文摘
肺部微生物组的改变已经在多种呼吸系统疾病。至关重要的是确定如果一个呼吸道微生物存在出生时,如果是这样,是否与随后的肺部疾病。我们发现一个建立多元化和类似呼吸道微生物在早产儿和足月婴儿出生,这是更加多样化和建立不同于年长的早产儿慢性肺疾病(支气管肺的发育不良)。一致的颞dysbiotic呼吸道微生物的变化被认为从出生到在极早产儿支气管肺的发育不良的发展。属乳酸菌在婴儿出生时减少绒毛膜羊膜炎和早产婴儿随后继续发展肺部疾病。我们的研究结果,结合先前的文献表明胎盘和羊水微生物,显示胎儿呼吸道微生物的收购。我们推测早期呼吸道微生物可能主要发展中肺免疫系统和生态失调的发展可以为后续的肺部疾病。
介绍
微生物分析基于16 s rrna序列的基因特征的细菌物种现在的身份和相对丰度与传统的微生物学方法,限于分析物种很容易培养1,2。研究人类肺部微生物的环境中肺健康和疾病是一个新兴的研究领域3但它是未知的,当呼吸道微生物和航空港口是否建立微生物组出生后不久。气道细菌的致病性角色的特定变化的证据是最强的肺部疾病,如囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和哮喘,但目前尚不清楚如何最初成立于新生儿呼吸道微生物3,4。极早产儿出生与肺发育不成熟,容易受到多个受伤,干扰肺肺泡和血管发展导致支气管肺的发育不良(桶)。推测,桶的发展是由炎症介导至少部分二级呼吸道感染和多个研究显示肺部炎症标记物和桶发病机制之间的联系5,6,7,8。还在开发过程中气道损害之间的因果关系的方向和呼吸殖民与微生物仍悬而未决。无序呼吸道微生物证明应该参与疾病的发病机理,这将是直接利益,试图开发出新的治疗干预措施。我们假设一个呼吸道微生物存在出生,出生时呼吸道微生物群在不同极低出生体重(ELBW)早产儿出生体重(< 1000 g)和足月婴儿和将随时间变化(英尺)早产婴儿继续开发桶。我们还假设早期(出生)呼吸道微生物群不同ELBW婴儿后继续开发桶从弹性到疾病的人。我们进行这项研究最初在伯明翰阿拉巴马大学(UAB)地区新生儿重症监护室(RNICU),然后使用验证证实了我们的发现群体从不同的中心在费城。在这项研究中,我们发现不同气道微生物与预后可能出生时,就变成了在开发过程中特异表达的桶。
结果
登记患者的人口统计学和临床特征的发现队列所示表1。根据他们的肺结果,23 ELBW婴儿进一步归类为那些没有发展桶(耐桶,n = 13)或之后出现的桶(桶倾向,n = 10) 36周的postmenstrual年龄(PMA)。登记的人口统计学和临床特点ELBW患者UAB所示表2。
验证组根据他们的肺也分类结果,为婴儿没有继续开发桶(耐桶,n = 7)或之后出现的桶(桶倾向,n = 7)。ELBW登记患者的人口统计学和临床特征的验证队列所示表3。
确定时间呼吸道微生物的变化,我们收集串行气管吸入物(TA)在不同时间点从出生直到桶的发展5个婴儿发现队列。
ELBW的航空公司和英国《金融时报》的婴儿出生时甚至有明显的微生物群
我们能够发现和描述细菌的DNA在气管吸入物ELBW和英国《金融时报》婴儿出生后不久(无花果1和2)。所有标本导致放大16 s rRNA用于微生物分析。交货前大多数早产儿的母亲接受抗生素治疗(表4)。统计分析,没有不同的呼吸道微生物组的婴儿母亲接受产前抗生素与婴儿的母亲没有。
比较的新生婴儿和BPD患者的肺部微生物群。
(一个)条形图描绘之间最常见的细菌类群的相对多度尺,ELBW和桶婴儿。(B)相比,新生婴儿和ELBW postmenstrual年龄匹配的英国《金融时报》的婴儿,婴儿有桶的增加变形菌门和减少厚壁菌门和Fusobacteria。(C)主坐标分析PCoA情节(β多样性)展示未加权的UniFrac ELBW颜色样本与样本点之间的距离,英尺或桶婴儿。集群紧密的样品被认为分享更大比例的种系发生树相比,样本更分开。ELBW和英国《金融时报》的婴儿也有类似的β多样性,这是非常不同的β多样性桶婴儿。(D少)香农多样性指数描述微生物α多样性与桶婴儿相比,英国《金融时报》和ELBW婴儿。
