和10 h，用20 μl的3 mg/ml DNase I (4 mg/kg, 25 μl PBS)处理小鼠，LPS处理后24 h采集小鼠肺组织和BALF。（一个)肺切片H&E染色(400×);（B)肺损伤评分;（C)肺含水量;（D) BALF中总蛋白浓度。（E) BALF中肺泡中性粒细胞数量;*P < 0.05 vs。假手术组;＃P < 0.05 vs。LPS组。N = 6只/组。这些结果是三个独立实验的代表性结果。

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NETs调节全身和局部炎症

NETs的过度形成和清除不良可引起严重的炎症过程，包括白细胞堆积、弥漫性肺泡损伤和上皮损伤，从而导致局部和循环中通过肺泡通透性增加大量释放炎症细胞因子。为了验证这一假设，我们测量了血浆和BALF中的细胞因子水平(IL-6, TNF-α)。血浆和BALF中的IL-6和TNF-α水平较低，但在假动物中可检测到，而单独施用DNase I对IL-6和TNF-α水平没有影响。相反，lps刺激小鼠血浆和BALF中的IL-6和TNF-α水平显著升高，DNase I治疗降低了这些动物的IL-6和TNF-α水平(图3)．

图3
图3

NETs调节BALF和血浆中的炎症反应。

在预定时间点DNase I处理和LPS暴露后，血浆中IL 6和TNF-α水平(A、C)及BALF (B, D)进行测量。*P < 0.05 vs。假手术组;＃P < 0.05 vs。LPS组。N = 6只/组。所示的所有数据至少代表了三个独立的实验。

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LPS间接促进了NETs的发布

LPS是否能诱导NETs释放仍有争议。在我们的实验中，使用phorbol 12-肉豆蔻酸13-乙酸酯(PMA)作为阳性对照，LPS单独不能在与中性粒细胞直接接触时诱导NETs释放;相反，lps激活的血小板有效地诱导NETs的生成。值得注意的是，DNase I处理破坏了NETs结构，而对Cit-H3和NE没有影响(图4 a, B)．有趣的是，中性粒细胞单独接触LPS时，NET-DNA水平下降，这可能与LPS能够抑制中性粒细胞凋亡并延长这些细胞的寿命有关(图4摄氏度)．与中性粒细胞相互作用的活化血小板部分依赖toll样受体4 (TLR4)，并向中性粒细胞呈现高迁移率群盒1 (HMGB1)，导致NETs的生成9，13．综上所述，在我们的ALI模型中，LPS足以使中性粒细胞参与NETs的生产;然而，这一过程不是通过LPS和中性粒细胞的直接相互作用发生的，而是由于激活的血小板或LPS产生的炎症环境，这可能对NETosis更重要。

图4
装具

激活的血小板而不是LPS单独诱导NETs释放。

中性粒细胞(105)分别不处理或用100 nM PMA刺激，作为NETs形成的阴性和阳性对照。此外，中性粒细胞与LPS (5 μg/ml)、PLT (106)， LPS + PLT, LPS + PLT + DNase I(200u /ml)，或PMA + DNase I 4 h。（一个中性粒细胞共聚焦显微镜检测NETs的免疫荧光染色。黄色箭头表示NETs的形成，白色箭头表示DNase i处理NETs的残余物。绿色:Cit-H3;红色:不;蓝色:细胞核。（B)用Image J软件分析荧光显微镜图像，计算每100个中性粒细胞中剩余NETs的数量;零表示没有观察到完整的net。（C中性粒细胞暴露于各种刺激后，细胞上清中的NET-DNA水平用PicoGreen检测试剂盒定量。*P < 0.05 vs。对照组、LPS组或PLT组;＃P < 0.05 vs。对照组;＄P < 0.05 vs。LPS + PLT组;＆P < 0.05 vs。PMA组。所示的所有数据至少代表了三个独立的实验。

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讨论

ALI/ARDS包括由多种直接和间接致病因素引起的肺部急性弥漫性炎症;这种炎症的特征是肺泡-毛细血管屏障功能受损，富含蛋白质的液体渗出到肺泡内，水肿并形成透明膜，导致急性呼吸衰竭14．在本研究中，我们观察到lps诱导小鼠ALI过程中NETs的形成增加，免疫荧光染色显示DNA、NE和Cit-H3广泛共定位证明了这一点。此外，LPS刺激肺组织Cit-H3水平和BALF中NET-DNA水平升高。从理论上讲，当DNA结构被DNase I破坏时，net相关的蛋白质应该保留下来，DNase I专门降解NET-DNA，而不是net衍生的蛋白质。有趣的是，经气管灌注DNase I导致Cit-H3和BALF NET-DNA水平下降，但只是部分而不是完全减少了net的生成。这可能是因为DNase I只分裂由中性粒细胞渗出形成的net进入肺泡，而不是毛细血管相关的net。另外，由DNase I处理的NETs可能促进巨噬细胞的清除15，16．