肺属水平微生物大量ELBW婴儿,婴儿和BPD患者英尺。
热图描绘最常见的细菌家庭的相对丰度在属水平。统计上的显著差异在微生物丰度ELBW肺部微生物与桶婴儿(*)和英国《金融时报》和桶之间的婴儿(#)。
呼吸道微生物ELBW和英国《金融时报》的婴儿在出生时相似
分类分析在这项研究表明肺部微生物相似ELBW和英国《金融时报》的婴儿在出生时无论妊娠年龄(图1 a, C)。英国《金融时报》ELBW和婴儿有优势的厚壁菌门和变形菌门第一天的生活,除了的存在Tenericutes放线菌,拟杆菌,梭菌属,蓝藻和Verrucomicrobia(图1一个)。细菌类群的相对多度ELBW没有差异,英国《金融时报》的婴儿。我们比较组间的多样性和计算了香农多样性指数α多样性(给出一个估计的丰富性、均匀度和微生物多样性在一个示例)。没有区别的香农α多样性ELBW和英国《金融时报》的婴儿(p = 0.46, t检验,图1 d)。所示的主坐标分析(PCoA)图(图1 c),桶婴儿微生物集群分别与更大的Unifrac距离分离,而ELBW和英国《金融时报》的微生物有明显的重叠PCoA情节(p = 0.19, permanova测试,图1 c)。Tenericutes包括属Ureaplasma被确定的气管吸入物ELBW和英国《金融时报》的婴儿(无花果1和2),尽管它的相对丰度高于ELBW婴儿。
气道不同的微生物组成和多样性与桶婴儿相比,英国《金融时报》和ELBW婴儿
而post-menstrual新生婴儿英尺匹配年龄,婴儿确诊后的气道微生物桶增加门的特点变形菌门和减少门厚壁菌门和Fusobacteria(图1 a, B)。γ变形菌门桶婴儿而更丰富α-变形菌门低丰度在桶婴儿婴儿相比,新生儿ELBW和英国《金融时报》(图2)。在属级,最丰富的变形菌门在BPD患者肠杆菌科(图2)。
不同微生物组成和桶之间英国《金融时报》证实了婴儿香农α多样性的差异(p < 0.002;学习任务;图1 d)。我们使用β多样性Unifrac-weighted距离(含丰富的存在与否之间的辣子鸡样品和演示了如何分布在不同的微生物样品)。我们发现不同的集群中描述PCoA块Unifrac距离(p < 0.0001;permanova测试;图1 c)。微生物多样性和丰富(α多样性的差异p < 0.003, t检验,图1 d;β多样性p < 0.009, permanova测试,图1 c)也被认为与桶(ELBW婴儿和婴儿之间无花果1和2)。
确认存在变形菌门BPD患者样本,我们还执行特定的内毒素化验,结果下面。
呼吸道微生物ELBW婴儿继续开发桶显示一致的颞失调
五极早产儿,后从出生直到桶的发展和串行不同产后时间点采集的TA(意向1 - 7天,在8至21天,天,天41-60,> 60天)(图3)。的第一个收集样本(标记为1 - 7天)的第一天在4 5例(病人A, B, C, D),而在5th病人第一次样品收集了5天。这些婴儿的人口表5。所有5个婴儿,尽管抗生素在不同时间点的多个课程,有一个不同的时间dysbiotic下降变化厚壁菌门并在大量的增加变形菌门随着时间的推移,(图3)。
颞ELBW婴儿呼吸道微生物的变化发展桶。
饼图显示气道微生物的变化随着时间在5 ELBW患者(安妮从出生开始)。在所有患者中,大量的相对增加变形菌门和相对丰度下降厚壁菌门、放线菌、Tenericutes,拟杆菌门和其他微生物,随着时间的推移。
ELBW通过剖腹产出生的婴儿(CS)和阴道分娩呼吸道微生物群,不出生时不同
的23 ELBW婴儿发现队列,15(65%)出生和CS的8例(35%)经阴道分娩。没有统计学差异ELBW婴儿呼吸道微生物群的CS比阴道分娩出生的(所有微生物类群:p > 0.1, t检验)。
属乳酸菌是减少呼吸道微生物群和绒毛膜羊膜炎ELBW婴儿吗
在我们发现的23 ELBW婴儿,组织学绒毛膜羊膜炎10例(43%)。婴儿有和没有组织学绒毛膜羊膜炎的微生物不同在属级而不是在门级。减少大量的属乳酸菌在婴儿暴露在绒毛膜羊膜炎相比,婴儿不暴露于绒毛膜羊膜炎(p = 0.037, t检验,图3 d)。在我们验证群14婴儿,只有2绒毛膜羊膜炎,因此这种分析是不可能的(表3)。