当NETs被释放到局部组织或循环中时，它们可以结合并促进杀死细菌、真菌和利什曼原虫。然而，过多的net生成会导致损伤作用和组织功能受损6，9，17．据本研究报道，通过DNase I消化NETs显著改善了组织损伤以及全身和局部炎症的程度，为支持NETs对肺损伤的贡献提供了证据。net来源的组蛋白对上皮细胞和内皮细胞具有高度毒性6，并且在NETs被DNase I降解后组蛋白水平的降低可能解释了为什么这种药物减轻了肺组织损伤18．LPS增加了循环和BALF中的IL-6和TNF-α水平，这可能是因为肺泡中的net与浸润到肺部的驻地组织细胞和免疫细胞相互作用，导致BALF中促炎细胞因子水平增加并释放到循环中。虽然DNase I扰乱NETs结构，促进巨噬细胞清除NETs，但没有诱导促炎细胞因子的分泌16可能导致IL-6和TNF-α水平下降;这表明NETs具有调节ALI期间全身和局部炎症的能力。在一些囊性纤维化患者中，重组人dna酶治疗可改善气流阻塞并降低感染性呼吸恶化率19．总之，靶向NETs可能是治疗ALI的一种潜在有效方法。

NETosis由中性粒细胞暴露于PMA、干扰素γ (IFN-γ)、利什曼原虫、细菌、病毒和真菌及其产物以及补体介导的调理作用引发4，20.，21，22，23．发生NETosis的激活中性粒细胞的百分比，NETs释放的速度，以及NETosis涉及的介质和分子途径因刺激的类型而异24，25．具体来说，LPS刺激NETs的生成4．然而，当中性粒细胞与LPS或血小板单独共培养时，我们没有观察到NETs的形成在体外．此外，与对照组相比，LPS诱导的细胞培养上清液中NET-DNA的数量减少，这可能是因为LPS保护中性粒细胞不发生凋亡并抑制net的形成26，27．LPS诱导NETs形成增加在活的有机体内虽然促炎分子水平的升高(如IL-6、TNF-α、HMGB1等)、血小板活化和LPS的其他间接作用可能解释了这一现象。

文献证据表明，中性粒细胞和血小板都参与并协同促进脓毒症期间的炎症反应;血小板以嗜中性粒细胞依赖的方式被募集到肺毛细血管和肝窦，导致循环血小板数量减少以及肺和肝脏功能障碍和/或衰竭9．在我们的研究中，中性粒细胞直接接触LPS时不能形成net在体外这表明血小板对于LPS引发的NETosis是必要的。TLR4是TLR家族的一员，在不同的细胞类型中表达，是LPS的特异性跨膜受体。TLR4与LPS的相互作用激活信号级联，导致促炎细胞因子的产生和随后的免疫反应，从而创造有利于NETosis的炎症环境。TLR4-和lps介导的活化血小板与中性粒细胞的结合促进了高效的NETs释放，部分原因是活化的血小板将HMGB1呈现给中性粒细胞，并使其进行自噬和NETs生成13．

综上所述，在lps诱导的ALI过程中，NETs在气管中形成，引起器官损伤并引发炎症反应，DNase I降解NETs的形成促进了net蛋白的清除，并对小鼠ALI具有保护作用。与我们预期的结果相反，NETs是由lps刺激的血小板诱导的，这表明中性粒细胞和革兰氏阴性细菌之间的直接相互作用可能不是NETs生成所必需的。更好地理解LPS诱导的NETs释放机制以及NETs对宿主免疫系统调节的影响，将有助于开发潜在的ALI新治疗策略。

材料与方法

动物

雄性C57BL/6小鼠，8-10周龄，体重25 - 30 g，购自中南大学实验动物中心。所有小鼠都被饲养在特定的无病原体环境中。所有动物实验均经中南大学动物保护与使用委员会批准。所有实验均按照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》进行。