属乳酸菌不太丰富的晚些时候在婴儿的早期呼吸道微生物发展桶
ELBW婴儿从我们发现组和验证组根据他们的肺被分为两组结果为抗桶或桶倾向。
发现一群
全部23 ELBW婴儿存活36周PMA,相似的人口统计特征(表2)。10的23个婴儿继续开发桶(桶倾向)(图4)。13的23 ELBW没有开发桶和被认为对疾病(耐桶)(图4)。门的水平微生物丰度(图4 a, B)和α多样性(p = 0.18,图4摄氏度)耐桶和桶之间并没有统计上的不同倾向的团体。然而在属级,属乳酸菌不丰富桶倾向的婴儿在出生时,桶的婴儿相比(p < 0.05, t检验;图4)。
ELBW婴儿的早期呼吸道微生物及其与发展协会桶——发现队列。
(一个)热量地图的相对丰度在第一天属样本ELBW婴儿继续开发桶(BPD -倾向)与那些不耐(桶)。丰富的属乳酸菌(# # #)是减少桶-倾向组(p = 0.05)。(B)肺门水平分布的微生物团体之间的主要区别。(C)香农多样性指数α多样性不是统计不同组(p = 0.18)。(D)条形图描绘的乳酸菌属低丰度与绒毛膜羊膜炎的母亲产下的婴儿。
验证组
ELBW婴儿从我们验证队列也根据他们的肺结果分为两组——耐桶婴儿(7)和桶倾向的婴儿(7)。两组人相似的人口统计特征(表3)。一致的结果我们发现队列,乳酸菌没有丰富的属级桶倾向相比,婴儿在出生时耐桶(p < 0.04, t检验;图5)。门的水平微生物丰度(图5 a, B)和多样性(p > 0.1,图5度)耐药或桶桶之间并没有统计上的不同倾向的团体。
ELBW婴儿的早期呼吸道微生物及其与发展协会桶——验证队列。
(一个)热量地图的相对丰度在第一天属样本ELBW婴儿继续开发桶(桶倾向)与那些不耐(桶)。丰富的属乳酸菌(* * *)是减少桶倾向组(p = 0.04)。(B)肺门水平分布的微生物团体之间的主要区别。(C)香农多样性指数α多样性团体之间没有差异(p > 0.1)。
图6展示了相对差异乳酸菌,在这两种发现和验证军团。
早期气道乳酸菌在发现和验证的群组研究中进行丰富。
酒吧图表描述的相对丰度乳酸菌在ELBW婴儿在出生时。在发现队列和验证组的相对丰度乳酸菌是耐桶婴儿相比,明显高于桶倾向的婴儿(p < 0.05)。
内毒素水平增加航空公司建立了桶的婴儿
使用一个非常具体的鲎变形细胞溶解产物(LAL)内毒素试验我们决定内毒素在TA (proteobacterial产品)浓度。内毒素表达显著增加桶相比,婴儿在出生的婴儿(图7,p < 0.05)。这对应于我们的呼吸道微生物分析发现婴儿增加变形菌门的建立了桶,相比ELBW或英国《金融时报》的婴儿在出生时。出生时,抗内毒素浓度的航空公司的桶和桶倾向ELBW婴儿显示统计趋势增加桶倾向的婴儿,(图7 b,p = 0.1)。此外,内毒素水平无差异ELBW婴儿与英国《金融时报》的婴儿在出生时(p > 0.1,数据未显示)。
鲎变形细胞溶解产物显色内毒素水平气管吸入的婴儿。
(一个)内毒素浓度增加气管吸入样本收集与桶婴儿相比,婴儿在出生时(p < 0.05)。(B)在航空内毒素含量无差异的耐桶和桶倾向ELBW婴儿出生时(p = 0.1)。
讨论
在这项研究中,我们评估气道微生物极早产儿和足月婴儿出生后不久在早产儿和桶。小说的一个主要发现是,航空公司有不同的微生物甚至在出生时胎龄无关。到目前为止,它一直认为婴儿皮肤粘膜表面填充,阴道和肠道微生物来自母亲9。通常认为,殖民的新生儿起源于产道,我们惊奇地发现,阴道分娩的呼吸道微生物交付和剖腹产section-delivered新生儿相似,这表明微生物DNA的航空公司可能是经派生,符合报告,胎盘有丰富的微生物10。我们还发现呼吸道微生物群与桶婴儿减少多样性和非常不同的早产儿出生后不久,或者在类似post-menstrual足月婴儿的年龄。我们的观察表明,早期呼吸道微生物群与桶的发展ELBW婴儿和呼吸道微生物显示一致的变化随着时间的推移,从出生到桶的发展。
没有直接访问新生儿肺组织和由于无法获得broncheoalveolar灌洗液在新生儿,代孕气管吸入物进行评估的过程降低航空公司和远端肺。到目前为止,两项研究利用文化独立的方法来检测在早产儿呼吸道生物。在研究10婴儿,Mourani等。11证明了早产儿的航空公司不是无菌。在他们的研究中,葡萄球菌,Ureaplasma以及和Ureaplasma体是最常发现主要生物等生物识别假单胞菌、肠球菌和埃希氏杆菌属。罗曼等。12研究了25个早产儿呼吸道微生物,但没有评估正常足月婴儿的微生物群。我们的研究提供了一个更详细的比较ELBW呼吸道微生物,英尺和桶的婴儿。紧密的孕龄标准在我们ELBW集团(平均24.3±1.5周的妊娠)帮助我们研究婴儿发展中风险最高的桶。在我们的群体中,大多数mothersof ELBW婴儿接受产前抗菌治疗接近交付。是常规临床实践与抗菌素治疗早产的母亲,很难产生足够的样本大小来确定抗菌治疗的效果在新生儿呼吸道微生物很少有婴儿不暴露。
我们研究的一种力量是无菌气管插管ELBW吸入样本集合和英国《金融时报》婴儿出生或在6个小时内,从而减少污染的机会或产后殖民。只有样品> 1000序列读取用于定性分析,从而进一步减少错误结果的机会。样品细菌生物量较低的被丢弃。的增加变形菌门婴儿建立桶内毒素水平,相应的增加,增加了有效性的微生物分析。
在这项研究中我们采用基因组的方法,而不是文化,利用独立开发和验证组探讨呼吸道微生物组的预测作用出生时桶的未来发展。一个中心发现的减少乳酸菌丰富的呼吸道微生物与绒毛膜羊膜炎的母亲产下的婴儿。Gritz和班达里13最近强调的重要性吗乳酸菌spp。在早产儿。正如绒毛膜羊膜炎是一个独立桶的相关危险因素14,这一发现可能是重要的在定义绒毛膜羊膜炎的协会和桶。我们还发现了乳酸菌婴儿出生时丰富的航空BPD-Predisposed ELBW相比BPD-Resistant婴儿。这一发现是相等的(merrill Lynch)的结果等。15,16,17有报道,其他呼吸道疾病有益乳酸菌的作用。在老鼠身上的研究表明鼻内乳酸杆菌可能更有效的管理比胃内的应用程序在减少过敏性气道炎症,可能与增加t调节细胞在肺部18。其他调查人员表明,更高的细菌丰度non-specific-pathogen-free老鼠与肺泡越来越小的大小表明肺发展更好,这是证实移植乳酸菌。成无菌鼠,以改善肺泡的发展19。我们最近发现,粪便微生物群在早产儿可能不同的中心20.可能有中心气道细菌的差异,这可能会导致中心短期以及长期肺的变化结果。因此,我们验证了我们的研究结果与患者样本从一个不同的中心。相对减少乳酸菌丰富出生时在呼吸道微生物被发现桶的预测验证队列。我们的研究结果表明,呼吸道微生物在出生时可能用于预后和可能被调制可能使用“呼吸益生菌”治疗早产儿肺疾病干预。尽管众所周知,交付方式可以塑造采集和新生儿的皮肤微生物群的结构9,我们的研究没有发现差异的呼吸道微生物ELBW通过剖腹产出生的婴儿与阴道分娩出生的。这一发现表明,呼吸道微生物可能是建立在交付(因为它是不同的和类似的极早产儿和足月婴儿),并且有可能是通过一个细菌的产品经胎盘的通道。Aagard等。10表明,胎盘微生物非常多样化,类似于口腔微生物和类似于呼吸道微生物组在这个研究。结实的等。21也证明克基板的正面和负面的胞内细菌27%的胎盘,即使它是非常可能的,视觉识别几个选择高功率字段可能会明显低估。我们推测,为什么胎盘微生物的生物原理类似于口腔微生物组10和新生儿呼吸道微生物是因为胎盘造血的口腔微生物的转移10,22,23,24,25其次是经胎盘的胎盘转移微生物群确保早期气道其为病原体微生物及其相关的分子模式可以启动建立呼吸道先天免疫在呼吸道病原体可以建立一个利基。或者可能有当地的微生物转移从胎盘羊水,胎儿肺部获得。多项研究利用文化和文化无关现在已经证实,不同种类的细菌中发现羊水26。羊水微生物群和呼吸道微生物群可能有共同的起源来自胎盘和微生物的水平这些池之间的交叉迁移需要确定。