LPS/ALI模型及实验设计

lps诱导ALI模型采用前面描述的方法实现28，29．短暂地，在麻醉后，气管暴露在外。一根导管(Abbot, Wiesbaden, Germany)通过口腔插入气管，小鼠接受气管内注射LPS (大肠杆菌0111年:B4;Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)，剂量为4mg /kg，加入25 μl PBS，然后再加入200 μl空气，以确保每个肺都有沉积。对照组小鼠气管内注射PBS 25 μl。安装后，伤口被缝合，老鼠可以自由地获得食物和水来恢复。PBS或LPS给药24小时后，处死动物，采集血液和肺。随后，暴露气管，通过胸骨正中切开术打开胸部，从小鼠身上切除肺。用电子秤测量左肺湿重(W)， 65℃烘箱干燥48小时，确定干重(D)。计算W/D重量比，计算含水量。取出右肺，用4%多聚甲醛固定24 h。每次用0.5 ml的冷PBS-EDTA (0.5 M)通过20号导管灌洗肺，并从每只小鼠中灌注和提取总共1.5 ml的BALF以检测总蛋白水平。

DNase I处理

在第二组动物中，小鼠被随机分为一组，接受20 μl的3 mg/ml DNase I (5 mg/kg;(8.77 mg/ml NaCl;0.15 mg/ml CaCl2)两次通过20号血管导管(BD, Canada)，每次200 μl空气。

苏木精和伊红染色

右肺叶用4%PFA固定，石蜡包埋，用于组织病理学分析。5微米切片放在玻片上，用苏木精和伊红染色(H&E)。一个LI severity was evaluated by assigning a semiquantitative histology score via a double-blind method as described previously30.．简单地说，肺损伤的组织学指标包括肺泡水肿、出血、肺泡间隔增厚和白细胞浸润。每个项目被分为4个等级，从0到3(0 =正常;1 =轻度;2 =中度;3 =严重)，然后计算ALI总评分。

定量BALF DNA和蛋白质水平

BALF上清双链DNA采用定量it PicoGreen进行定量®(Invitrogen，加拿大)遵循制造商的协议。通过双辛酸蛋白测定(Biomiga，美国)定量BALF中的蛋白浓度。

中性粒细胞和血小板的分离

根据制造商的说明，使用市售小鼠中性粒细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec, Germany)从胫骨和股骨骨髓中分离小鼠中性粒细胞。常规姬姆萨染色验证中性粒细胞制剂的纯度(一致为> 95%)，台潘蓝排除法验证细胞活力(>97%)。

血小板分离:抗凝血用柠檬酸-柠檬酸葡萄糖(ACD;1:9血vol/vol)通过异氟醚麻醉小鼠心脏穿刺获得。每只小鼠的采样血容量约为1.2-1.5 ml。样品在室温下160 g离心10分钟，收集富含血小板的血浆，随后通过与25 mM哌嗪二磺酸缓冲液(PIPES)平衡的sepharose 2B柱过滤。然后将血小板在室温下以650 g离心10分钟，从沉淀物中提取，并在RPMI 1640中重悬。

net的识别在活的有机体内而且在体外

在我们的在活的有机体内实验:石蜡包埋小鼠肺切片(4 μm)，切片制备后装入玻片上。脱蜡后，用柠檬酸缓冲液提取抗原，用0.1% Triton X-100渗透10 min，然后用含3%牛血清白蛋白(BSA)和1%驴血清的PBS堵塞标本。切片用一抗孵育，特别是抗瓜氨酸组蛋白H3 (1:100;Abcam)和抗中性粒细胞弹性蛋白酶(1:50;Santa Cruz)，然后用Alexa Fluor 488驴抗兔检测(1:500;Abcam)和Alexa Fluor 647驴抗山羊(1:500;Abcam)二抗分别在4°C下过夜。采用4 '，6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)检测DNA。

在我们的在体外实验中,中性粒细胞(105)被镀，并让其粘附在涂层板上1小时，然后用PMA(100 nM;Sigma-Aldrich)， LPS(5 ug/ml)，血小板(106)，或LPS与血小板作用4小时。载玻片用上述一抗和二抗孵育;抗cite - h3一抗、抗中性粒细胞弹性蛋白酶二抗Alexa Fluor 488驴抗兔和Alexa Fluor 647驴抗山羊的浓度分别为1:60、1:100、1:80和1:800。用Olympus Fluoroview 500共聚焦显微镜观察载玻片。

net的量化

为了定量细胞培养上清液和小鼠血浆中的NET-DNA，使用PicoGreen检测试剂盒(Invitrogen)。

免疫印迹

Western blot检测使用从肺组织中获得的全细胞裂解物。膜用Cit-H3抗体(1:1000,Abcam)和抗gapdh抗体(1:2000,Proteintech)孵育过夜，作为内部对照。