尽管所有试图收集TA标本无菌的方式,有可能污染可能发生因为吸入微生物群可能导致呼吸道微生物27。这可以解释增加的属葡萄球菌丰富出生时在桶的航空公司——预设ELBW婴儿在我们发现队列,并没有验证样品从我们的第二个网站。还有,助教可能不能代表真正的微生物的远端肺和可能包含口腔微生物群或吸气胃微生物群除了呼吸道微生物群。因此我们使用我们的研究策略,早期(出生时或者在6小时内)助教样本的集合,当所有的婴儿喂食。除了我们使用样品只有> 1000序列读取。限制我们的研究是“正常”的缺席足月控制与病组比较,正常婴儿得不到成功。虽然我们的英国《金融时报》婴儿队列可能不是完美的控制,他们是唯一和最接近的选项。另一个限制是我们研究的定性性质,作为我们没有执行个体细菌量化。
串行微生物分析相同的病人可能产生有用的信息在时间变化导致桶。因此我们收集了极度早产儿的助教样本以串行的方式,发现一致的时间变化呼吸道微生物从出生直到桶的发展。这些婴儿是最小的可行的妊娠年龄从22 - 24周,因此是最容易发展桶。所有五个婴儿呼吸道微生物群有类似的时间变化,增加丰富的变形菌门和减少厚壁菌门在呼吸道微生物组随着时间的推移,尽管多个疗程的抗生素在不同的时间点。属乳酸菌已经知道有很强的消炎吗28,29日,30.,31日,32,33可以调节肺泡发展动物模型19。因此,颞微生物组成的生态失调的增加变形菌门和减少厚壁菌门如乳酸菌可能导致气道炎症与桶,导致肺损伤发展。串行气管样品发现在我们的研究中表明,最初的肺部微生物在婴儿往往随时间而变化。很可能产后呼吸道微生物的变化是由暴露在环境微生物和调制的抗菌治疗婴儿。
进一步理解复杂的角色在早产儿呼吸道微生物需要调查的微生物群的基因和宿主之间的相互作用。有可能,微生物与宿主可能有益的相声早产儿肺和微生物的多样性造成密集护理干预使宿主肺情绪更容易损伤和炎症。肺部微生物,类似的其他部分,可以操纵纠正失调和恢复“健康”通过使用益生菌的微生物群落,益生元或抗生素。生命早期肠道微生物变化包括生产microbial-derived代谢物的变化和类似的现象可能发生在肺部34。因此,未来的深入研究胎儿肺部微生物都是合理的和正在进行。此外,进一步的研究在gut-lung轴和肺外微生物的潜在作用呼吸道疾病发展的需要作进一步的探讨。
方法
我们进行了一项前瞻性队列研究2014年10月至2015年3月在伯明翰阿拉巴马大学(UAB)地区新生儿重症监护室。伯明翰阿拉巴马大学的机构审查委员会批准了人类主体协议和批准免除同意作为样本获得常规临床护理,以完全消除识别信息的方式处理。依照经批准的方法进行了指导方针。在线数据的进一步细节补充。
患者人群
发现队列(UAB)
天生的和outborn ELBW和英国《金融时报》的婴儿在出生时进行了气管插管,机械通气(在生命的最初6个小时)。此外,婴儿被诊断为中度或重度桶在36周的PMA使用生理定义的定义35被包括在内。收集样本共有150名婴儿但只有51被用于分析提出了手稿基于严格的入选标准(23 ELBW婴儿和婴儿10英尺——出生时获得的样品或出生后6小时内插管的时候;18婴儿建立桶——样品获得36周时PMA ETT变化;样品只有> 1000细菌序列读取使用)。所有10个足月的婴儿了,在气管插管或出生后6小时内由于手术适应症(先天性心脏病,腹壁缺陷)或由于围产期抑郁症(没有胎粪吸入综合征)的迹象。样本大小的计算不能表现在这个人口没有基线数据可用,这是第一个研究的领域,但是统计力量成立以后使用标准的统计方法描述。
没有具体的除外。绒毛膜羊膜炎是由胎盘组织病理学和所有的母亲绒毛膜羊膜炎是在出生前服用抗生素。
验证队列(费城)
我们利用患者样本从费城作为验证队列来确认我们的数据。助教天生的样本和outborn ELBW婴儿出生时接受气管插管,机械通气是包括在内。这些样本收集,作为正在进行的研究的一部分36,37,38。
样品收集