炎症指标的量化

根据制造商说明，使用市售小鼠IL-6和TNF-α酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(RayBiotech, USA)测定小鼠血浆和BALF中的IL-6和TNF-α水平。

统计分析

结果以均数±标准差(SD)表示。两组以上数据之间的差异通过执行单向方差分析，然后进行Tukey的多重比较检验来评估。P < 0.05(双侧)为有统计学意义。

额外的信息

如何引用这篇文章:刘，S。等．中性粒细胞细胞外陷阱是由脂多糖间接触发的，并有助于急性肺损伤。科学。代表。6, 37252;Doi: 10.1038/srep37252(2016)。

出版商的注意:施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。

参考文献

  1. Zambon, M. & Vincent, J. L.急性肺损伤/ARDS患者的死亡率随着时间的推移而下降。胸部133,1120-1127(2008)。

    文章谷歌学者

  2. Modrykamien, a.m. & Gupta, P.急性呼吸窘迫综合征。Proc (Bayl Univ Med Cent) 28, 163-171(2015)。

    文章谷歌学者

  3. 维拉尔等。ALIEN研究:肺保护性通气时代急性呼吸窘迫综合征的发生率和结局。重症监护医学37,1932-1941(2011)。

    文章谷歌学者

  4. 布林克曼等人。中性粒细胞细胞外陷阱杀死细菌。科学303,1532-1535(2004)。

    中科院广告文章谷歌学者

  5. 马斯伯格等人。中性粒细胞丝氨酸蛋白酶介导凝血和先天免疫的相互偶联。中华医学杂志16,887-896(2010)。

    中科院文章谷歌学者

  6. Saffarzadeh, M.等。中性粒细胞细胞外陷阱直接诱导上皮细胞和内皮细胞死亡:组蛋白的主要作用。PLoS One 7, e32366(2012)。

    中科院广告文章谷歌学者

  7. 中性粒细胞在急性肺损伤中的作用。Mol Med 17, 293-307(2011)。

    中科院文章谷歌学者

  8. Kahlenberg, j.m.， Carmona-Rivera, C. Smith, C. K. & Kaplan, m.j.红斑狼疮巨噬细胞中嗜中性粒细胞胞外陷阱相关蛋白激活增强NLRP3炎性小体。中华免疫杂志190,1217-1226(2013)。

    中科院文章谷歌学者

  9. 克拉克，S. R.等。血小板TLR4激活中性粒细胞细胞外陷阱，诱捕脓毒性血液中的细菌。医学杂志13,463-469(2007)。

    中科院广告文章谷歌学者

  10. 菊花，A.等。中性粒细胞细胞外陷阱促进成纤维细胞的分化和功能。中华病理学杂志(2014)。

    中科院文章谷歌学者

  11. Aldabbous, L.等人。中性粒细胞细胞外陷阱促进血管生成:来自肺动脉高压血管病理学的证据。动脉血栓血管生物学(2016)。

  12. Douda, d.n, Jackson, R, Grasemann, H. & Palaniyar, N.先天性免疫收集表面活性剂蛋白D同时结合中性粒细胞胞外陷阱和碳水化合物配体并促进细菌陷阱。中华免疫杂志187,1856-1865(2011)。

    中科院文章谷歌学者

  13. Maugeri, N.等人。活化的血小板向中性粒细胞呈现高迁移率群盒1，诱导自噬，促进中性粒细胞细胞外陷阱的挤压。《血栓血肿杂志》12,2074-2088(2014)。

    中科院文章谷歌学者

  14. 惠勒，a . P. &伯纳德，G. R.急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征:临床综述。柳叶刀369,1553-1564(2007)。