气管吸入(TA)标本取自患者插管时在第一个小时的生活,此后每当气管吸临床表明,单位协议。样品确保婴儿,获得充分的氧气。TA收集滴注法涉及的协议1毫升无菌等渗盐水到婴儿的气管内管,人工装袋通过气管内管三个呼吸,吸入的液体无菌粘液陷阱。在80年−样本冷冻储存oC直到进一步的处理。类似的协议是在这两个研究地点。
隔离微生物DNA,建立16 s V4扩增子库和DNA测序
微生物基因组DNA是孤立和PCR引物来扩增编码使用独特的酒吧V4 16 s rRNA基因区域创建一个“扩增子库”从个体样本39,40。PCR产物测序使用次世代测序Illumina公司MiSeq平台39。序列数据覆盖了16 s rRNA V4地区PCR产品长度paired-end读取250 ~ 255基地和基地。序列分为操作分类单元(辣子鸡)。只包含样本> 1000读取。α多样性的价值(在示例多样性)使用香农的indez计算41。α多样性的差异在样本计算使用t。Unifrac分析是用来确定不同样本之间的关系(β多样性)42。β多样性的差异在不同的组测量使用permanova测试。主坐标分析(PCoA)使用想象所有的样品之间的不同。3 d PCoA情节生成使用皇帝43。所有原始数据文件已经上传在网上阅读归档(SRA - SUB1512169)序列。
临床资料收集
数据收集是通过电子病历审查执行登记和剩余期间住院的时间。绒毛膜羊膜炎是由组织病理学,桶在36周post-menstrual年龄是由生理的定义来定义的35和后期脓毒症定义为积极的血培养72 h后的生活。
额外的信息
如何引用这篇文章:拉尔,c V。等。在出生时呼吸道微生物。科学。代表。6,31023;doi: 10.1038 / srep31023 (2016)。
引用
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确认
我们要感谢Amit Gaggar博士,医学博士,博士的批判性回顾手稿,塔拉•麦克奈尔,柯林斯RN和莫妮卡,RN帮助IRB申请过程和临床数据采购、苏珊•罗伯茨RT和团队协助样本集合。以下是公认的支持的微生物资源在伯明翰阿拉巴马大学:医学院综合癌症中心(P30AR050948),艾滋病研究中心(5 p30ai027767),临床转化科学中心(UL1TR000165)和Heflin中心。NIH R01 HL129907 (NA -π,CL - I), NIH R01 HL092906 (NA-PI) U01 HL122626 (NA-PI) U10 HD034216 (WC-PI)。
作者信息
从属关系
贡献
C.V.L.构思的想法,计划项目,收集样本,分析数据,起草了最初的手稿,修订后的手稿提交和批准最终的手稿。上面,P.E. and C.M. assisted with the study design, acquisition of data, performed microbiome analysis and statistical analysis of the data, revised the manuscript and approved the final manuscript as submitted. C.T., Z.H.A., T.J., B.H., J.K., G.R., W.A.C., V.B. and N.A. assisted with the study design, acquisition of data, critically reviewed the manuscript and approved the final manuscript as submitted.
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拉尔,C。,Travers, C., Aghai, Z.et al。在出生时呼吸道微生物。Sci代表6,31023 (2016)。https://doi.org/10.1038/srep31023
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