    文章谷歌学者

  15. Bosmann, M. & Ward, p.a.急性肺损伤的蛋白质治疗:靶向中性粒细胞细胞外陷阱。专家意见在Ther目标18,703-714(2014)。

    中科院文章谷歌学者

  16. Farrera, C. & Fadeel, B.巨噬细胞清除中性粒细胞胞外陷阱是一个无声的过程。中华免疫杂志191,2647-2656(2013)。

    中科院文章谷歌学者

  17. 黄，H.等。损伤相关分子模式激活的中性粒细胞细胞外陷阱加重无菌性炎症性肝损伤。《国际肝病》62,600 - 614(2015)。

    中科院文章谷歌学者

  18. 默扎等人。中性粒细胞细胞外陷阱诱导胰蛋白酶激活、炎症和严重急性胰腺炎小鼠的组织损伤。胃肠病学149,1920-1931。e1928(2015)。

    文章谷歌学者

  19. Fuchs, H. J.等。雾化重组人脱氧核糖核酸酶对囊性纤维化患者呼吸症状加重和肺功能的影响Pulmozyme研究组。中华医学杂志(1994)。

    中科院文章谷歌学者

  20. Martinelli, S.等人。中性粒细胞分化过程中介导干扰素依赖性细胞外陷阱形成的基因诱导。中国生物医学工程学报(自然科学版)，2004,27(4):342 - 342。

    中科院文章谷歌学者

  21. Fuchs, t.a.等人。新的细胞死亡程序导致中性粒细胞细胞外陷阱。中国生物医学工程学报(自然科学版)，2004,18(2)。

    中科院文章谷歌学者

  22. 山田，等。小鼠细菌性肺炎期间中性粒细胞产生干扰素γ。Am J呼吸急救医疗183,1391 - 1401(2011)。

    中科院文章谷歌学者

  23. Yipp, B. G.等。感染引起的NETosis是一个涉及中性粒细胞多任务处理的动态过程在活的有机体内．中华医学杂志18,1386-1393(2012)。

    中科院文章谷歌学者

  24. 哈基姆，A.等。Raf-MEK-ERK通路的激活是中性粒细胞细胞外陷阱形成所必需的。《化学与生物》7,75 - 77 (2011)

    中科院文章谷歌学者

  25. Parker, H.， Dragunow, M.， Hampton, M. B.， Kettle, A. J. & Winterbourn, C.中性粒细胞胞外陷阱形成中NADPH氧化酶和髓过氧化物酶的需求因刺激而异。中国生物医学工程学报(自然科学版)

    中科院文章谷歌学者

  26. Remijsen Q.等人。parabutoporin对中性粒细胞自发凋亡的抑制不依赖于NADPH氧化酶的抑制，而是依赖于Akt的脂质筏刺激。中国生物医学工程学报(自然科学版)，2004,18(2)。

    中科院文章谷歌学者

  27. Remijsen Q.等人。中性粒细胞胞外陷阱细胞死亡需要自噬和超氧化物生成。Cell Res 21, 290-304(2011)。

    中科院文章谷歌学者

  28. 杨，K. Y.等。静脉输注诱导多能干细胞可减轻内毒素诱导的小鼠急性肺损伤。胸廓140,1243-1253(2011)。

    中科院文章谷歌学者

  29. 王，L.等。blt1依赖的肺泡招募CD4(+)CD25(+) Foxp3(+)调节性T细胞对急性肺损伤的缓解很重要。Am J呼吸急救医疗186,989-998(2012)。

    中科院文章谷歌学者

  30. McGuigan, r.m.等人。油酸在实验室大鼠急性肺损伤:工作模型的建立和抗自由基在急性期的证据。Curr Surg 60,412 - 417(2003)。

    文章谷歌学者

下载参考

确认

实验方案经中南大学动物保护与使用委员会批准。所有实验均按照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》进行。国家自然科学基金资助(no. 1);81470266)。

作者信息

从属关系

  1. 中南大学湘雅医院肺科与重症医学科，湖南长沙410008

    刘帅，苏晓莉，潘品华，谭宏毅，吴东东，刘本，李海涛，李浩思，李毅，戴敏辉，李媛媛，胡承平

  2. 中南大学湘雅医学院附属湖南肿瘤医院胸科，湖南长沙，410013

    Lemeng张

  3. 中南大学湘雅医院病理科，长沙，410008

    Yongbin胡

  4. 匹兹堡大学外科，美国宾夕法尼亚州匹兹堡15213

    艾伦Tsung

作者
  1. 帅刘
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  2. 小丽苏
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  3. Pinhua锅
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  4. Lemeng张
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  5. Yongbin胡
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  6. (谭
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  7. 东东吴
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  8. 刘本
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  9. 等李
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  10. Haosi李
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  11. 易李
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  12. Minhui戴
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  13. 李渊源
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  14. Chengping胡
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  15. 艾伦Tsung
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贡献

S.L.进行实验并起草手稿;s.l.， h.t.， d.w.， B.L.和Y.L.分析了数据;s.l.、X.S.和C.H.对实验结果进行了解释;Y.H.验证了病理结果;s.l.、h.l.、h.l.、Y.L.和M.D.编制了数字;P.P.和L.Z.构想并设计了这项研究;P.P.和A.T.对手稿进行了编辑和修改;和P.P.批准了最终版本的手稿。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。

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刘山，苏，X，潘，P。et al。中性粒细胞细胞外陷阱是由脂多糖间接触发的，并有助于急性肺损伤。Sci代表6，37252(2016)。https://doi.org/10.1038/srep37252

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